搜索到3397篇“ 反转录聚合酶链式反应“的相关文章
- 基孔肯雅病毒定量反转录聚合酶链式反应绝对定量检测方法的建立
- 2023年
- 目的建立检测基孔肯雅病毒实时荧光定量RT-PCR快检方法,为其实验室诊断与定量分析提供技术方法。方法基于基孔肯雅及其相近虫媒病毒基因组序列的系统比对分析,筛选、鉴定基孔肯雅病毒特异性核酸序列,并以人GAPDH基因为内参照,设计引物、探针,采用L9(34)正交实验确定最佳反应条件,建立基于TaqMan探针法的基孔肯雅病毒qRT-PCR快检方法,并详细分析所建立方法的灵敏度、特异度、重复性及覆盖面。以克隆的检测靶标核酸片段为阳性品,制作标准曲线,建立绝对定量方法。结果经系统优化,建立了基孔肯雅病毒实时荧光定量RT-PCR定性、定量检测方法,反应体系包括:基孔肯雅病毒、GAPDH内参照检测引物探针,RT/Taq酶混合液,反应缓冲液及阴阳性参考品。所建立方法与ECSA亚型ROSS株、IOL分支LR2006株,亚洲型181/25株以及2010东莞流行株均可获得阳性结果,而与所试其他18种黄病毒、甲病毒、布尼安属相近虫媒病毒无交叉反应,检测下限为580拷贝/mL。定量分析表明,在5.80×10^(2)~5.80×10^(10)拷贝/mL范围内,检测荧光信号值与模板浓度具备良好线性关系,其R^(2)=0.9995,扩增效率为E=0.91%。重复性实验表明,定量分析的批内变异系数为0.01~0.07,批间变异系数为0.03~0.11。结论建立了基孔肯雅病毒的实时荧光定量RT-PCR定性、定量快检方法,具备较高的特异度、灵敏度与覆盖面,为定性、定量分析提供了新的技术手段。
- 李春缘刘炅刘纪茹胡潇予曹孟涛陈月田靖任瑞文徐晓立
- 关键词：基孔肯雅病毒实时荧光定量RT-PCR
- 西藏环状病毒TaqMan反转录聚合酶链式反应方法的建立
- 2021年
- 目的建立一种灵敏、特异的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),用于快速、准确地检测西藏环状病毒(Tibet orbivirus, TIBOV)。方法收集GenBank数据库中全部TIBOV基因序列,利用Clustal X 2.1软件进行比对,根据分析结果选择TIBOV VP4基因保守区域设计特异性引物、探针;以体外转录的RNA为标准品,建立检测TIBOV的TaqMan RT-PCR方法,绘制荧光定量标准曲线;对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价。结果引物与探针具有良好的特异性,对多种虫媒病毒无交叉反应。检测反应灵敏度为1.0×10^(2)拷贝/反应,在1.0×10^(2~8)拷贝/反应模板范围内具有良好的扩增曲线,同一样品重复检测循环阈值(Ct)的变异系数均小于1.5%。对西藏自治区、云南省、湖南省和广东省采集的蚊虫样本进行筛查,结果均为阴性。TIBOV模拟样本检出率为100%。结论该方法灵敏度高、特异性强,可用于TIBOV的常规监测。
- 冯盼盼殷启凯赵洁荣付士红李樊何英许松涛梁国栋聂凯王环宇
- 关键词：实时荧光定量RT-PCR分子检测
- Koutango病毒TaqMan反转录聚合酶链式反应方法的建立被引量：3
- 2020年
- 目的建立Koutango病毒(KOUTV)的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法。方法从GenBank中下载KOUTV基因序列,进行多序列比对分析,针对NS5基因中的高保守序列片段设计KOUTV的特异引物与探针,用4科9种病毒进行检测方法特异性验证,通过平行重复实验验证检测方法稳定性,利用体外转录的RNA标准品建立了KOUTV的NS5基因拷贝数的绝对定量分析模型。结果引物与探针工作特异性良好,同一样品重复检测循环阈值(Ct)的变异系数均小于1.5%,定量分析模型灵敏度达到1.0×10^2拷贝/反应。通过本研究建立的快速检测方法对新疆采集的112批,6328只蚊虫进行了测定,结果均为阴性。结论成功建立了KOUTV的高特异性、高敏感性的TaqMan RT-PCR检测方法,可应用于实验室和临床诊断。
- 殷启凯陈晓菁付士红刘文婧李樊雷雯雯何英许松涛梁国栋聂凯王环宇
- 关键词：分子检测
- 甘蔗条纹花叶病毒实时荧光反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测方法
- 本标准规定了甘蔗条纹花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus)实时荧光反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法的仪器与设备、试剂与材料、样品的采集与前处理、检测以及结果判断与表述等。本标准...
- 实时荧光反转录聚合酶链式反应检测甲型H1N1流感病毒RNA被引量：4
- 2017年
- 目的 快速准确检测甲型H1N1流感病毒,提高流感亚型鉴别诊断水平.方法 采用实时荧光反转录聚合酶链式反应（real-time FQ RT-PCR）检测385例流感患者鼻咽拭子标本和血浆H1N1-RNA.结果 68例患者鼻咽拭子甲型H1N1-RNA阳性率为17.66%,治疗第3、5、7天后甲型H1N1流感患者鼻咽拭子甲型H1N1-RNA阳性阴转率分别为20.51%、66.67%和91.02%,鼻、咽拭子标本检测H1N1-RNA有差异（P〈0.01）,血浆H1N1-RNA检出1例阳性.结论 real-time FQ RT-PCRneng能快速准确检测甲型H1N1流感病毒核酸,有利于早期治疗和疫情控制.
- 王晓东王然李凤焕陈兆拮
- 关键词：聚合酶链式反应反转录流感病毒A型
- 一种用于反转录聚合酶链式反应试剂盒的阳性对照组合物及其制备方法
- 本发明提供了一种用于反转录聚合酶链式反应试剂盒的阳性对照组合物及其制备方法，其特征在于以一种非靶病毒作为阳性对照，同时设计一对引物，进行扩增，扩增的片段长度与反转录聚合酶链式反应试剂盒的目的基因的长度相同；非靶病毒用异硫...
- 孙明陈西钊乔明明赵铁柱田克恭
- 文献传递
- 一种用于反转录聚合酶链式反应试剂盒的阳性对照组合物及其制备方法
- 本发明提供了一种用于反转录聚合酶链式反应试剂盒的阳性对照组合物及其制备方法，其特征在于以一种非靶病毒作为阳性对照，同时设计一对引物，进行扩增，扩增的片段长度与反转录聚合酶链式反应试剂盒的目的基因的长度相同；非靶病毒用异硫...
- 孙明陈西钊乔明明赵铁柱田克恭
- 猪传染性胃肠炎多重反转录聚合酶链式反应检测方法
- <B>猪传染性胃肠炎多重反转录聚合酶链式反应检测方法。酶联免疫法需要制备抗体，周期较长；外界影响因素对酶联免疫法诊断方法的干扰性比较大。本发明分为猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒基因引物设计与合成、猪传染性胃肠炎病毒...
- 郑世民赵良友刘超男高雪丽吕晓萍
- 文献传递
- 国境口岸蚊类携带乙型脑炎病毒反转录聚合酶链式反应检测方法
- 本标准规定了国境口岸蚊类携带的乙型脑炎病毒的检测对象、生物安全要求、检测方法、结果报告
及处置。
本标准适用于对口岸蚊类携带的乙型脑炎病毒的检测及报告。
- 关键词：国境口岸蚊类乙型脑炎病毒聚合酶链式反应进出口商品检验
- 文献传递
- 一种含持家基因的双重反转录聚合酶链式反应方法
- 一种含持家基因的双重反转录聚合酶链式反应方法。设计引物使目标基因扩增产物比持家基因扩增产物解链温度低，或目标基因引物比持家基因引物解链温度高，通过控制前期循环的变性温度或退火温度，使持家基因扩增流产而目标基因经扩增得到富...
- 徐定邦谢文凯府雷宇
- 文献传递
