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- 一种猪丹毒杆菌及其应用、疫苗和疫苗效力评价方法
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- 王秀丽余兴龙刘燕赵墩刘元杰李建王琦
- 猪丹毒杆菌SpaA单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定
- 2024年
- 旨在制备猪丹毒杆菌单克隆抗体,并确定其识别的抗原表位。采用原核表达、细胞融合试验、间接ELISA、亚克隆技术、Western blot、抗原表位以及抗体分型鉴定来研究猪丹毒杆菌表面保护性抗原A(SpaA)的单克隆抗体。结果:制备了SpaA重组蛋白,得到4株稳定分泌的单抗,且这4株单抗均能与SpaA蛋白发生特异性反应,其中1E8、5B3杂交瘤细胞培养上清液抗体效价为1∶1600,5B5、9B5杂交瘤细胞培养上清液抗体效价为1∶3200;1E8重链为IgG 2b,5B3、9B5重链为IgG 1,5B5重链为IgG 2a,轻链均为Kappa;1E8、5B5识别的抗原表位因SpaA蛋白C端的重复序列无法确认,5B3识别的抗原表位为258~267 aa,9B5识别的抗原表位为462~472 aa。综上,本研究制备的单克隆抗体将为猪丹毒杆菌ELISA检测方法的建立奠定基础。
- 黄雅琴蔡金双缪芬芳李玉峰
- 关键词:猪丹毒杆菌原核表达单克隆抗体
- 猪丹毒杆菌SpaA优势表位的串联表达及其免疫效果分析
- 2024年
- 构建串联SpaA优势表位的猪丹毒亚单位疫苗,对其免疫原性进行研究。将猪丹毒杆菌表面保护抗原A优势表位串联表达,提取并经亲和层析纯化获得重组蛋白,制备亚单位疫苗,分别免疫小鼠和猪,21日后攻毒。成功制备串联SpaA优势表位的猪丹毒亚单位疫苗,2μg重组蛋白可为小鼠抵抗1000MLD强毒攻击提供100%保护,100μg重组蛋白可为猪抵抗1MLD强毒攻击提供100%保护,可为猪抵抗2MLD强毒攻击提供67%保护。串联SpaA优势表位的猪丹毒亚单位疫苗具有良好的免疫原性。
- 李建张一帜李俊平王秀丽刘元杰李旭妮王甲彭国瑞张媛刘燕
- 关键词:优势表位猪丹毒免疫原性攻毒保护
- 一株猪丹毒杆菌的分离鉴定及其对小鼠的致病性研究被引量:2
- 2024年
- 为确定湖南省某猪场猪只发病死亡的病原,从送检猪组织中分离纯化获得1株革兰阳性菌,通过生化鉴定及16S rDNA测序对分离菌进行了鉴定,药敏试验验证分离菌的耐药性,并进一步测序分析了其毒力因子基因的遗传变异;最后通过动物试验研究了分离菌对小鼠的致病性。结果显示,分离菌呈针尖大小、半透明,生化鉴定为猪丹毒杆菌。药敏试验结果显示该分离株对青霉素、苯唑西林、氨苄西林等15种抗生素敏感。分离株16S rDNA序列与猪丹毒疫苗株G4T10的同源性为100%;与G4T10株相比,spaA基因高突变区存在4个突变位点,分别是A509C、C510A、A924C和C925T,相对应的氨基酸有3个突变位点,包括P170H、D308E和F309L,而其他毒力因子基因包括神经氨酸酶基因、荚膜多糖A、B和C基因序列则无变化。小鼠攻毒试验显示,当剂量为1.466×10^(3)CFU或更高时,小鼠呈全身败血症病理变化,死亡率100%,说明该菌株毒力较强;从死亡小鼠各脏器组织中可分离到与分离株形态特征一致的菌株。本研究成功分离鉴定了1株毒力较强的猪丹毒杆菌,为湖南省猪丹毒的流行病学及致病性提供了参考。
- 刘武函胡巧云董尚坤唐小明王卫国彭志谢怡灵张坤王昌建范仲鑫杨青
- 关键词:猪丹毒杆菌生化特征
- 一种串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A及其应用
- 本发明属于生物技术领域,具体涉及一种串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A(surface protective antigen A,SpaA)及其应用。该串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A的氨基酸序列如SE...
- 李建张一帜张媛李俊平王秀丽刘元杰李旭妮王甲彭国瑞
- 无ASFV及PCV-2的猪丹毒杆菌培养基、其制备方法及应用
- 本发明提供了一种无ASFV及PCV‑2的猪丹毒杆菌培养基、其制备方法及应用,属于动物疫苗生产技术领域。该培养基包括:磷酸氢二钠10g/L,磷酸二氢钾3g/L,氯化钠5g/L,酵母粉15g/L,胨类混合物30g/L,纯化水...
- 陈辰王宇陈坤孙晋超宋秀梅李秀辉杨飞杨阳郇春燕刘超张桐
- 一种重组猪丹毒杆菌表面抗原SpaA蛋白及其应用
- 本发明公开了一种重组猪丹毒杆菌表面抗原SpaA蛋白及其应用,该重组猪丹毒杆菌表面抗原SpaA蛋白的编码基因采用具有高度保守性的野生型序列,具备良好的安全性、免疫原性、跨血清型保护效果,可产生具有足够免疫保护力抗体,对于猪...
- 张一帜张媛李建李俊平冯妍王秀丽刘元杰李旭妮王甲任小侠
- 抗猪丹毒杆菌表面抗原SpaA蛋白单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了抗猪丹毒杆菌表面抗原SpaA蛋白单克隆抗体及其应用,本发明提供一种抗猪丹毒杆菌表面抗原SpaA蛋白单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO.45350杂交瘤细胞分泌。本发明基于所述的单克隆抗体和表达的重组猪丹毒杆...
- 张媛王甲李俊平张一帜李建赵浩然李巧玲王秀丽刘元杰李旭妮
- 一种串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A及其应用
- 本发明属于生物技术领域,具体涉及一种串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A(surface protective antigen A,SpaA)及其应用。该串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A的氨基酸序列如SE...
- 李建张一帜张媛李俊平王秀丽刘元杰李旭妮王甲彭国瑞
- 猪丹毒杆菌表面抗原SpaA的原核表达纯化及免疫原性验证被引量:2
- 2023年
- 本研究制备了一种具备优良免疫原性的猪丹毒杆菌表面抗原重组蛋白。采用基因调取的方式,构建质粒并亚克隆到表达载体pET28a上,进一步将改造质粒转化到大肠杆菌感受态BL21细胞中,构建了1株猪丹毒SpaA全基因重组表达菌株。之后通过IPTG诱导表达、镍离子层析柱分离纯化、梯度透析获得高纯度重组SpaA蛋白。经免疫攻毒试验验证,重组SpaA蛋白能够有效保护小鼠和猪免于猪丹毒杆菌强毒攻击,其中小鼠的重组SpaA蛋白最小免疫剂量为每只2.0μg,100μg的重组SpaA蛋白能够保护猪免于猪丹毒杆菌强毒株感染。以重组SpaA蛋白作为组分与猪多杀性巴氏杆菌病活疫苗共同免疫小鼠,结果显示该混合疫苗对于猪丹毒杆菌及猪多杀性巴氏杆菌均有良好的保护效果。本研究结果证实,重组SpaA蛋白是我国现行猪丹毒杆菌传统灭活疫苗升级换代的理想候选抗原,同时也具备良好的抗原相容性,其高纯度及低免疫剂量的特点也为其他组分提供了充足的剂量空间。
- 张一帜张媛李建王甲冯妍赵浩然任小侠王秀丽刘元杰李旭妮王浩杰刘燕
- 关键词:猪丹毒杆菌蛋白表达纯化亚单位疫苗
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- 王秀丽

- 作品数:69被引量:130H指数:5
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- 作品数:98被引量:88H指数:5
- 供职机构:中国兽医药品监察所
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- 作品数:77被引量:152H指数:6
- 供职机构:中国兽医药品监察所
- 研究主题:活菌计数 活疫苗 猪丹毒 免疫原性 猪丹毒杆菌
- 李郁

- 作品数:274被引量:1,071H指数:15
- 供职机构:安徽农业大学动物科技学院
- 研究主题:沙门氏菌 血清型 沙门菌 耐药性 小鼠
- 魏文涛

- 作品数:8被引量:57H指数:3
- 供职机构:安徽农业大学动物科技学院
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