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- 一种突变的核糖核酸酶R及其应用
- 本发明提供一种突变的核糖核酸酶R(RNase R)及其应用。本发明通过对大肠杆菌核糖核酸酶RNase R位点突变进行创造性地选择和筛选,提供了10种突变的核糖核酸酶R,获得相对于亲本酶活显著提高的突变体T495E、A24...
- 左涛刘立汪芸王鹏源王满朝
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- 一种牛胰核糖核酸酶突变体及其构建方法和应用
- 一种牛胰核糖核酸酶突变体及其构建方法和应用,包括野生型和突变型牛胰核糖核酸酶基因表达载体的构建;将载体转入大肠杆菌感受态细胞,获得表达产物;Ni2+层析柱纯化野生型和突变体牛胰核糖核酸酶并筛选高酶活突变体,突变体酶活达到...
- 穆冬冬张小翠艾雅倩马天鸽金大卫洪泂吴晓磊李兴江
- 激活式核糖核酸酶靶向嵌合体及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种激活式核糖核酸酶靶向嵌合体及其制备方法和应用,包括激活式核糖核酸酶招募基团和RNA靶向基团,激活式核糖核酸酶招募基团通过连接臂偶联RNA靶向基团。本发明的激活式核糖核酸酶靶向嵌合体是一种新的靶向G4的诱导...
- 蒋健晖张媛汪凤林楚霞唐丽娟
- 一种解淀粉芽孢杆菌来源的核糖核酸酶突变体及其构建方法
- 一种解淀粉芽孢杆菌来源的核糖核酸酶突变体及其构建方法,包括Barnase重组表达载体的构建:利用电转化技术,将重组载体pNZ8048‑SP<Sub>usp45</Sub>‑Ban‑Bas导入感受态乳酸乳球菌中,构建野生型...
- 穆冬冬 艾雅倩 孙天择吴学凤李兴江
- 核糖核酸酶抑制因子在肝内胆管细胞癌中的表达及意义
- 何超
- 猪链球菌2型核糖核酸酶Ⅲ的克隆表达及催化特性分析
- 2024年
- 为了研究猪链球菌2型(SS2)核糖核酸酶Ⅲ(RNaseⅢ)的催化特性,利用大肠杆菌BL21(DE3)异源表达猪链球菌2型RNaseⅢ(SS-RNaseⅢ)并通过镍柱亲和层析的方法分离纯化。异源表达研究显示,重组蛋白RNaseⅢ大部分为可溶性表达;催化特性研究显示,RNaseⅢ主要依赖Mg^(2+)或Mn^(2+)发挥催化功能,并在不同离子浓度和pH值环境下具有不同的催化活性;底物特异性研究显示,RNaseⅢ特异性切割长度为30 bp的双链RNA,同时对内源性的rnc mRNA和5S rRNA具有良好的特异性。上述结果表明,相较于其他细菌RNaseⅢ,SS-RNaseⅢ具有独特的催化特性,为深入理解RNaseⅢ如何介导SS2致病机制奠定了基础。
- 孙文张永毅陆畅朱德文尹媛媛徐泉明陈叶
- 关键词:猪链球菌2型原核表达
- 嗜酸性粒细胞相关核糖核酸酶A家族成员2参与狼疮小鼠肾脏损害的机制研究
- 2024年
- 目的通过嗜酸性粒细胞相关核糖核酸酶A家族成员2(Ear2)髓系细胞条件性敲除小鼠探讨其在狼疮发病中的作用及参与肾脏损害的可能机制。方法利用规律间隔成簇短回文重复序列关联基因9(CRISP/Cas9)技术构建Ear2髓系细胞条件性敲除小鼠模型,应用PCR鉴定小鼠基因型。实验分为3组:CKO+R848组,对照+R848组,对照组。R848处理敲除鼠和同型对照鼠,评估小鼠狼疮样病变发生情况。荧光实时定量PCR法检测小鼠肾脏中Toll样受体(TLR)7/8和炎症因子的表达。流式细胞术检测狼疮小鼠肾脏中巡逻单核细胞(PMOs)的比例,免疫荧光法分析Ear2和PMOs在肾组织中的空间分布。R848体外刺激条件性敲除(CKO)和对照小鼠的骨髓细胞,流式细胞术检测PMOs比例变化。采用单因素方差分析对3组进行比较。结果髓系细胞条件敲除Ear2小鼠构建后PCR显示基因型为Lyz2^(ki/wt)Ear2^(fl/fl),敲除鼠骨髓细胞中Ear2 mRNA水平显著下调[(1.03±0.26)与(0.22±0.15),t=6.65,P<0.001]。与对照+R848组相比,CKO+R848组小鼠狼疮表型得到改善,生存率有上升趋势(6/10与7/8,χ^(2)=1.51,P=0.220),病理结果提示CKO+R848组小鼠肾脏病变减轻。CKO+R848小鼠肾脏组织中TLR7表达水平降低[(1.02±0.09)与(0.53±0.04),t=5.13,P=0.003],同时PMOs浸润减少[(62.00±3.38)%与(52.36±0.68)%,t=2.80,P=0.023],免疫荧光结果显示Ear2和PMOs在肾组织共定位。体外R848刺激引起对照组PMOs比例的增多[(3.99±0.59)%与(33.48±1.38)%,t=-33.84,P<0.001],敲除Ear2可以抑制TLR7引起的PMOs的增多[(14.33±1.72)%与(16.10±1.44)%,t=-1.37,P=0.220]。结论Ear2条件性敲除可减轻狼疮小鼠发病,尤其是肾脏损害。其机制与抑制TLR7通路激活、减少PMOs局部浸润有关。
- 郑媛媛唐小军章雅琦米合热阿依·阿布都克尤木朱延通李文静冯学兵
- 关键词:TOLL样受体7