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基于血清药理学的肝龙胶囊含药血清制备方法的初步探究
2024年
目的:利用血清药理学,探究用于肝细胞脂肪变性药效观察的肝龙胶囊(GLC)含药血清的最佳取血时间和含药血清体积分数。方法:C57BL/6J小鼠60只,灌胃GLC(90 mg/kg),每日两次,连续7 d,分别在末次给药0.5、1、2和4 h心脏采血,收集血清。对照组小鼠灌胃同体积的生理盐水。LC-MS/MS技术检测空白血清及不同采血时间含药血清肌苷含量,确定最佳采血时间。应用0%、1%、3%和10%GLC血清处理棕榈酸(PA)刺激的小鼠肝细胞NCTC1469,尼罗红染色检测细胞脂滴生成,RT-qPCR检测细胞内脂肪酸生成基因Fabp1和Scd1,及脂肪酸β-氧化基因Pparα的表达。结果:(1) LC-MS/MS检测发现在末次给药2 h后血清中肌苷浓度最高。(2)尼罗红染色显示GLC血清对PA诱导的肝细胞脂质积累具有剂量依赖性的减少趋势。(3) 1%和3%和10%GLC血清处理均能显著下调PA刺激的肝细胞内Fabp1和Scd1的表达,且具有剂量依赖性的减少趋势;1%、3%和10%GLC血清处理均能显著上调PA刺激的肝细胞内Pparα的表达,且具有剂量依赖性的增加趋势。结论:小鼠给药后2 h的10%GLC血清是用于肝细胞脂肪变性药效观察的最佳血清干预浓度。
张珂珂白豪吕金宇金悦罗芮
关键词:肝龙胶囊含药血清体积分数
一种高品质小鼠血清制备装置
一种高品质小鼠血清制备装置,包括第一过滤器和第二过滤器,第一过滤器底部与连通管的一端连通,连通管的另一端与第二过滤器一侧的顶部连通,连通管上设置转移泵和转移阀;第一过滤器顶部与血清粗品进管连通,第一过滤器内下部固定安装过...
苏少博李亚男黄钜壕
苹果坏死花叶病毒CP基因原核表达及其抗血清制备
2024年
苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)是近年新发现的病原物,并且是与我国苹果花叶病症状高度相关的重要病毒,进行ApNMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因原核表达、制备多克隆抗血清,以建立快速、灵敏、准确的ApNMV常规检测方法尤为必要.通过设计特异性引物,以RT-PCR方法成功获得ApNMV CP基因序列,插入到原核表达载体pET-28a(+)中构建重组质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG进行重组蛋白(含His-tag)诱导表达.SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,用Ni Sepharose 6 Fast Flow进行蛋白纯化,回收共得到重组蛋白2.4 mg.在屏障环境下免疫2只SPF级新西兰兔,制备出多克隆抗血清,稀释400倍后仍能与ApNMV阳性苹果叶片样品发生免疫反应.由此证明,本研究建立的ApNMV间接ELISA检测方法具有较好的灵敏性,检测效率高,能够用于田间大量样品ApNMV的诊断.
邢飞王红清李世访
关键词:外壳蛋白基因原核表达抗血清
诺如病毒P2结构域的原核表达及其抗血清制备
2024年
目的应用原核表达系统表达并纯化5种基因型(GⅠ.1、GⅡ.2、GⅡ.3、GⅡ.4、GⅡ.17)诺如病毒(norovirus,NV)的P2结构域,并制备其抗血清。方法利用生物信息学方法分析不同基因型NV P2序列保守性,合成P2 DNA序列,亚克隆至pET24a载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达。表达的重组P2蛋白纯化后免疫30只雌性BALB/c小鼠,制备血清。通过ELISA法检测抗血清的滴度和交叉反应,Western blot法检测抗血清的特异性,点杂交法分析抗血清对野生病毒的识别与结合能力。结果表达的重组P2蛋白相对分子质量约15000,纯度均达90%以上,GⅠ.1、GⅡ.2、GⅡ.3、GⅡ.4、GⅡ.17型P2蛋白表达量分别为60、26.4、19.8、16.3和33.3 mg/L。针对5种基因型NV P2抗原的抗血清滴度均达1∶128000以上,均能很好地识别自身相应的P2抗原,但不与不相关P2抗原相互作用,均不与重组人A组轮状病毒VP7抗原和重组幽门螺杆菌尿酶抗原发生交叉反应,且对野生型NV具有较好的识别与结合能力。结论利用原核表达系统成功表达并纯化了我国流行的5种基因型NV P2抗原,制备的抗血清滴度较高,特异性良好,为NV快速、现场诊断技术的建立奠定了基础。
陈健伟李浩明雪薇王斌邓建平陆峙金杜云霄蔡璐唐秋阳李再新张智
关键词:诺如病毒P2蛋白原核表达抗血清
玫瑰叶畸形病毒外壳蛋白基因原核表达与抗血清制备
2024年
玫瑰叶畸形病毒(rosa rugosa leaf distortion virus,RrLDV)属于番茄丛矮病毒科Tombusviridae天竺葵环斑病毒属Pelarspovirus,能够引起月季叶片畸形、黄化以及提前衰老等症状,是危害月季的病毒之一。为建立玫瑰叶畸形病毒的快速检测方法,采用热硼酸盐法提取发病月季叶片总RNA,通过RT-PCR扩增该病毒外壳蛋白基因,连接至原核表达载体pDB-His-MBP上,导入大肠杆菌Escherichia coli BL21以IPTG,诱导蛋白表达,获得浓度为8 mg/mL的重组蛋白,制备了兔多抗血清。Western blot检测血清效价为1∶2048000,当效价为1∶1000时,灵敏度为1∶1024。血清学检测结果与RT-PCR检测结果一致,表明该抗血清可用于RrLDV的检测,有利于检测该病毒的发生和分布。
张秀琪聂张尧李梦林苏江月丁泽慧张宗英韩成贵王颖
关键词:外壳蛋白原核表达抗血清制备
猪δ冠状病毒RBD的可溶性表达、纯化及小鼠抗血清制备
2024年
为获得猪δ冠状病毒(PDCoV)S蛋白受体结合区(RBD)的可溶性蛋白及特异性多克隆抗体血清,本研究将PDCoV流行株S蛋白(GenBank:QAA06990.1)的RBD序列添加信号肽、纯化标签与酶切位点,命名为PDCoV-RBD(简称PDR),对其进行密码子优化后合成并克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体,构建重组质粒pcDNA3.1-PDR。将重组质粒转染至Expi293F细胞进行表达,并利用SDS-PAGE与Western blot进行鉴定;通过Strep-Tactin XT亲和层析纯化目的蛋白,薄层扫描分析蛋白纯度,并以纯化后的PDR蛋白免疫小鼠,制备抗PDR蛋白的特异性多克隆抗体血清,通过间接ELISA测定效价,PDCoV病毒感染细胞后,通过Western blot检测S蛋白与血清的特异性结合效果。结果显示,PDR在Expi293F细胞中获得可溶性表达,纯化得到的目的蛋白大小正确,纯度大于98%;用其免疫小鼠制备的抗血清能特异性结合病毒中天然的S蛋白。本研究获得的PDR蛋白及其小鼠抗血清可为PDCoV的诊断检测与疫苗研制提供必要的物质基础。
崔春梅张爽张国庆张国庆高子函郝鹏飞李昌金鑫金鑫金宁一
关键词:纯化抗血清制备
自体血清制备装置
本实用新型公开了一种自体血清制备装置,包括针筒:内部可活动的设有推杆,推杆在一端设有胶塞,推杆推动胶塞在针筒内活动,使针筒内产生负压区域;另一端形成方便按压的扩大端;抽吸针头:中空结构,一端为与针筒连接的连接段,连接段内...
董宸瑜蔡晓云李学治董诺吴护平
一种用于肝纤维化治疗的生物人工肝处理血清制备方法
本发明公开了一种用于肝纤维化治疗的生物人工肝处理血清制备方法,属于医疗领域,包括以下步骤:S1:种入肝细胞和脐带间充质干细胞;S2:将血浆离心去除血细胞,并用0.2μm的低蛋白吸附滤器过滤去除细胞碎片及杂质,得到肝纤维化...
李汛严孟超姚佳谢晔严俊
玉米黄花叶病毒运动蛋白的原核表达纯化与抗血清制备
2023年
为实现对玉米黄花叶病毒(maize yellow mosaic virus,MaYMV)的血清学检测,丰富该病毒的检测方法,将编码MaYMV运动蛋白(movement protein,MP)的基因连接到原核表达载体pDBHis-MBP上,将构建成功的原核表达质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli中诱导表达融合蛋白,将纯化后的融合蛋白对新西兰大白兔Oryctolagus cuniculus进行免疫并制备MaYMV MP多克隆抗血清,并采用Western blot对抗血清的效价、灵敏度和特异性进行检测。结果显示,利用成功构建的原核表达载体经诱导表达获得分子量大小约为62 kD的融合蛋白,纯化后对新西兰大白兔进行免疫获得MaYMV MP抗血清,该抗血清的效价为1∶128000,灵敏度为1∶32,且该抗血清能够特异性地检测到本氏烟Nicotiana benthamiana中瞬时表达的MaYMV MP,而不与马铃薯卷叶病毒属Polerovirus及黄症病毒属Luteovirus的其他病毒发生血清学交叉反应,证明该抗血清具有良好的特异性。表明本研究制备的MaYMV MP抗血清能特异性地检测到MaYMV MP,可用于对田间样品的MaYMV血清学检测。
马秋萌刘玉姿吴迪李洪蕊王颖韩成贵
关键词:血清制备原核表达运动蛋白
一种奶山羊多联高免血清制备工艺
本发明公开了一种奶山羊多联高免血清制备工艺,涉及兽用疫苗技术领域,将引起羊快疫的腐败棱菌C55‑1株、引起猝狙的C型魏氏梭菌、引起羔羊痢疾B型产气荚膜核菌C58‑1株和引起肠毒血症的D型产气荚膜梭菌C60‑2株分别进行菌...
王建光张蕾马环宇李淑文

相关作者

林林
作品数:72被引量:86H指数:7
供职机构:浙江省农业科学院
研究主题:原核表达 侵染 水稻 病毒 小分子RNA
吕永平
作品数:123被引量:265H指数:9
供职机构:浙江省农业科学院
研究主题:培养基 组培 壮苗培养 增殖率 增殖培养基
汪一婷
作品数:120被引量:127H指数:7
供职机构:浙江省农业科学院
研究主题:培养基 组培 壮苗培养 增殖率 增殖培养基
徐刚
作品数:115被引量:245H指数:9
供职机构:浙江省农业科学院
研究主题:水稻 增殖率 组培 壮苗培养 培养基
牟豪杰
作品数:113被引量:110H指数:7
供职机构:浙江省农业科学院
研究主题:培养基 组培 壮苗培养 增殖率 增殖培养基