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实时荧光定量甲基化特异性聚合酶链反应 技术定量检测胃癌患者外周血原钙黏蛋白10基因甲基化 水平及意义 被引量：4 2018年 甲基化 在原发性胃癌无创性诊断及预后评估中的意义。方法采用实时荧光定量甲基化特异性聚合酶链反应 （Real-time MSP）检测202例胃癌、52例胃黏膜上皮异型增生、68例慢性胃炎组织和血清及120例健康人血清中PCDH10启动子甲基化 水平，分析其与临床病理等参数及预后之间的关系。结果胃癌组织PCDH10甲基化 率（80.2%、162/202）显著高于配对癌旁组织（26.7%、54/202）、胃黏膜上皮异型增生组织（23.1%、12/52）及慢性胃炎标本（14.7%、10/68）（均P＝0.000）。肿瘤组织与配对血清PCDH10甲基化 水平具有良好的一致性，其Aζ值是0.862（P＝0.000）。血清PCDH10甲基化 水平与患者诊断时年龄（P＝0.018）、幽门螺杆菌（Hp）感染（P＝0.000）、肿瘤大小（P＝0.000）、肿瘤分化（P＝0.002）、淋巴管侵犯（P＝0.000）、静脉侵犯（P＝0.007）、浸润深度（P＝0.000）、淋巴结转移（P＝0.000）、远处转移（P＝0.015）、临床分期（P＝0.000）及不良预后（P＝0.000）有相关，而与患者性别（P＝0.435）、肿瘤部位（P＝0.458）及生长模式（P＝0.435）无明显相关。结论PCDH10甲基化 在胃癌的发生发展中起重要作用。关键词：胃癌 DNA甲基化 巢式甲基化特异性聚合酶链反应 法检测甲状腺患者血浆p16基因启动子区域异常甲基化 及其临床意义 2013年 甲基化 及其在甲状腺癌筛查及早期诊断中的价值,为甲状腺癌的早期诊断提供依据。方法利用巢式甲基化特异性聚合酶链反应 (nested methylation specific PCR,nMSP)法检测50例甲状腺癌患者和32例结节性甲状腺肿患者组织和血浆中p16基因启动子区域的异常甲基化 情况;分析p16基因异常甲基化 与甲状腺癌临床特征的相关性及血浆p16基因异常甲基化 与肿瘤组织检测结果之间的一致性。结果甲状腺癌患者组织中p16基因启动子区甲基化 率为54%(27/50),血浆标本中p16基因启动子区甲基化 率为52%(26/50),两者有很好的一致性(P>0.05);结节性甲状腺肿患者组织标本和血浆标本中均未见p16基因启动子区甲基化 ,与甲状腺癌患者相比,差异均有统计学意义(P<0.01);血浆标本p16基因甲基化 检测敏感度为52%,特异 度为100%。结论血浆中p16基因启动子区域异常甲基化 的检测有望成为甲状腺癌筛查和早期诊断的有效指标。关键词：甲状腺癌 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应 检测粪便ppENK基因甲基化 对胰腺癌诊断的可行性2012年 甲基化特异性聚合酶链反应 （MSP）检测粪便ppENK基因高甲基化 用于诊断胰腺癌的可行性。方法收集胰腺癌患者24例和对照6例的新鲜粪便标本。采用MSP检测全部粪便标本中ppENK的甲基化 状态；采用PCR检测全部粪便标本中野生型ppENK的阳性率。采用PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）检测粪便K-ras的突变情况。将胰腺癌细胞PC3单细胞悬液加入同一健康者粪便标本，MSP法检测ppENK甲基化 阳性，计算甲基化 阳性时需掺人的胰腺癌细胞的最少数量。结果30份粪便标本的甲基化 检出率为0（0／30），非甲基化 检出率为10％（3／30），野生型ppENK检出率为6．7％（2／30）；PCR-RFLP可检测出所选10份野生型ppENK阴性的胰腺癌标本中的8份，其中7份有K-ras第12位密码子突变。MSP方法能够检测到粪便中ppENK甲基化 条带所需胰腺癌细胞的数量至少为50个／ml。结论采用MSP方法检测胰腺癌患者粪便标本的ppENK基因甲基化 状态，尚不能成为筛查和诊断胰腺癌的方法。关键词：聚合酶链反应 粪便 胰腺肿瘤 脑啡肽 甲基化特异性聚合酶链反应 技术用于肝细胞肝癌的诊断2008年 甲基化特异性聚合酶链反应 （MSP）技术检测DNA异常甲基化 是一种极好的新方法。我们选择了11个已经进行过启动子甲基化 分析的肿瘤抑制基因（TSG），应用MSP技术检测其在原发性肝癌（HCC）患者组织中的甲基化 情况，以筛选与HCC发生密切相关的TSG，进一步检测血循环中DNA甲基化 与HCC发生的关系。关键词：肿瘤抑制基因 甲基化 半巢式甲基化特异性聚合酶链反应 对肿瘤细胞株p15基因甲基化 或缺失状态的检测 被引量：12 2007年 甲基化 或缺失状态,阐明p15基因甲基化 或缺失在肿瘤发生发展中的作用。运用半巢式甲基化特异性聚合酶链反应 (hemi-nested methylation specific polymerase chain reaction,hn-MSP)分析20种恶性肿瘤细胞株和正常人单个核细胞或细胞株的p15基因甲基化 及缺失状态,并评价该方法的敏感性和特异性 。结果表明:在所有的细胞中,Molt-4、Raji、KG1、CA46、SW480、NCE、SMMC-7221、NCI-H446细胞为部分甲基化 ,hn-MSP检测p15基因甲基化 敏感性可达到1×10-5。正常人单个核细胞、HL-60、HeLa、HepG2、293、SGC7901、U266、CEM细胞则为p15非甲基化 ,而K562、NB4、GMC、Jurkat似乎显现p15基因缺失或突变。结论:p15基因甲基化 或缺失在多种肿瘤,特别在恶性血液病中有较高的发生率,且对疾病的进展及预后有密切的关系,hn-MSP具有较高的敏感性和特异性 ,值得在临床推广应用。关键词：P15INK4B 基因甲基化 基因缺失 甲基化特异性聚合酶链反应 关键步骤的质量评价与试验技巧被引量：3 2006年 关键词：特异性聚合酶链反应 DNA甲基化 试验条 表观遗传学 MSP 半巢式甲基化特异性聚合酶链反应 在胃癌p16基因甲基化 检测中的应用 被引量：2 2004年 甲基化特异性聚合酶链反应 (MSP) ,采用半巢式MSP检测胃癌组织p16基因启动子区CpG岛的甲基化 状态。方法 用亚硫酸氢盐修饰被测DNA后 ,采用半巢式MSP(引物分别为MS ,M1A和MS ,M2A) ,分析了 6 0例胃癌组织及相应正常组织中p16基因的甲基化 状态。结果 单独用MSP ,胃癌组织中p16基因甲基化 的发生率为 80 %。采用半巢式MSP ,甲基化 发生率为86 7% ,比单独采用MSP提高了几个百分点 ,并提示胃癌病例的p16基因启动子区存在甲基化 发生的不同模式。结论 半巢式MSP能够有效地提高灵敏度和减少假阳性。同时 ,免疫组化的结果也说明了p16基因异常甲基化 与胃癌组织P16蛋白的表达密切相关。关键词：胃癌 P16基因 甲基化 巢式甲基化特异性聚合酶链反应 在p16基因启动子过甲基化 检测中的应用 被引量：14 2004年 甲基化特异性聚合酶链反应 (nMSP)法 ,探讨了最佳PCR扩增条件 ,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化 状态。方法 将基因组DNA变性成为单链 ,用亚硫酸氢盐修饰单链 DNA ,将所有未甲基化 的胞嘧啶被转变为尿嘧啶 ,而甲基化 的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化 和非甲基化 等位基因特异 引物 ,进行巢式聚合酶 链反应 扩增 ,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果 在 3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子甲基化 。用甲基化特异性聚合酶链反应 法 (MSP)和nMSP法分别检测 34例非小细胞肺癌 (NSCLC)患者血清 ,p16基因启动子甲基化 阳性率分别为 5 3% (18/34)和 74 % (2 5 /34) ,nMSP法具有更高的灵敏度。结论 筑巢式甲基化特异性聚合酶链反应 是一种灵敏度高、特异性 强的甲基化 检测方法 ,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化 分析。关键词：P16基因启动子 甲基化 非小细胞肺癌 应用甲基化特异性聚合酶链反应 分析P15基因对成人急性白血病微小残留病灶的检测价值 2002年 甲基化特异性聚合酶链反应 分析P15基因甲基化 对成人急性白血病微小残留病灶的检测价值。方法 :运用甲基化特异性聚合酶链反应 ,分析了 38例各种类型的急性白血病在初诊时和缓解后的不同阶段P15基因的甲基化 状态。结果 :①甲基化特异性聚合酶链反应 检测P15基因甲基化 的敏感性为 2 .0× 10 -4。② 38例急性白血病初诊时的P15基因甲基化 的出现率为 6 8.4 % ,正常对照组无甲基化 。③P15基因甲基化 可能与疾病的预后有关。经治疗后P15基因甲基化 消失的病人与P15基因甲基化 持续存在的病人复发率之间的差异有显著性 (0 %比 6 8.8% ,P <0 .0 1)。结论 :P15基因甲基化 状态在急性白血病中有较高的检出率 (达 6 8.4 % )。应用甲基化特异性聚合酶链反应 分析急性白血病P15基因甲基化 状态的特异性 和敏感性高。该指标可监测急性白血病微小残留病灶相关的情况 ,值得在临床上推广。关键词：甲基化特异性聚合酶链反应 P15 成人 急性白血病 微小残留病灶 MSP 采用甲基化特异性聚合酶链反应 研究急性白血病p15基因CpG岛甲基化 被引量：3 1999年 甲基化 作为各型急性白血病通用的基因标志物的可行性。方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应 （ＭＳＰ）法检测４０ 例初治或复发急性白血病、５ 例完全缓解期白血病及８ 例（ 份） 正常骨髓的ｐ１５ 基因ＣｐＧ岛甲基化 ，并对ＭＳＰ产物进行序列测定。结果 急性白血病患者ｐ１５ 基因ＣｐＧ岛甲基化 阳性率为８０％ ，ＡＭＬ与ＡＬＬ的阳性率（分别为８３％ 和７３％） 差异无显著性；５ 例完全缓解期白血病患者中１ 例ｐ１５ ＣｐＧ岛甲基化 阳性（该例患者不久白血病复发）；正常骨髓８ 例均为阴性，表明ｐ１５ ＣｐＧ岛甲基化 为白血病细胞所特有；ＭＳＰ产物测序结果与理论结果相符合，ＭＳＰ敏感度可达１０ －３。结论 ｐ１５ ＣｐＧ岛甲基化 在各型急性白血病中均有很高的发生率，可以作为各型急性白血病通用的微量残留病（ＭＲＤ） 指标；白血病完全缓解期ｐ１５ ＣｐＧ 岛甲基化 仍为阳性可能预示着复发；ＭＳＰ法ＤＮＡ需要量极少，不需要有特异性 酶 切位点，无同位素污染，对标本要求不高，敏感度高，是甲基化 研究的一个简便、敏感、特异 的新手段。关键词：P15基因 甲基化 聚合酶链反应 白血病
