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- 蒋珊瑚李茂茂蒋春梅
- 过表达整合素的人脐静脉内皮细胞及其应用
- 本发明公开了一种过表达整合素的人脐静脉内皮细胞及其应用。所述整合素为αvβ3；所述人脐静脉内皮细胞为人脐静脉内皮融合细胞。本发明利用整合素αvβ3表达量在正常原代或永生化HUVEC细胞1‑6倍范围的人脐静脉内皮细胞例如融...
- 杨新春林若虹赵金龙李晶华成佳兴许祥诚陈亮苗应波覃宏
- 高糖高脂促进人脐静脉内皮细胞间充质转化被引量：1
- 2024年
- 目的探究高糖高脂刺激对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)间充质转化的影响。方法将培养至第6代的HUVEC设为对照组(CON组),以常用的间充质转化诱导剂TGF-β1为阳性对照(TGF-β1组),给予33mmol/L高糖加0.1mmol/L棕榈酸模拟高糖高脂环境对HUVEC进行刺激为HG+HP组,显微镜下观察细胞形态变化。并通过免疫荧光、Western-blot法检测内皮细胞特异性的标记因子VE-Cadherin和CD31,以及平滑肌细胞特异性标记因子α-SMA和N-Cadherin等蛋白的表达情况。结果显微镜下观察发现,HUVEC经过TGFβ1培养处理72h后,细胞形态由饱满圆润的短梭形逐渐变成了长梭形,细胞间隙变大,与CON组相比有明显改变,而HG+HP组细胞形态与TGF-β1组相似。免疫荧光和Western-blot结果显示,与CON组相比,HG+HP组内皮细胞标记物VE-Cadherin和CD31表达量显著下降(P<0.05),而平滑肌细胞标记物α-SMA和N-Cadherin表达量显著上升(P<0.05)。结论高糖高脂刺激可以促进人脐静脉内皮细胞的间充质转化。
- 宁宇阳尧青徐魁刘超
- 关键词：高糖高脂糖尿病内皮功能障碍
- miR-486促人脐静脉内皮细胞内皮间质转化的机制研究
- 2024年
- 目的 探讨微小RNA-486(miR-486)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内皮间质转化(End MT)的影响及其调控机制。方法 常规培养HUVECs,并转染miR-486模拟物(mimic)及阴性对照(NC)质粒,实时荧光定量PCR测定miR-486表达;Western blot检测血管内皮细胞钙黏蛋白(VE Cadherin)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)、血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1)、纤连蛋白(FN)表达;免疫荧光染色检测细胞中CD31与α-SMA表达;Western blot检测磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路相关蛋白表达。使用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002与miR-486 mimic共作用于HUVECs,Western blot检测VE Cadherin、CollagenⅢ、CD31、α-SMA、FSP1、FN、PTEN及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达。通过生物信息学在线软件预测miR-486与PTEN的靶向结合位点,构建PTEN 3'UTR野生型(WT)及突变型(MUT)质粒载体,双荧光素酶报告基因实验检测miR-486对PTEN的靶向作用。结果 与Control组和miR-486 NC组比较,miR-486 mimic组HUVECs中miR-486表达升高(P<0.05),VE Cadherin、CD31表达降低(P<0.05),CollagenⅢ、α-SMA、FN表达升高(P<0.05),FSP1表达未发生变化(P>0.05)。免疫荧光结果显示,与Control组和miR-486 NC组比较,miR-486 mimic组HUVECs中CD31表达明显减弱(P<0.05),α-SMA表达明显增强(P<0.05);与Control组和miR-486 NC组比较,miR-486 mimic组HUVECs中PTEN蛋白表达显著降低(P<0.05),p-PI3K和p-AKT蛋白表达显著升高(P<0.05)。与miR-486 mimic组比较,miR-486 mimic+LY294002组PTEN蛋白表达显著升高(P<0.05),p-PI3K和p-AKT蛋白表达显著降低(P<0.05)。与miR-486 mimic组比较,miR-486mimic+LY294002组VE Cadherin、CD31表达显著升高(P<0.05),且CollagenⅢ、α-SMA、FN表达显著降低(P<0.05),FSP1表达未发生变化(P>0.05)。双荧光素酶报告基因分析结果显示,与转染miR-486 NC比较,转染miR-486 mimic能够有效抑制含PTEN原序�
- 吴桂霞蒋睿薛志琴施俊梅刘瑜蒋萍
- 关键词：人脐静脉内皮细胞
- 过表达vWF对人脐静脉内皮细胞生物学影响的实验研究
- 2024年
- 目的:探讨过表达血管性血友病因子(vWF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移、侵袭、凋亡及成管能力的影响。方法:设计构建5种过表达vWF的质粒CRISPRa载体,将HUVECs分为实验组(5组)与对照组。将5种质粒分别转染实验组细胞,Western blotting检测各组细胞vWF的表达效果,选取优势组。通过细胞增殖实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验、细胞凋亡实验、细胞成管实验等,观察过表达vWF对HUVECs增殖、迁移、侵袭、凋亡及成管能力的影响。Western blotting检测5个常见通路蛋白因子在2组细胞中的表达,探测可能相关的机制。结果:成功转染后各组HUVECs的vWF蛋白表达水平均明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。其中vWF-OE4组过表达量最高,故选取该引物序列进行后续实验。与对照组相比,vWF-OE组细胞增殖减慢,细胞划痕48 h迁移率降低、Transwell细胞侵袭率降低(P<0.05),细胞凋亡率、血管形成能力、HUVECs生成小管的长度均增高(P<0.05),JUN、P53蛋白含量均增高(P<0.05)。结论:过表达vWF对HUVECs增殖、迁移、侵袭行为具有显著抑制作用,促进凋亡,成管能力增强。
- 张龙飞陈世远冯奔驰刘德朗张秀杨高涌
- 关键词：布加综合征人脐静脉内皮细胞
- 蜂王浆水溶蛋白对高糖诱导人脐静脉内皮细胞的保护作用
- 2024年
- 目的研究蜂王浆水溶蛋白对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用及其机制。方法采用CCK-8法检测蜂王浆水溶蛋白对HUVEC细胞增殖活性的影响;酶标法检测蛋白对超氧化物歧化酶(SOD)分泌的影响;酶联免疫吸附法检测蛋白对肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-4(IL-4)分泌的影响;流式细胞术检测蛋白对活性氧分泌的影响;Hoechst-PI双染法检测蛋白对细胞凋亡及坏死的影响。结果高糖损伤的HUVEC经蜂王浆水溶蛋白处理后,细胞的形态明显改善,增殖活性提高,SOD分泌增加,清除活性氧的能力提高,TNF-α、IL-4的分泌减少,细胞凋亡减少,但对细胞坏死率无影响。结论蜂王浆水溶蛋白能抗高糖所致HUVEC的损伤,其机制可能与提高细胞抗氧化能力、减轻炎症反应有关。
- 冯彤彤张慧陈坤段鹏吉利伟高金花张晓峰郭洪梅
- 关键词：超氧化物歧化酶活性氧细胞坏死
- FAK抑制剂PF-562271减轻老化血小板诱导的人脐静脉内皮细胞损伤
- 2024年
- 目的探究FAK抑制剂对老化血小板诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法实验分为空白对照组、脂多糖(LPS)组、造模组(LPS+Plt)和FAK抑制剂PF-562271组(LPS+Plt+PF-562271)。通过Western blot和免疫荧光检测FAK、pFAK和PECAM-1的蛋白表达。流式细胞术检测HUVEC活性氧(ROS)含量。细胞通透性和跨内皮细胞电阻实验,检测HUVEC屏障功能的变化。RT-qPCR检测炎性因子mRNA表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液中,炎性因子的分泌情况。免疫荧光检测加入ROS抑制剂维生素C(Vit.C)后,PECAM-1的表达。结果脂多糖和老化血小板处理后,FAK、pFAK和PECAM-1的蛋白表达增高,加入PF-562271后,FAK、pFAK和PECAM-1的蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。流式细胞术结果显示,脂多糖和老化血小板可促进ROS的释放,而加入PF-562271后,ROS释放减少(P<0.001)。脂多糖和老化血小板导致内皮细胞屏障受损,PF-562271可缓解内皮细胞屏障功能的损伤(P<0.01)。脂多糖和老化血小板促进内皮细胞炎症因子TNF-α、IL-6、IL-8的表达,PF-562271可降低炎症因子的表达(P<0.05)。加入维生素C后,PECAM-1蛋白表达降低(P<0.01)。结论FAK抑制剂PF-562271可通过改善氧化应激水平和降低炎症反应,缓解脂多糖和老化血小板诱导的内皮细胞损伤。
- 白钰婷刚保才张梦洁万子雨刘国权顾玮
- 关键词：TRALIFAKPECAM-1人脐静脉内皮细胞
- 原代人脐静脉内皮细胞的分离及沉默长链非编码RNA效率验证
- 2024年
- 目的旨在优化分离原代人脐静脉内皮细胞(pHUVECs)技术,探索建立简便、高效和经济的沉默长链非编码RNA(lncRNA)的pHUVECs模型方法。方法实验所用脐带来自福建医科大学附属第一医院健康产妇剖宫产的新生儿脐带。使用胶原酶消化法分离pHUVECs,5%胎牛血清培养液[内皮细胞培养基(ECM)∶M199=1∶4]培养细胞。显微镜观察形态学及免疫荧光法检测pHUVECs特异性Ⅷ因子和CD31的表达。使用脂质体将不同浓度小干扰RNA(siRNA)-Fam转染pHUVECs,并设置CTL组、1 nmol/L siRNA-Fam组、10 nmol/L siRNA-Fam组、20 nmol/L siRNA-Fam组、50 nmol/L siRNA-Fam组、100 nmol/L siRNA-Fam组,倒置荧光显微镜观察各组荧光强度,筛选最佳siRNA转染浓度。设置CTL组、1μL RNAFIT组、3μL RNAFIT组、5μL RNAFIT组、10μL RNAFIT组,转染siRNA-SNHG8后,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测SNHG8表达,筛选最佳RNAFIT转染浓度。设置CTL组、阴性对照组、si-SNHG81#组、si-SNHG82#组、si-SNHG83#组、si-SNHG81+2+3#组。脂质体转染法将siRNA导入pHUVECs,分别培养24、48和72 h。RT-qPCR检测lncRNA SNHG8的表达。结果pHUVECs在培养48 h后呈典型的鹅卵石样排列。免疫荧光结果显示,Ⅷ因子和CD31呈阳性。与CTL组比较,50 nmol/L siRNA-Fam组荧光强度最高,差异有统计学意义(t=32.020,P<0.0001),5和10μL RNAFIT组SNHG8表达均较低,差异均有统计学意义(t=36.030、19.890,P均<0.0001)。50nmol/L siRNA和5μL RNAFIT转染pHUVECs 24h后,RT-qPCR结果显示,与CTL组比较,si-SNHG83#组及si-SNHG81+2+3#组沉默SNHG8的效率最高,差异均有统计学意义(t=13.950、4.606,P均<0.05);转染48及72 h后,与CTL组比较,si-SNHG81+2+3#组沉默SNHG8的效率较高,差异均有统计学意义(t=48.620、24.160,P均<0.0001)。转染48及72 h后,与si-SNHG83#组比较,si-SNHG81+2+3#组沉默SNHG8的效率较高,差异均有统计学意义(t=9.316、4.055,P均<0.05)。同时si-SNHG81+2+3#组转染后呈时间依赖性抑制SNHG
- 樊宗成马康源程小兵陈鑫林云钗王来成虞坚建张顺鹏彭峰
- 关键词：长链非编码RNA脂质体转染
- X射线对胃癌细胞和人脐静脉内皮细胞LOX家族成员的不同影响
- 2024年
- 目的比较不同剂量X射线对人低分化粘液样胃腺癌细胞MGC-803和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)赖氨酰氧化酶(LOX)家族成员的影响,为了解X射线辐射后不同细胞中基因和蛋白的改变提供依据。方法0、2、4、6、8和10 Gy剂量X射线辐射MGC-803和HUVEC细胞,用细胞增殖实验检测细胞致死率并计算细胞半数致死量(LD 50),确定后序测试剂量组;Realtime PCR、Western blot、ELISA及Amplex Red过氧化氢法分别检测辐射后细胞LOX家族成员mRNA丰度、蛋白相对量、分泌量及LOX酶活性变化;Western blot方法分析X射线辐射对细胞p-p38MAPK和p-Erk1/2MAPK影响。结果X射线辐射后的LD 50胃癌MGC-803为8.2 Gy,HUVEC为6 Gy,后序试验选用0、2、4和6 Gy剂量组。MGC-803细胞经各剂量X射线辐射后LOXL1、LOXL2和LOXL4的mRNA均下调,而LOX的mRNA上调(P<0.05);2 Gy组LOX和LOXL4的蛋白和酶分泌水平低于0 Gy组(P<0.05);4 Gy组LOX、LOXL1、LOXL2和LOXL4的蛋白和分泌低于0 Gy组(P<0.05);6 Gy组LOXL1的蛋白和分泌低于0 Gy组(P<0.05);但LOXL3的mRNA、蛋白和分泌在2 Gy组均高于0 Gy组(P<0.05)。HUVEC中,2 Gy组LOXL1和LOXL3的mRNA、蛋白和酶分泌水平均显著高于0 Gy组(P<0.05);4 Gy组LOX、LOXL1、LOXL3和LOXL4的mRNA、蛋白和酶分泌水平均较0 Gy组升高(P<0.05);6 Gy组LOXL2和LOXL4的mRNA、蛋白和酶分泌水平均较0 Gy组升高(P<0.05)。2 Gy和6 Gy组HUVEC的LOX酶活性增强(P<0.05)。MGC-803细胞的2 Gy和6 Gy组p-p38、p-p42、p-p44较0 Gy组上调(P<0.05);HUVEC经各剂量辐射p-p38、p-p42和p-p44均上调(P<0.05)。结论X射线辐射对两种细胞作用不同,一定剂量X射线辐射上调HUVEC的LOX及其家族成员的产生、分泌和酶活性,下调胃癌细胞MGC-803的除LOXL3外其他成员的产生和分泌。
- 王欣怡牛海亚邓红杨新燕刘一凡王凯博徐传皓韩梅
- 关键词：X射线胃癌细胞MAPK信号通路
- 降钙素基因相关肽对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的作用及其机制
- 2024年
- 目的探讨降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、迁移的作用及其机制。方法培养HUVECs,随机分为对照组(Control组)、CGRP组、VEGF抑制剂组(Bevacizumab组)、一氧化氮合成酶抑制剂组(L-NMMA组)。MTT法检测CGRP、贝伐珠单抗、L-NMMA对HUVECs增殖的影响;划痕实验测定HUVECs迁移情况;Western blot和细胞免疫荧光检测相关蛋白表达情况。结果CGRP与降钙素受体样受体(calcitonin receptor-like receptor,CRLR)结合能显著促进HUVECs增殖(t=3.434,P<0.05),抑制血管内皮生长因子(VEGF)或内皮型一氧化氮合酶(eNOS)能显著抑制CGRP诱导的HUVECs增殖,主要表现在HUVECs存活率(P<0.05)和内皮细胞标志物(P<0.05)的表达显著降低。划痕实验结果显示抑制VEGF或eNOS可显著抑制CGRP诱导的HUVECs迁移(P<0.05)。抑制VEGF或eNOS能显著降低与增殖密切相关的激酶Raf-1的表达(P<0.05),同时显著抑制其下游ERK(P<0.05)和JNK(P<0.05)信号通路激活。结论CGRP通过激活VEGF/eNOS-Raf-1-ERK/JNK信号通路诱导HUVECs增殖和迁移,抑制VEGF或eNOS可能是抗血管生成的潜在靶点。
- 王元会葛淑惠孙晨鸣
- 关键词：降钙素基因相关肽血管内皮生长因子一氧化氮内皮细胞增殖
