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一种别藻蓝蛋白免疫荧光探针的制备方法
本发明公开了一种别藻蓝蛋白免疫荧光探针的制备方法,通过可荧光法控制偶联位点数目,而且无需铜离子催化的叠氮‑炔环加成(SPAAC)反应的二级反应动力学常数可达到1;如此目标蛋白上能够稳定可控的结合所需数量的别藻蓝蛋白...
吴伟 崔涵 张薇
远红色别藻蓝蛋白的晶体学和生物化学分析以探讨超红移机理的研究
胆体(Phycobilisome,PBS)是一种多蛋白复合物,是(即细菌)和红中的主要外部天线系统,其外围杆状结构主要由藻蓝蛋白蛋白构成,多圆柱形的核心结构主要由别藻蓝蛋白(Allophycocyanin...
周丽娟
关键词:藻胆体
钝顶节旋别藻蓝蛋白基因克隆、分析及重组表达蛋白荧光活性的研究
2023年
为探究胆体核心色素蛋白-别藻蓝蛋白单个亚基的光学活性和功能,本研究克隆了钝顶节旋(Arthrospira platensis FACHB314)中的脱辅基别藻蓝蛋白基因apcAB及其亚基基因apcA和apcB。节旋基因组中apcAB全长共1056 bp,由apcA和apcB串联组成,中间间隔84 bp。其中,apcA和apcB基因的全长均为486 bp,且均编码161个氨基酸,预测分子量分约为17.39和17.33 kDa,它们分编码的α和β亚基均属于Globin_like超级家族,系统进化树分析显示其氨基酸序列在和节旋中较为保守。将克隆出的亚基基因apcA、apcB分同前期A.platensis FACHB314中获得的胆素合成相关基因ho和pcyA以及色基裂合酶基因(cpcE、cpcF、cpcU、cpcS、cpcT)共同转化至大肠杆菌中,获得重组别藻蓝蛋白亚基菌株E.coli HPEFUSTA、E.coli HPEFUSTB。SDS-PAGE和Western Blot均显示重组菌株中已成功表达别藻蓝蛋白单亚基。荧光检测结果显示,在600 nm波长激发下,两株重组菌株在640 nm处均出现了别藻蓝蛋白特征荧光发射峰。这些结果表明在重组大肠杆菌中表达的脱辅基别藻蓝蛋白的单亚基可以和胆素结合,形成有光学活性的别藻蓝蛋白,这为研究胆体的组装和功能提供有效的元件,为别藻蓝蛋白在医药、荧光检测方面的应用奠定了基础。
毕莹郭雅琳尚孟慧徐晓婷臧晓南
关键词:节旋藻
别藻蓝蛋白β亚基基因在莱茵衣中重组表达及其对光能传递的影响研究被引量:1
2023年
为了探究别藻蓝蛋白与类囊体膜光合系统之间的光能传递规律,及其与异源类囊体膜光合系统之间光能转移的可能性,本研究构建了含有钝顶节旋(Arthrospira platensis)的别藻蓝蛋白β亚基基因(apcB),及合成胆素的血红素氧化酶基因(ho)和铁氧还蛋白氧化还原酶基因(pcyA)的转化载体pHyg3-apcB-ho-pcyA,利用玻璃珠转化法将其导入莱茵衣中。聚合酶链式反应筛选验证阳性转化株,Southern Blot结果表明基因apcB、ho、pcyA成功转化入莱茵衣基因组中。而后将转化株与对照株均置于高光(50μmol·m^(-2)·s^(-1))和低光(25μmol·m^(-2)·s^(-1))条件、白光和绿光条件中培养,并检测别藻蓝蛋白β亚基的表达、总叶绿素含量、77 K低温荧光、光系统表观电子传递效率、生物量变化。结果显示:实时定量PCR分析和Western Blot检测表明外源基因apcB,pcyA和ho均在转基因株Cr-ApcBHP中得到了转录表达。高光和低光条件下光系统Ⅱ(PSⅡ)和光系统Ⅰ(PSⅠ)位置处的荧光峰均显著高于对照莱茵衣株CC-849,绿光中PSⅡ荧光峰(波长为690 nm)显著高于对照株;高光与低光和白光与绿光条件下转基因株的光系统Ⅱ的表观电子传递速率(ETRPSⅡ)值均高于对照株,但生物量并未见明显提高。这些结果表明转基因莱茵衣中可能存在自重组别藻蓝蛋白到光系统核心的光能传递,但是吸收的光能没有达到促进生物量积累的作用。本研究为利用重组表达蛋白提高异源类囊体膜的光合作用进行了尝试。
徐晓婷臧晓南章峰尚孟慧李瑞毕莹赵悦马艺宁
关键词:莱茵衣藻光能传递
一种别藻蓝蛋白荧光串联染料及其制备方法与偶联抗体的方法
本发明涉及免疫学技术领域,具体涉及一种荧光蛋白串联染料及其偶联单克隆抗体标记方法以及试剂盒。由两种荧光分子组成,将大分子蛋白染料APC作为供体、小分子有机染料为受体,两者通过共价键结合。该串联染料结合后,供体染料APC可...
郑慧敏钱近春夏继波
别藻蓝蛋白的纯化及Hg2+对其体外毒性研究
别藻蓝蛋白(Allophycocyanin,APC)作为胆体核心的主要成分,具有物理稳定性好、溶解性好、对环境无污染等优点。然而,由于目前APC的纯化方法操作复杂、成本高及其他蛋白质的存在,很难获得高纯度的APC。此外...
王星腾
关键词:别藻蓝蛋白分离纯化汞离子体外毒性
重组别藻蓝蛋白的超快能量传递过程
2021年
胆体是红、特有的光合作用捕光天线复合物。别藻蓝蛋白(APC)是组成胆体高效能量传递的核心结构的主要成分。本文以基因重组的别藻蓝蛋白(rAPC)的单体和三聚体为材料,通过稳态光谱、圆二色光谱以及超快时间分辨光谱研究了rAPC的结构构象和能量传递过程。结果表明,rAPC在测试条件下能保持和天然APC一致的光谱特性和活性构象;rAPC单体组装成三聚体后,其α^(84)PCB和β^(84)PCB可以组成激子色素对,通过激子分裂提高三聚体的能量传递效率;超快时间分辨光谱结果显示,在rAPC三聚体中,能量从620 nm传至650 nm的时间为300~600 fs,同时存在着19 fs的激子态的电子退相干过程。这些结果为揭示胆体的高效能量传递机制提供了数据基础。
甄张赫朱锐丹秦松秦松陈海龙翁羽翔李文军
关键词:别藻蓝蛋白瞬态光谱
一种能特异性识别藻蓝蛋白的人工结合蛋白及获取方法
一种能特异性识别藻蓝蛋白的人工结合蛋白,其氨基酸序列为:HMVDNKFNKEIVNAITEIHHLPNLNLEQRWAFIFSLFDDPSQSANLLAEAKKLNDAQAPKSGGGGSGGGGIGVDNKFNKEW...
袁丽杨苗韩丹翔胡强
文献传递
多管(Polysiphonia Urceolata)R-藻蓝蛋白别藻蓝蛋白吸收系数测定及胆体蛋白组成分析被引量:2
2021年
选用多维层析和非变性PAGE(Native-PAGE),从海生多管(Polysiphonia Urceolata)蛋白提取液中制备纯度符合光吸收系数测定要求的(R-PC)和(AP)蛋白。选用Bradford和Hartree-Lowry法,用牛血清蛋白和γ-球蛋白作标准蛋白,对R-PC、AP进行蛋白浓度测定,并根据Lambert-Beer Law求得其在各自特征吸收峰处的光吸收系数(K)。选用更适合于多亚基复合体蛋白定量、以γ-球蛋白作标准的Hartree-Lowry法所获得的蛋白(R-PE)、R-PC和AP的光吸收系数,建立了符合低浓度蛋白含量测定要求,可用特征吸收值(A)求得各蛋白含量比例的二元和三元线性方程组。蛋白组成分析表明:解离和完整胆体中R-PE、R-PC和AP物质的量比分为7~9∶1∶1和11~13∶1∶3,这种组成差应源于完整胆体中R-PC和AP的分子间相互作用,且有利于光能的高效单向传递。
台丹丹赵明日孙力
关键词:多管藻藻胆蛋白藻胆体蛋白定量
一种别藻蓝蛋白(APC)与Annexin V蛋白偶联方法
本发明公开了一种别藻蓝蛋白(APC)与Annexin V蛋白偶联方法,包括以下步骤:步骤1:Annexin V蛋白表达纯化:1.1:基因序列优化:查找人Annexin V蛋白的基因序列,将人Annexin V基因序列优化...
郭爱龙
文献传递

相关作者

陈华新
作品数:52被引量:35H指数:3
供职机构:中国科学院海洋研究所
研究主题:别藻蓝蛋白 重组别藻蓝蛋白 藻胆蛋白 脱辅基蛋白 藻蓝蛋白
秦松
作品数:230被引量:1,434H指数:19
供职机构:上海海洋大学
研究主题:基因工程 重组别藻蓝蛋白 藻类 雨生红球藻 海带
葛保胜
作品数:97被引量:89H指数:6
供职机构:中国石油大学(华东)
研究主题:重组别藻蓝蛋白 微藻 藻菌 小球藻 小球藻生长
姜鹏
作品数:97被引量:188H指数:8
供职机构:中国科学院海洋研究所
研究主题:浒苔 基因工程 海藻 藻胆蛋白 别藻蓝蛋白
左正宏
作品数:88被引量:339H指数:11
供职机构:厦门大学
研究主题:坛紫菜 三丁基锡 别藻蓝蛋白 斑马鱼 褐菖鲉