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用于检测细胞线粒体自噬的双荧光蛋白定位检测系统及应用: 本发明一种用于检测细胞线粒体自噬的双荧光蛋白定位检测系统，所述检测系统至少包括：（1）荧光蛋白A和指示蛋白A组成的融合蛋白；（2）荧光蛋白B和指示蛋白B组成的融合蛋白；所述荧光蛋白A和荧光蛋白B的荧光颜色不同，所述指示蛋...; 苏军王珂徐祎春周佳菁赵英楠马晓卯冯晨晨

细粒棘球绦虫MDH基因的克隆表达结构功能预测及蛋白定位: 2024年; 为了探究苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因在细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)生长发育中的生物学功能并初步评价MDH作为疫苗候选抗原的潜力,从NCBI GenBank数据库中获得Eg MDH基因序列,设计特异性引物,以细粒棘球绦虫原头蚴的cDNA为模板,用PCR扩增MDH基因全长序列;采用生物信息学软件对MDH蛋白的理化性质、结构特点等进行分析;构建重组质粒pET28a-MDH并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用SDS-PAGE检测蛋白的表达,随后纯化、复性蛋白,并通过Western-blot对蛋白进行抗原性分析;利用间接免疫荧光试验检测原头蚴中目的蛋白的定位;应用实时荧光定量PCR分析Eg MDH基因m RNA在原头蚴及成虫中的相对转录水平。生物信息学分析结果显示,Eg MDH基因长999 bp,编码332个氨基酸,蛋白分子式为C1639H2599N445O475S16,相对分子质量为36 651.32,理论等电点为8.11,且编码蛋白没有信号肽和跨膜区,含有40个磷酸化位点,3个N连接型糖基化位点,9个优势B细胞抗原表位。二级结构由α-螺旋(46.69%)、无规则卷曲(31.93%)、延伸链结构(16.87%)和β-转角(4.52%)构成。克隆的基因长975 bp,预测分子质量为35.7 ku;Western-blotting显示,重组蛋白可以被抗His标签的家兔多克隆抗体和原头蚴可溶性全蛋白小鼠多克隆抗体识别;间接免疫荧光试验显示,Eg MDH蛋白定位在原头蚴的囊壁;实时荧光定量PCR显示,Eg MDH基因在成虫及原头蚴中均有表达,且原头蚴阶段的转录水平显著高于成虫(P<0.05)。本研究结果初步表明Eg MDH具有作为疫苗候选抗原的潜力,以期为后续细粒棘球绦虫疫苗研发提供候选抗原;同时也为后续细粒棘球绦虫MDH基因的深入研究奠定了基础。; 普娜赵文卿张玉霞陈旭珂张艳艳孙艳薄新文王正荣; 关键词：细粒棘球绦虫苹果酸脱氢酶原核表达间接免疫荧光

翻译后修饰对酵母脂滴蛋白定位的影响作用研究: 本课题旨在绘制酿酒酵母脂滴蛋白组翻译后修饰状态全景(PTM Landscape)中的主要两种类型——N-糖基化和磷酸化,并探究其对于脂滴蛋白的细胞内定位的影响作用,为酿酒酵母微生物细胞工厂在合成生物学及医药领域的应用提供...; 王德慧; 关键词：脂滴翻译后修饰糖基化磷酸化亚细胞定位

鸡毒害艾美耳球虫小热休克蛋白基因EnsHsp20的克隆表达与蛋白定位: 2023年; 克隆、表达毒害艾美耳球虫小热休克蛋白基因EnsHsp20,检测其天然蛋白及其在虫体内的亚细胞定位。以毒害艾美耳球虫子孢子的总RNA为模板,用RT-PCR扩增EnsHsp20基因后,连接至pGEM-T Easy载体;测序后构建pET28a(+)-EnsHsp20表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3);经双酶切和测序鉴定后,将重组菌诱导表达;表达产物经Western-blot鉴定、纯化与复性后,免疫BALB/c小鼠,制备小鼠抗rEnsHsp20多克隆抗体;利用多克隆抗体,分别用Western-blot和间接免疫荧光试验检测子孢子和第2代裂殖子中EnsHsp20的天然蛋白及其定位;最后,应用qRT-PCR分析EnsHsp20基因在未孢子化卵囊、子孢子和第2代裂殖子中的转录水平。结果显示,该基因全长549 bp,编码183个氨基酸,预测分子质量为20.3 ku;重组蛋白主要以包涵体形式存在,可以被6×His标签单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫、抗柔嫩艾美耳球虫、抗堆型艾美耳球虫和抗巨型艾美耳球虫的阳性血清识别;在第2代裂殖子中检测到EnsHsp20的天然蛋白,分子质量约为36 ku;EnsHsp20蛋白定位在子孢子和第2代裂殖子的细胞膜或细胞质;EnsHsp20基因在子孢子中的转录水平极显著高于第2代裂殖子和未孢子化卵囊(P<0.01)。本研究结果为进一步探析EnsHsp20蛋白在虫体入侵与生长发育中的作用奠定了基础。; 张知之冯茜茜范雪莲刘丹丹候照峰许金俊许金俊; 关键词：毒害艾美耳球虫克隆

疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pb25蛋白定位及功能研究: 目的:疟疾是由疟原虫寄生于人体所导致的疾病,是危害最严重的传染性疾病之一。2022年WHO发布的《世界疟疾报告》显示,2020至2021年,疟疾病例仍处上升趋势,2021年全球疟疾死亡病例为61.9万例。目前疟疾的防控主...; 赵志颖; 关键词：伯氏疟原虫传播阻断疫苗动合子疟疾原核表达

牦牛FHL2基因的克隆、组织表达与蛋白定位分析被引量：1: 2023年; 旨在获得牦牛FHL2基因序列,阐明该基因序列、蛋白质结构与性质、mRNA的组织表达模式、在雌性生殖器官及颗粒细胞的蛋白表达特性。本研究以5头健康空怀成年母牦牛的心、肝、脾、肺、肾、卵巢、子宫、输卵管组织及5头妊娠2个月左右母牦牛的子宫、输卵管和卵巢为研究材料,利用逆转录PCR(RT-PCR)技术克隆FHL2基因,并使用在线分子生物学软件分析其生物信息学特性;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析FHL2基因的组织表达特性;应用免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)技术检测FHL2蛋白在雌性生殖器官的分布和颗粒细胞上的亚细胞定位。结果发现,FHL2基因CDS区全长840 bp (ON456866),编码279个氨基酸,FHL2蛋白属于弱碱性亲水不稳定蛋白,没有跨膜结构。不同物种的FHL2氨基酸序列比对和进化树分析表明,FHL2基因编码区在物种进化中比较保守。RT-qPCR结果显示,FHL2基因在检测的组织都有表达,在心的表达量极显著高于其他检测组织(P<0.01);在肺、卵巢、输卵管和子宫中的表达量极显著高于肝、脾和肾(P<0.01)。FHL2基因在妊娠期子宫中的表达量极显著高于空怀期(P<0.01),在卵巢中妊娠期的表达量极显著低于空怀期(P<0.01)。IHC结果表明,在生殖器官中FHL2蛋白主要在卵泡颗粒细胞、子宫内膜和输卵管黏膜表达;IF定位结果显示,FHL2蛋白主要分布在卵泡颗粒细胞的细胞核中。综上所述,牦牛FHL2基因在动物进化过程中比较保守,在心、肺、卵巢、输卵管和子宫中表达量高,可能在参与牦牛低氧适应性、卵泡发育和妊娠维持等生理功能的调控中发挥重要作用。; 龚三你蒋旭东马瑶卢建远字向东; 关键词：牦牛实时荧光定量PCR 免疫组化

一种将目的蛋白定位于叶绿体的方法及其应用: 本发明公开了一种将目的蛋白定位于叶绿体的方法及其应用。本发明提供的将目的蛋白定位于叶绿体的方法包括如下步骤：在受体植物中将Lsa24884转运肽和目的蛋白进行融合表达，进而使所述目的蛋白定位于所述受体植物的叶绿体中。所述...; 杨效曾杨靖王向峰; 文献传递

一种将目的蛋白定位于叶绿体的方法及其应用: 本发明公开了一种将目的蛋白定位于叶绿体的方法及其应用。本发明提供的将目的蛋白定位于叶绿体的方法包括如下步骤：在受体植物中将Lsa24884转运肽和目的蛋白进行融合表达，进而使所述目的蛋白定位于所述受体植物的叶绿体中。所述...; 杨效曾杨靖王向峰

信号识别颗粒(SRP)在膜蛋白定位中的作用: 2022年; 依赖信号识别颗粒(signal recognition particle,SRP)的共翻译转运是所有生命体中的一个保守途径,它将新生肽链的翻译与转运耦联在一起。超过30%的新合成的多肽链被SRP转运到正确位置。最近的研究表明,大肠杆菌中SRP抑制子可以规避SRP的需求。当SRP缺失时,翻译控制在介导膜蛋白定位方面起着关键作用。本综述总结了SRP底物如何在存在或缺失SRP的情况下转运到适当的位置以及翻译速率降低如何补偿SRP的缺失。我们还讨论了不同蛋白质对SRP的依赖程度。这一回顾将为进一步研究SRP功能及膜蛋白定位提供新思路。; 赵留群张大伟; 关键词：翻译调控膜蛋白

一种将重组蛋白定位到细胞表面的简便纯化蛋白方法: 本申请公开了一种将重组蛋白定位到细胞表面的简便纯化蛋白方法，其特征在于，通过将编码信号肽、化学法切割位点和目的蛋白的基因构建到表达载体中，使得目的蛋白表达后定位到细胞的表面；在收集的细胞中加入含有切割试剂的缓冲液重悬，离...; 黄善青沙万星刘天意魏天彪; 文献传递

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