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健脾益气方调控Pink1/Parkin通路干预人腹膜间皮细胞损伤: 2025年; 目的:基于Pink1/Parkin通路探讨健脾益气方干预人腹膜间皮细胞HMrSV5损伤的作用机制。方法:采用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)干预HMrSV5细胞48 h构建损伤模型。将HMrSV5细胞分为空白组(10%胎牛血清)、模型组(10μg·L^(-1) TGF-β1)、健脾益气方组(10μg·L^(-1) TGF-β1+160 mg·L^(-1)健脾益气方含药血清)、抑制剂组(10μg·L^(-1) TGF-β1+160 mg·L^(-1)健脾益气方含药血清+50μmmol·L^(-1) Mdivi-1)。采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP)。采用免疫荧光法和Western blot法检测细胞Parkin、Pink1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)、P62、cleaved Caspase-3表达水平。结果:CCK-8检测显示,与空白组比较,模型组和抑制剂组细胞存活率降低(P<0.05)。流式细胞术显示,与空白组比较,模型组细胞凋亡率和MMP升高(P<0.000 1);与模型组比较,健脾益气方组和抑制剂组细胞凋亡率降低(P<0.000 1)。与模型组比较,健脾益气方组细胞MMP降低(P<0.000 1);与健脾益气方组比较,抑制剂组细胞MMP升高(P<0.001)。免疫荧光显示,与空白组比较,模型组和抑制剂组细胞Parkin、Pink1、LC3-Ⅱ表达减少,P62、cleaved Caspase-3表达增加。与模型组和抑制剂组比较,健脾益气方组细胞Parkin、Pink1、LC3-Ⅱ表达增加,P62、cleaved Caspase-3表达减少。Western blot显示,与空白组比较,模型组细胞Parkin、Pink1表达水平降低(P<0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62、cleaved Caspase-3表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,健脾益气方组细胞Parkin、Pink1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平升高(P<0.05),P62、cleaved Caspase-3表达水平降低(P<0.000 1)。与健脾益气方组比较,抑制剂组细胞Parkin、Pink1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平降低(P<0.05),P62、cleaved Caspase-3表达水平升高(P<0.05)。结论:健脾益气方可能通过�; 孟立锋邓湘雨史伟; 关键词：健脾益气方腹膜间皮细胞

miRNA-15a对高糖诱导的腹膜间皮细胞上皮间质转化的影响: 2025年; 目的探讨微小核糖核酸-15a(miRNA-15a)对高糖诱导的腹膜间皮细胞上皮间质转化的影响。方法将传代培养的HPMCs分为低糖对照组(葡萄糖浓度25mmol/L)、中糖组(葡萄糖浓度75mmol/L)和高糖组(葡萄糖浓度125mmol/L),使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与Western印记技术(Western blot),检测miR-15a、VEGFmRNA和VEGF蛋白的表达水平。继续将HPMCs置于高糖培养基中(葡萄糖浓度125mmol/L),进行分组培养,分为:高糖对照组、高糖+control组、高糖+mimics组、高糖+inhibitor组,检测miR-15a和VEGF mRNA的表达,以及纤维化相关蛋白VEGF、Col-IV、FN1、α-SMA、E-cadherin蛋白表达。结果高糖环境使miR-15a表达下调,VEGF mRNA表达水平上调,呈浓度依赖性,与VEGF蛋白表达结果一致(P<0.05)。高糖条件下,上调miR-15a的表达,VEGF mRNA的表达减少,VEGF、Col-IV、FN1、α-SMA蛋白减少,E-cadherin蛋白表达增加,抑制miR-15a的作用后VEGF mRNA的表达增加,VEGF、Col-IV、FN1、α-SMA蛋白表达增加,E-cadherin蛋白表达减少(P<0.05)。结论 miRNA-15a参与并抑制高糖诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)上皮间质转化。; 薛颖莹杨枫钟小燕; 关键词：腹膜纤维化上皮间质转化腹膜透析

大网膜脂肪干细胞旁分泌HGF与加味补阳还五汤抑制腹膜间皮细胞EMT相关性的体外研究被引量：1: 2025年; 目的通过体外研究,探讨加味补阳还五汤抑制的腹膜间皮细胞(PMC)上皮-间充质转化(EMT)防治术后腹腔粘连(PAA)的作用,是否主要通过促进大网膜脂肪干细胞(ADSCs)旁分泌肝细胞生长因子(HGF)。方法实验1明确加味补阳还五汤抑制PMC的EMT作用,是该方对PMC的直接作用,还是通过调控大网膜中的ADSCs旁分泌的间接作用:使用加味补阳还五汤与加味补阳还五汤培养ADSCs后制取其条件培养基(以下称“中药培养基”)分别干预EMT模型的PMC,Western Blot法检测EMT相关的蛋白E-钙黏蛋白(E-Cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。实验2明确加味补阳还五汤抑制PMC的EMT作用,是否与大网膜中的ADSCs旁分泌HGF相关:用低表达HGF的ADSCs条件培养基(以下称“低HGF培养基”)、正常ADSCs条件培养基(以下称“普通培养基”)、中药培养基等3种培养基干预PMC,并检测以下指标:(1)用ELISA法检测在干预PMC之前和之后,3种培养基中HGF的含量。(2)Western Blot法、qPCR法、免疫荧光(IF)法检测干预后各组PMC的EMT相关蛋白表达水平,划痕实验检测各组PMC的迁移能力。结果实验1:加味补阳还五汤与中药培养基对EMT相关指标的影响。与模型组相比,加味补阳还五汤组上调E-Cad的蛋白表达(P<0.05),下调α-SMA的蛋白表达(P<0.05);中药培养基组显著上调了E-Cad的蛋白表达(P<0.01),显著下调α-SMA的蛋白表达(P<0.01)。与加味补阳还五汤组相比,中药培养基组上调E-Cad的蛋白表达(P<0.05),显著下调α-SMA的蛋白表达(P<0.01)。实验2:(1)作用于PMC前后,3种不同的培养基中HGF含量的比较:作用于PMC前,相比于普通培养基,低HGF培养基中含量显著降低(P<0.01),中药培养基中含量显著增加(P<0.01);作用于PMC后,各培养基组含量均显著性下降。(2)EMT相关蛋白表达情况:综合Western Blot、qPCR、IF结果,与模型组相比,各培养基组均可升高E-Cad表达(P<0.05或P<0.01),降低α-SMA、VI; 郑敏麟王亚楠范文江詹倩倩陈锋斌; 关键词：加味补阳还五汤术后腹腔粘连腹膜间皮细胞上皮-间充质转化

猪腹膜间皮细胞的分离培养及初步应用: 2024年; 本研究旨在建立猪原代腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cell, PMC)的分离和体外培养方法,并将其初步应用于猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)体外感染细胞模型。采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化猪大网膜组织分离猪PMC细胞,通过形态学、免疫学方法鉴定细胞。使用Mhr感染PMC细胞,观察细胞形态变化,并利用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)法检测细胞活性损伤情况。结果显示,倒置相差显微镜观察显示,分离培养的细胞早期呈拉网状,5~8 d后生长可达融合状态,细胞大小均一,呈多边形铺路石状;间接免疫荧光试验结果显示,细胞波形蛋白、角蛋白-18抗原呈阳性,第Ⅷ因子相关抗原、白细胞CD45抗原呈阴性;扫描电镜下可见细胞表面微绒毛。结果证实分离培养的细胞为猪PMC细胞,纯度达95%以上。Mhr感染后,光镜下可观察到细胞发生明显皱缩,感染组细胞的LDH释放量较对照组细胞显著升高。本研究成功建立了猪原代PMC细胞的分离培养方法,并初步用于Mhr体外感染,为研究Mhr等引起浆膜炎的病原与宿主的互作机制提供了体外细胞模型。; 黄媛媛王佳陈嘉瑜甘源甘源冯志新邵国青冯志新冯志新; 关键词：腹膜间皮细胞原代培养

腹膜间皮细胞在腹膜转移过程中的双向作用: 2024年; 腹膜是胃癌、结直肠癌、卵巢癌等腹盆腔肿瘤常见的转移部位,腹膜转移的发生常预示着极差的预后,因此探究腹膜转移的机制意义重大。腹膜转移的核心理论基础为“种子与土壤”学说,而腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells,PMCs)作为“土壤”中最主要的细胞成分,受到了学界越来越多的重视。过去,PMCs单层往往被视为对抗肿瘤细胞的重要防线,有新的观点提出PMCs在一定条件下具有促进腹膜转移的作用。该文综述了PMCs在不同状态下所具有的不同生物学功能,维持PMCs的屏障作用对控制腹膜转移具有重要意义。; 郭炳涛吴川清; 关键词：腹膜转移腹膜间皮细胞肿瘤微环境

骨髓间充质干细胞对腹膜间皮细胞凋亡的影响: 2024年; 目的观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对高糖腹透液(PDF)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(PMCs)凋亡的影响及可能作用机制。方法提取并鉴定大鼠原代BMSCs及PMCs,使用高糖腹透液诱导PMCs凋亡,收集BMSCs培养24 h后的细胞上清液作为条件培养基(BMSCs-CM)或通过Transwell小室将PMCs与BMSCs共培养。将PMCs分为空白对照(CON)组、高糖腹透液(PDF)组及间充质干细胞处理(PDF+BMSCs-CM)组,采用CCK-8法测定各组PMCs的增殖活力;JC-1法测定线粒体膜电位的去极化情况;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的胱天蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)和通路相关蛋白丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Raf)、丝裂原活化细胞外信号调节激酶(MEK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化蛋白的表达水平。结果与CON组比较,PDF组PMCs增殖活力、线粒体膜电位水平降低,而凋亡率、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3/Caspase-3、p-Raf/Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK比值升高(P<0.05);与PDF组比较,PDF+BMSCs-CM组PMCs增殖活力、线粒体膜电位升高,而凋亡率、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3/Caspase-3、p-Raf/Raf、pMEK/MEK、p-ERK/ERK比值降低(P<0.05)。结论BMSCs可减轻高糖腹透液诱导的PMCs凋亡,其机制可能与抑制Raf/MEK/ERK信号通路的活化有关。; 王扶凝代会博单云俞曼殊盛梅笑; 关键词：腹膜透析细胞凋亡骨髓间充质干细胞腹膜间皮细胞

猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法及其应用: 本发明提出一种猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法及其应用，包括以下步骤：S10、提供转染体系；S20、提供包装细胞，将所述转染体系和所述包装细胞混合、进行慢病毒包装，得慢病毒颗粒；S30、提供分离的原代猪腹膜间皮细胞，...; 李晓敏陆启荣刘宇邱银生周朗田俊可

褪黑素对人腹膜间皮细胞上皮-间质转化的作用及机制: 2024年; 目的探讨褪黑素对人腹膜间皮细胞上皮-间质转化(EMT)的作用及机制。方法培养人腹膜间皮细胞株HMrSV5,构建核心蛋白聚糖(DCN)过表达和敲减质粒。将细胞分为正常对照组、TGF-β1组、TGF-β1+褪黑素组、TGF-β1+褪黑素+siDCN组、TGF-β1+褪黑素+siNC组、TGF-β1+DCN组。采用CCK-8法检测细胞增殖存活率;采用蛋白免疫印迹和实时定量PCR检测DCN、TGF-β1、Smad2、E-cadherin蛋白和mRNA表达水平。结果CCK-8结果显示,TGF-β1+褪黑素组、TGF-β1+褪黑素+siDCN组、TGF-β1+DCN组细胞存活率均较TGF-β1组高,TGF-β1+褪黑素组较TGF-β1+褪黑素+siDCN组细胞存活率更高(均P<0.05)。蛋白免疫印迹及实时定量PCR表明,TGF-β1组较对照组DCN和E-cadherin表达明显下调,TGF-β1+褪黑素组与TGF-β1+褪黑素+siDCN组较TGF-β1组DCN、E-cadherin蛋白及mRNA表达上调,TGF-β1、Smad2蛋白及mRNA表达下调;TGF-β1+褪黑素组较TGF-β1+褪黑素+siDCN组进一步上调E-cadherin、DCN蛋白及mRNA表达,进一步下调TGF-β1、Smad2蛋白及mRNA表达(均P<0.05)。结论褪黑素可延缓人腹膜间皮细胞EMT进程,DCN基因可能是抑制该细胞发生EMT的一个重要靶点。; 刘珊张明霞刘伦志; 关键词：褪黑素人腹膜间皮细胞核心蛋白聚糖上皮-间质转化

3-吲哚丙酸抑制腹膜间皮细胞EMT和纤维化的机制研究: 2024年; 目的评估3-吲哚丙酸(3-indoleacetic acid, IPA)对脂多糖(lipolyaccharide, LPS)诱导的小鼠腹膜间皮细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)和纤维化的影响。方法 CCK-8法检测不同浓度(0.1、1.0和10μmol/L)的IPA对LPS处理前后的小鼠腹膜间皮细胞增殖活性的影响,确定IPA最佳使用剂量。将小鼠腹膜间皮细胞分成Control组、LPS组、LPS+IPA组、LPS+LY364947(TGF-β1/Smad3通路抑制剂)组、LPS+IPA+LY364947组和LPS+IPA+SRI-011381(TGF-β1/Smad3通路激活剂)组;CCK-8法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞侵袭,ELISA检测培养上清中间质表型α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)的浓度,Western blot检测细胞中α-SMA,EMT相关因子E-cadherin, TGF-β1/Smad3通路相关因子Smad3、p-Smad3的蛋白表达。结果 IPA的最佳使用剂量为1.0μmol/L。与Control组相比,LPS组细胞增殖活力、E-cadherin表达水平下降(均P<0.01),侵袭能力、α-SMA表达水平和p-Smad3/Smad3升高(均P<0.01)。与LPS组相比,LPS+IPA组和LPS+LY364947组细胞增殖活力、E-cadherin表达水平上升(均P<0.01),侵袭能力、α-SMA表达和p-Smad3/Smad3下降(均P<0.01)。与LPS+IPA组相比,LPS+IPA+LY364947组所测指标趋势更加显著,LPS+IPA+SRI-011381组所测指标变化趋势均被逆转。结论 IPA通过抑制TGF-β1/Smad3通路中Smad3蛋白的磷酸化,从而抑制细胞EMT进展,减轻LPS诱导的腹膜间皮细胞损伤。; 李红波凃璨付帅姜南熊飞; 关键词：腹膜间皮细胞上皮-间质转化纤维化

不同钙离子浓度可通过内质网应激影响人腹膜间皮细胞上皮间质转化: 2024年; 目的探讨不同钙离子浓度通过内质网应激(ERS)对人腹膜间皮细胞(HPMC)上皮间质转化(EMT)的影响。方法体外培养HPMC细胞株HMrSV5并分组处理,对照组、高钙1组、高钙2组分别用含1.25、1.75、2.25 mmol/L钙离子浓度的培养基处理,溶剂对照组用含1.25 mmol/L生理钙离子浓度及0.1%二甲基亚砜(DMSO)的培养基处理,高钙+溶剂组用含2.25 mmol/L钙离子浓度及0.1%DMSO的培养基处理,高钙+4-苯基丁酸(4-PBA)组用含2.25 mmol/L钙离子浓度及1 mmol/L ERS抑制剂4-PBA的培养基处理。各组处理48 h后,光镜下观察细胞形态学变化;采用免疫荧光染色观察细胞中上皮细胞表型标志蛋白紧密连接蛋白-1(ZO-1)和间质细胞表型标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中EMT标志基因E-钙黏蛋白(E-cadherin)、ZO-1、α-SMA和波形蛋白(Vimentin)的表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测细胞中ERS标志蛋白磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、磷酸化真核翻译起始因子2α(p-eIF2α)、转录激活因子4(ATF4)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达。结果与对照组比较,高钙1组和高钙2组HMrSV5细胞变细长、呈纤维化样改变,ZO-1的荧光强度增加、α-SMA的荧光强度减弱,提示细胞从上皮细胞向间质细胞转化;细胞中E-cadherin、ZO-1的mRNA表达明显降低,α-SMA、Vimentin的mRNA表达及p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP的蛋白表达明显升高,且高钙2组上述标志基因或蛋白表达较高钙1组变化更明显〔E-cadherin mRNA(2^(-ΔΔCt)):0.53±0.05比0.75±0.09,ZO-1 mRNA(2^(-ΔΔCt)):0.42±0.06比0.69±0.06,α-SMA mRNA(2^(-ΔΔCt)):1.81±0.16比1.32±0.14,Vimentin mRNA(2^(-ΔΔCt)):2.05±0.22比1.48±0.16,p-PERK蛋白(p-PERK/β-actin):0.81±0.09比0.59±0.06,p-eIF2α蛋白(p-eIF2α/β-actin):0.87±0.10比0.50±0.06,ATF4蛋白(ATF4/β-actin):0.93±0.10比0.72±0.06,CHOP蛋白(CHOP/β-actin):0.79±0.09比0.46±0.04,均P<0.05〕。与溶�; 郭宝珠程锦绣靳鑫贺玉桃孙羡敏; 关键词：腹膜透析腹膜纤维化人腹膜间皮细胞上皮间质转化钙离子浓度内质网应激

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