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斑马鱼脊椎成骨细胞系的建立: 2024年; 为建立斑马鱼(Danio rerio)成骨细胞系,将4月龄斑马鱼脊椎剪成2~3 mm^(3)的组织块,置于含有鲤(Cyprinus carpio)血清、表皮细胞生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、L-谷氨酰胺及胎牛血清的M-199培养基中,28℃下用组织块贴壁培养法进行原代成骨细胞培养,用染色体核型鉴定、胞外基质蛋白检测、基因表达及流式RNA原位杂交(RNA-FISH)分析鉴定成骨细胞系。结果显示:已成功构建斑马鱼脊椎成骨细胞系,并传代至40代,生长迅速稳定,复苏状态良好。细胞系中期分裂相的染色体数目2n=50,核型公式(2n=10m+30sm+10st,NF=90),与斑马鱼染色体核型一致。斑马鱼成骨细胞碱性磷酸酶、茜素红矿化结节染色及von Kossa氏矿化结节法染色均呈阳性。鱼骨钙素含量为47619 ng/L。细胞系中成骨细胞发育标志基因runx2a、bglapl和alp的表达量显著高于斑马鱼肌肉组织。流式RNA-FISH检测结果表明,98%以上的成骨细胞均表达sp7。结论:本研究成功建立了斑马鱼脊椎成骨细胞系,可为骨骼发育及骨相关疾病的机制研究提供体外研究的实验材料。; 闫婷刘天奇佟广香徐欢张婷婷匡友谊; 关键词：斑马鱼成骨细胞细胞系

二氢杨梅素通过Nrf2/HO-1信号通路抑制地塞米松诱发的成骨细胞系MC3T3-E1细胞铁死亡: 2024年; 目的研究二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对通过地塞米松(dexamethasone,DEX)诱发的人成骨细胞系MC3T3-E1细胞铁死亡的影响,同时探讨其机制。方法使用α-MEM培养基用来对MC3T3-E1细胞进行培养。实验分为对照组、DEX(10μmol·L-1)组、DMY(20μmol·L-1)组、DEX+DMY组、铁死亡诱导剂RSL3组、DEX+DMY+RSL3组、核因子E2相关因子-2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)抑制剂ML385(5μmol·L-1)组、DEX+DMY+ML385组。噻唑兰(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)法用来完成检测细胞活力。采用试剂盒检测细胞内总铁和二价铁的水平,丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平。通过透射电镜检测MC3T3-E1细胞的超微结构。谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX-4)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)以及Nrf2蛋白的表达通过Western blotting检测。结果与DEX组比较,DEX+DMY组MC3T3-E1细胞的细胞活力、GSH浓度以及GPX4蛋白的表达显著增加(P<0.05),细胞线粒体损伤的情况明显减轻,细胞中总铁离子、二价铁离子、ROS以及MDA的水平显著降低(均P<0.05)。与DEX+DMY组比较,DEX+DMY+RSL 3组MC3T3-E1细胞的细胞活力显著降低(P<0.05)。与DEX组比较,DEX+DMY组Nrf2在细胞核中的表达水平、Nrf2在细胞核中表达与Nrf2总蛋白表达的比值、HO-1的蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05)。与DEX+DMY组比较,DEX+DMY+ML385组MC3T3-E1细胞的细胞活力、GSH浓度显著降低(P<0.05),细胞中总铁离子、二价铁离子、ROS和MDA的水平均显著升高(P<0.05)。结论DMY抑制了DEX诱发的成骨细胞的铁死亡,其机制可能是通过Nrf2/HO-1信号通路实现的。; 赵其辉周湘华唐东华周寿红; 关键词：二氢杨梅素成骨细胞地塞米松

人胎儿成骨细胞系hFOB1.19在骨组织工程中的应用: 2023年; 背景:现阶段广泛使用的动物成骨细胞模型的生物学特性与人细胞差距较大;原代人成骨细胞分离培养难提纯、培养代次有限;骨肉瘤细胞有异常生长的风险,都不能完全满足研究需求。1995年,有研究利用猴空泡病毒40转染了人胎儿四肢细胞,筛选得到一组具有分化为较早期成骨祖细胞——永生化人成骨细胞系hFOB1.19。目的:综述hFOB1.19的基本特性、培养方法及作为骨组织工程材料细胞模型的应用。方法:在中国知网、万方数据、SinoMed、PubMed、Web of Science、Medicine及Cochrane Library数据库中查找从1995年至2022年5月的相关文献,中文检索词为“人胎儿成骨细胞系1.19、人成骨细胞系、永生化细胞、猴空泡病毒40、骨组织工程、骨替代材料、生物材料研究”,英文检索词为“hFOB1.19,Human osteoblast cell line,Immortalized cells,Monkey vacuolating virus 40,Bone tissue engineering,Bone substitute materials,Biomaterials research”,筛选后得到73篇文献进行综述。结果与结论:(1)hFOB1.19在形态、表型、核型、生物学特性及分化潜能方面与体内成骨细胞高度相似,拥有快速且稳定的生长能力。(2)hFOB1.19已广泛应用于细胞黏附、增殖、分化、矿化、基因表达及蛋白合成方面,以检验骨组织工程材料的生物相容性及成骨性能。(3)hFOB1.19能够弥补动物细胞来源不同、骨肉瘤细胞异常增殖可能、原代成骨细胞分离难及传代次数少的缺点,在骨组织工程实验应用中性能稳定,增殖良好,但因培养条件特殊,细胞传代次数有限及生物安全性等方面的问题,目前在骨组织工程材料领域应用尚且不够广泛。(4)当前,骨组织工程材料发现速度快,但开发过程中缺乏系统全面的研究体系及统一的研究标准,文章总结hFOB1.19在不同研究中的应用,旨在为研究者们提供方法选择引导并推动相关标准完善。; 王彦阳徐普; 关键词：永生化细胞骨组织工程骨替代材料

车叶草苷在成骨细胞系MC3T3-E1增殖与分化的应用: 本发明涉及车叶草苷的新用途，具体是车叶草苷在成骨细胞系MC3T3‑E1增殖与分化中的应用。本发明通过体外实验和分子生物学实验证明了车叶草苷可以促进MC3T3‑E1细胞增殖与分化，使ALP活性增高，上调OPG/RANKL的...; 张春芳王艳张朋新孙美玉季佳霖贾文婷贺军

利培酮通过影响Wnt/β-catenin信号通路诱导人成骨细胞系hFob1.19凋亡被引量：3: 2023年; 目的探讨利培酮对人成骨细胞系hFob1.19凋亡的影响,并进一步分析其基于Wnt/β-catenin信号通路的分子机制。方法将hFob1.19细胞分为对照组、利培酮干预组(0、5、20、40、60、80、100和120μmol/L)。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞测量术检测细胞凋亡率;RT-qPCR及Western blot检测细胞BCL-2、MCL-1、BAX以及β-catenin基因及蛋白表达水平。结果1)与对照组相比,利培酮组细胞活力呈剂量和时间依赖性下降(P<0.05),而细胞凋亡率呈剂量依赖性增加(P<0.05)。2)与对照组相比,利培酮组促凋亡基因BAX水平升高,而抗凋亡基因BCL-2、MCL-1水平降低,同时β-catenin的基因表达降低(P<0.01)。3)与对照组相比,利培酮组促凋亡蛋白BAX、cleaved caspase-3水平升高,而抗凋亡蛋白BCL-2、MCL-1水平降低,同时β-catenin蛋白表达降低(P<0.01)。4)与对照组相比,利培酮组的β-catenin蛋白在细胞核和细胞质表达均降低(P<0.05)。结论利培酮可以诱导hFob1.19细胞凋亡,其机制可能与利培酮抑制β-catenin表达水平以及抑制β-catenin向核内转移从而导致抗凋亡蛋白质和促凋亡蛋白质平衡被打破相关。; 庞兰李佩璠郑蕾王艺明; 关键词：利培酮成骨细胞 Β-CATENIN

miR-295抑制高糖诱导的小鼠成骨细胞系MC3T3-E1的凋亡被引量：1: 2021年; 目的探讨微小RNA(miR)-295对高糖诱导的小鼠成骨细胞系MC3T3-E1凋亡的影响及其机制。方法将MC3T3-E1细胞分为对照(Ctrl)组、高糖(HG)组(以22 mmol/L葡萄糖诱导培养)、(HG+miR-control)组(转染miR-control后高糖诱导)和(HG+miR-295)组(转染miR-295模拟物后高糖诱导);实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MC3T3-E1细胞中miR-295表达水平;噻唑蓝(MTT)法检测MC3T3-E1细胞存活率;流式细胞测量术检测MC3T3-E1细胞凋亡率;免疫印迹法检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白β连环蛋白(β-catenin)、Dickkopf同源物1(DKK1)、c-Myc和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测miR-295和DKK1的靶向关系。结果与对照组比较,HG组MC3T3-E1细胞中miR-295表达水平、细胞存活率和β-catenin、c-Myc及Bcl-2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),而细胞凋亡率和DKK1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与(HG+miR-control)组比较,(HG+miR-295)组MC3T3-E1细胞中miR-295表达水平、细胞存活率和β-catenin、c-Myc、Bcl-2蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),而细胞凋亡率和DKK1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。Dkk1可能是miR-295的靶基因。结论miR-295可能通过下调DKK1表达激活Wnt/β-catenin通路来抑制高糖诱导的成骨细胞系MC3T3-E1的凋亡。; 曲野刘立柱徐瑞敏吴开弟代伟宏; 关键词：成骨细胞凋亡

转化生长因子β和骨形成蛋白2联合诱导小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞的增殖与分化被引量：4: 2021年; 背景:生长因子是骨组织形成、改建、修复的关键要素之一,多种生长因子联合诱导骨干细胞成骨分化相较于单一生长因子具有一定的优势,但是何种类型的联合、什么样的浓度组合才能发挥最佳的诱导作用?目前该方向研究较少。目的:探索转化生长因子β和骨形成蛋白2联合诱导对小鼠MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响。方法:将不同质量浓度的转化生长因子β和骨形成蛋白2与小鼠MC3T3-E1细胞混合诱导培养,共设置6个组,含1个对照组和5个实验组。在不同时间点进行检测,MTT法检测细胞的增殖情况;实时定量RT-PCR检测Runx2、骨钙素基因表达;碱性磷酸酶染色观察成骨细胞活性及功能状态;茜素红染色观察钙结节形成的数量。结果与结论:①转化生长因子β和骨形成蛋白2单独或联合使用时,都可以明显促进小鼠MC3T3-E1细胞增殖,促进Runx2、骨钙素基因的表达,增加碱性磷酸酶活性及矿化能力(P<0.05);②两者联合使用时,在实验浓度范围内促成骨效果与浓度正相关,低浓度的联合能达到或优于单独使用的效果,联合质量浓度为1μg/L转化生长因子β+100μg/L骨形成蛋白2是最优组;③提示转化生长因子β和骨形成蛋白2单独或联合诱导均能明显促进小鼠MC3T3-E1细胞增殖分化及成骨作用,二者联合诱导在增殖、分化的不同阶段既各自侧重又相互协同;在此次实验浓度范围内,1μg/L转化生长因子β+100μg/L骨形成蛋白2联合组为最优促进效果。; 周武王彬娉王雅雯程亚楠黄谢山; 关键词：MC3T3-E1细胞转化生长因子Β 骨形成蛋白2 成骨细胞分化

IL-17A对成骨细胞系MC3T3-E1细胞中明胶酶表达的影响及其作用机制: 2020年; 目的检测IL-17A对MC3T3-E1细胞中明胶酶表达的影响,并探讨其作用机制。方法采用小鼠重组细胞因子IL-17A作用于MC3T3-E1细胞,通过Real-time PCR和ELISA分别检测MMP-2及MMP-9在mRNA水平及蛋白水平上的表达情况;通过免疫荧光和Western Blot检测NF-κB的磷酸化水平的变化,并通过使用NF-κB阻断剂检测其在MMP-9表达中的影响。结果IL-17A在mRNA水平及蛋白水平上均上调MMP-9的表达(P<0.01),然而对MMP-2的表达无明显影响;IL-17A促进转录因子NF-κB的磷酸化水平(P<0.01);阻断NFκB的活性可减弱IL-17A对MMP-9的上调作用(P<0.05);IL-17A对MC3T3-E1细胞中TIMP-1及TIMP-2的表达没有影响。结论IL-17A可以通过激活NF-κB促进MC3T3-E1细胞分泌MMP-9。; 杜欣远宋岩徐璐纪雨含蒋天姿石塔拉宓伟; 关键词：明胶酶 MC3T3-E1

3D打印钛合金多孔材料对体外成骨细胞系MC3T3-E1的生物安全性被引量：2: 2020年; 目的利用电子束熔融成型技术(EBM)3D打印钛合金多孔支架材料,检测其对成骨细胞(OB)的生物安全性。方法打印3种拓扑单元结构的多孔钛合金材料(2.0、2.25及2.5 mm的Dode-Medium单元结构),制备各组材料在多个时间点的浸提液(浸泡时间设24、48、72、96 h),并将浸提液用于成骨细胞系MC3T3-E1的体外培养。通过MTT实验,计算成骨细胞的相对增殖率(RGR);通过苏木精-伊红(HE)染色,形态学观察成骨细胞的生长状态;通过碱性磷酸酶(ALP)测定,分析成骨细胞的分化活性;通过免疫荧光染色,观察成骨细胞中I型胶原(ColⅠ)的表达水平。结果在各组材料浸提液孵育下,成骨细胞贴壁牢固、增殖活跃,生长状态良好。与DMEM孵育的阴性对照组比较,各材料浸提液组成骨细胞的相对增殖率无显著性差异;与DMSO孵育的阳性对照组比较,各材料浸提液组成骨细胞的相对增殖率显著升高(P<0.01);各组材料浸提液的细胞毒性程度评估均≤1。与DMEM孵育的阴性对照组比较,各材料浸提液组成骨细胞的ALP活性与ColⅠ含量均无显著性差异;与DMSO孵育的阳性对照组比较,各材料浸提液组成骨细胞的ALP活性与ColⅠ含量均显著升高(P<0.01)。结论以EBM技术3D打印钛合金多孔材料,其浸提液不会影响成骨细胞的体外增殖与分化,即具有良好的生物安全性。; 景丽史文曹雨刘瑞赛刘璐李建宇刘辉; 关键词：钛合金 3D打印多孔材料生物安全性

牛膝甾酮对大鼠原代成骨细胞及小鼠成骨细胞系MC3T3--E1增殖分化影响的研究: 目的：　　研究牛膝甾酮对大鼠原代成骨细胞及小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞增殖及成骨细胞分化相关因子OCN、OPG、OPN、CollagenⅠ、ALP表达的影响，探索牛膝甾酮对成骨细胞增殖和分化的作用机制，为临床应用牛...; 黄永青; 关键词：骨质疏松成骨细胞细胞分化; 文献传递

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