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- PIEZO1影响HaCaT细胞的趋电性迁移
- 2024年
- 目的伤口中心产生的内源性电场是指导细胞定向迁移促进伤口愈合的重要因子。PIEZO1是机械门控阳离子通道家族成员之一,它参与细胞迁移,影响细胞的趋化迁移,并且受到电压的调节,在伤口愈合过程中发挥重要作用。但PIEZO1是否参与影响电场指导的细胞定向迁移过程尚不清晰,本文以HaCaT细胞为模型探讨PIEZO1及其下游相关蛋白质对细胞趋电性迁移的影响。方法应用活细胞工作站追踪HaCaT细胞在微直流电场中的迁移,使用抑制剂及RNAi技术调控PIEZO1功能和表达,研究PIEZO1对于细胞趋电性迁移的影响;用蛋白质印迹(Western blot)检验细胞的整合素(integrin)β1与FAK磷酸化水平在电场作用下的变化情况,探讨PIEZO1与integrinβ1及FAK等对电场信号的响应及细胞趋电性迁移的影响。结果PIEZO1广谱抑制剂钌红、GsMTx4和RNAi处理显著抑制了HaCaT细胞向正极趋电性迁移的能力;电场和GsMTx4单独作用升高FAK磷酸化和integrinβ1表达,GsMTx4阻止电场进一步升高FAK的磷酸化水平和integrinβ1表达;siRNA干扰PIEZO1表达后显著下调FAK的磷酸化水平,并且电场对FAK磷酸化和integrinβ1表达的促进作用受到抑制;Integrinβ1和FAK的抑制剂使HaCaT细胞的趋电性迁移能力均显著降低。结论PIEZO1参与HaCaT细胞的趋电性迁移,是影响HaCaT细胞趋电性迁移的重要分子之一;抑制integrinβ1和FAK会影响HaCaT细胞的电性迁移;电场信号可能通过PIEZO1介导的信号通路调控integrinβ1的表达和FAK的活化进而影响细胞趋电性迁移。
- 张桂诚龚鹏王一凡赵三军
- 关键词:电场细胞迁移HACAT细胞整合素Β1FAK
- 不同炮制工艺制备广地龙可溶性蛋白对HaCaT细胞的影响
- 2024年
- 目的以鲜广地龙及其不同炮制品包括净制品、炒制品及低温炮制品为研究对象,进一步考察不同炮制工艺对广地龙中可溶性蛋白含量、种类及HaCaT细胞增殖的影响。方法采用Bradford法和SDS-PAGE法,检测广地龙不同炮制品中蛋白质的含量和种类;用CCK-8法进行活性筛选,测定其对HaCaT细胞增殖的影响结果4种广地龙炮制样品可溶性蛋白含量由高到低排序为:鲜品>低温炮制品>净制品>炒制品。鲜品的蛋白条带数目最多,主要集中在27.75~145.07KD低分子量区;低温炮制品与鲜品的蛋白质主带基本一致,净制品和炒制品低分子量区蛋白条带数目明显少于其他两种炮制品。不同广地龙样品给药48 h,净制品组HaCaT细胞基本死亡,炒制品组HaCaT细胞全部死亡,鲜品组和低温炮制组均能促进HaCaT细胞增殖,且鲜品组促细胞增殖效果更显著。结论广地龙中促进HaCaT细胞增殖的主要活性成分是存在于低分子量区的蛋白质,其促增殖活性与蛋白质的含量和种类呈正相关。
- 宁盈悦田林华姚琳冯丽娜高辛王伟明董坤
- 关键词:广地龙可溶性蛋白HACAT细胞
- NRF2介导的还原应激在砷致HaCaT细胞恶性转化中的作用
- 2024年
- 目的 了解核转录因子E2相关因子2(nuclear transcription factor E2-related factor 2,NRF2)介导的还原应激在砷致人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)恶性转化中的作用。方法 将HaCaT细胞及荧光标记线粒体谷胱甘肽的HaCaT(Mito-Grx1-roGFP2 HaCaT)细胞分别在含0.0和1.0μmol/L NaAsO_(2)的培养基中培养到35代,建立细胞恶性转化模型。在第0代、早期(第1、7和14代)和晚期(第21、28和35代)分别检测HaCaT细胞和线粒体中还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(glutathione/oxidized glutathione,GSH/GSSG)和还原型辅酶II/氧化型辅酶II(coenzyme II/oxidized coenzyme II,NADPH/NADP^(+))比值;Mito-Grx1-roGFP2 HaCaT细胞倍增时间、细胞迁移能力、软琼脂克隆形成能力及线粒体GSH/GSSG比值。恶性转化细胞转染NRF2小干扰RNA(siRNA)沉默NRF2表达后,检测NRF2表达水平及上述各指标。结果 与对照组比较,1.0μmol/L NaAsO_(2)染毒HaCaT细胞GSH/GSSG比值在第1代和第7代明显降低,第21代以后显著升高;第1、14、21、28和35代NADPH/NADP^(+)比值显著升高。线粒体GSH/GSSG水平在第1~35代显著增加,第1、7、21、28和35代NADPH/NADP^(+)水平显著升高。1.0μmol/L NaAsO_(2)染毒Mito-Grx1-roGFP2 HaCaT细胞35代细胞倍增时间明显缩短;48 h后的划痕距离明显缩小,细胞迁移率明显增加;且能够形成明显的克隆集落。Mito-Grx1-roGFP2 HaCaT细胞线粒体内的GSH/GSSG比值在第1代明显降低,从第7代后显著增加(P<0.05)。用siRNA沉默NRF2表达后,与转染对照组比较,转染组过氧化氢和超氧化物水平均增加;细胞内和线粒体中的GSH/GSSG比值、NADPH/NADP^(+)比值,Mito-Grx1-roGFP2 HaCaT细胞线粒体内的GSH/GSSG比值均降低;细胞倍增时间增加,细胞迁移能力和软琼脂克隆形成能力显著降低(P均<0.05),恶性转化被逆转。结论 砷染毒HaCaT细胞早期(第1、7和14代)为氧化应激,NRF2持续高表达;晚期(第21、28和35代)NRF2诱导还原应激,导致恶性转化。
- 张婷姚广泽陈慧婷杨乾磊安艳
- 关键词:亚砷酸钠恶性转化HACAT细胞
- 黑枸杞花青素、EGCG对中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化损伤的协同保护作用
- 2024年
- 该研究探讨黑枸杞花青素(BWA)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的体外抗氧化能力并通过构建中波紫外线(UVB)诱导永生化人角质(HaCaT)细胞氧化损伤模型考察两者复配物对细胞氧化损伤的协同保护作用。体外抗氧化实验表明BWA、EGCG对DPPH自由基、羟自由基均具较强的清除能力和铁离子还原能力。通过Isobologram分析得出在药物安全剂量范围内,不同比例组合物对受损细胞的保护作用均优于单一物质(P<0.05),其中质量比6:4(BWA:EGCG)复配物具最强协同保护作用,协同率达17.08%,受损细胞存活率达89.71%。相较于模型组,6:4复配物使细胞内过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性分别增强2.66、1.91、2.33倍,丙二醛(MDA)含量水平降低40%(P<0.05)。结果表明BWA、EGCG均具强体外抗氧化能力,两者复配物对细胞氧化损伤具协同保护作用,其机制可能通过增强细胞中抗氧化酶活性从而减轻UVB对HaCaT细胞的氧化损伤实现,可为黑枸杞花青素与EGCG组合物的开发和应用提供理论参考及实验支撑。
- 朱恒杏邵孟茹洪天畅关颖琳林明豪潘家荣
- 关键词:表没食子儿茶素没食子酸酯协同保护作用
- 牡丹籽乙醇提取物对UVB诱导HaCaT细胞光老化的保护作用及机制研究
- 2024年
- 目的:研究牡丹籽乙醇提取物对UVB诱导人永生化角质形成细胞(HaCaT)光老化的保护作用及机制。方法:通过超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)法分析牡丹籽乙醇提取物存在的抗光老化活性成分,采用UVB刺激HaCaT细胞建立光老化细胞模型,噻唑蓝比色(MTT)法测定细胞活力,细胞划痕法检测牡丹籽乙醇提取物对细胞迁移能力的影响,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测影响衰老的白细胞介素-1(Interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-22(Interleukin-22,IL-22)、干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)和转化生长因子-β(Tansforming growth factor-β,TGF-β)等细胞因子,以活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和核因子-κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)的水平为指标,研究不同浓度的牡丹籽乙醇提取物对HaCaT细胞的抗光老化活性及其机制。结果:含量最多的前五种成分为单硬脂酸甘油酯(10.73%)、芥酸酰胺(3.17%)、5-[(2R,3S)-6-羟基-2-(4-羟基苯基)-4-[(E)-2-(4-羟基苯基)乙烯基]-2,3-二氢1-苯并呋喃-3-基]苯-1,3-二醇(2.20%)、α,α-海藻糖(1.90%)和芍药内酯苷(1.45%)。经不同浓度牡丹籽乙醇提取物处理后的HaCaT细胞活力均在80%以上,其中浓度为6.25μg/mL的牡丹籽乙醇提取物对HaCaT细胞无显著毒性,并且浓度为12.5μg/mL(H组)和6.25μg/mL(L组)的牡丹籽乙醇提取物均能抑制HaCaT细胞的迁移能力,H组能显著降低细胞IL-1、IL-6、IL-22、IFN-γ和TGF-β水平(P<0.05)从而抵抗皮肤衰老,L组能减少ROS产生,降低NF-κB蛋白因子的含量(P<0.05),从而有效地抑制HaCaT细胞的光老化反应。结论:牡丹籽乙醇提取物具有抗光老化作用,可以改善UVB诱导的氧化应激和炎症反应。
- 韩婕珺洪铮怡龚天贵王斌张蓝月
- 关键词:乙醇提取物光老化HACAT细胞
- 长链非编码RNANEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的影响
- 2024年
- 目的:探讨LncRNA NEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的调控及对HaCaT细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用PCR、Western印迹法检测HaCat细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)中LncRNANEAT1、miR-485-5p及STAT3 mRNA和蛋白表达情况。荧光原位杂交技术(FISH)和双荧光素酶报告基因检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p和STAT3之间的靶向调控关系。再通过RNA干扰技术分别沉默HaCat细胞中LncRNANEAT1、STAT3表达,以及转染miR-485-5p模拟剂(mimic)和抑制剂(inhibitor)分别上、下调miR-485-5p,然后应用PCR、Western Blot、流式细胞术、CCK8等实验技术分别检测LncRNANEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及细胞增殖、凋亡情况。结果:与NHEK细胞组相比,LncRNA NEAT1和STAT3在HaCaT细胞组中高表达,而miR-485-5p在HaCaT细胞中低表达;miR-485-5p与LncRNA NEAT1共定位于HaCaT细胞质,且miR-485-5p与LncRNA NEAT1 3′-UTR、STAT3 3′-UTR之间存在互补结合序列;共转染转野生型psiCHECK-LncRNA NEAT1-3′UTR-WT、psiCHECK-STAT3-3′UTR-WT重组质粒时,miR-485-5pmimic组相对萤光素酶活性明显低于miR-NC组。而共转染突变型psiCHECK-LncRNANEAT1-3′UTR-MUT、psiCHECK-STAT3-3′UTR-MUT重组载体质粒时,miR-485-5p mimic组和miR-NC组萤光素酶活性无明显差异;沉默LncRNA NEAT1或STAT3均可抑制HaCaT细胞增殖及促进其凋亡;下调miR-485-5p可促进HaCaT细胞增殖及抑制其凋亡,而上调miR-485-5p则与之相反;下调miR-485-5p可减弱沉默LncRNANEAT1对HaCaT细胞功能的影响。结论:LncRNANEAT1可通过充当竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)吸附miR-485-5p增强STAT3表达来促进HaCaT细胞增殖并抑制其凋亡。
- 唐志铭丁继存陆鹭单霄王咏露鹿晓兰荆梦晴
- 关键词:HACAT细胞STAT3
- 槐提取物和维生素C组合物对紫外照射诱导的HaCaT细胞光损伤的保护作用被引量:2
- 2024年
- 本研究旨在探讨槐提取物和维生素C(Vitamin C,V_(C))对紫外线照射引起的HaCaT细胞光损伤的保护作用。通过体外培养HaCaT细胞并将其分为不同组别:对照组(未接受紫外辐照,无槐提取物、V_(C)或二者组合物处理)、紫外线辐射组、125μg/mL槐提取物(接受紫外辐照及槐提取物处理)、125μg/mL维生素C(接受紫外辐照及维生素C处理)以及125μg/mL组合物组(接受紫外辐照及组合物处理,槐提取物和V_(C)质量比为1:1)。采用荧光染色和酶标仪检测技术来评估槐提取物、V_(C)及二者组合物对紫外照射引起的HaCaT细胞产生的活性氧物质(ROS)和线粒体ROS的抑制率。利用免疫荧光染色和酶联免疫吸附法检测槐提取物、V_(C)和组合物对紫外照射引起的HaCaT细胞中环丁烷嘧啶二聚体(Cyclobutane pyrimidine dimers,CPDs)和细胞炎症因子IL-6的表达水平。结果显示,槐提取物、V_(C)和组合物对UVA处理后HaCaT细胞生成的总ROS抑制率分别为38.23%±9.23%、27.20%±6.87%及64.13%±4.08%,与单独使用槐提取物或V_(C)处理相比,组合物显著提高总ROS抑制率(P<0.01)。槐提取物、V_(C)和组合物对线粒体ROS(Mitochondrial DNA,mtROS)的抑制率分别为50.29%±4.92%、38.81%±8.66%及84.74%±3.68%,与单独使用槐提取物或V_(C)处理相比,组合物极显著提高mtROS抑制率(P<0.01)。此外,在UVB照射后,槐提取物、V_(C)及组合物可极显著减少CPDs的生成(P<0.01),这种效应在组合物组效果更为显著(与槐提取物组比较P<0.05;与V_(C)组比较P<0.01)。同时,槐提取物和组合物显著降低UVA照射后炎症因子IL-6的分泌(P<0.01;P<0.05),表明槐提取物及组合物具有抗炎作用。本研究结果表明槐提取物和维生素C组合物能减轻紫外线引起的氧化应激损伤和炎症反应,为未来体内研究和开发具有健康益处的槐提取物和V_(C)组合物提供实验支持。
- 孙璇李萍孙静郑嘉妮余丹阳张艳美陈朋
- 关键词:维生素CHACAT细胞抗氧化活性炎症因子
- 清热凉血汤含药血清对HaCaT细胞PKM2介导的糖酵解和细胞增殖、凋亡的调节作用
- 2024年
- 目的 探讨清热凉血汤(QRLXD)含药血清基于M2型丙酮酸激酶(PKM2)及其下游缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)介导糖酵解的信号通路,对活化的HaCaT细胞增殖、凋亡和炎症因子分泌的影响。方法 制备QRLXD含药血清与空白血清,构建肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HaCaT细胞银屑病模型,使用compound 3k(C3K)特异性抑制HaCaT细胞PKM2通路。原代培养HaCaT细胞,使用CCK-8法检测不同浓度(1、5、10、20、50、100μg/mL)QRLXD的含药血清对HaCaT细胞增殖的影响,并由此选择合适剂量用于后续实验。将HaCaT细胞分为空白对照(C)组、模型(M)组、C3K组、QRLXD低剂量(QRLXD-L)组、QRLXD中剂量(QRLXD-M)组、QRLXD高剂量(QRLXD-H)组,流式细胞术检测各组细胞的凋亡水平,蛋白质印迹法(Western Blot)检测PKM2、HIF-1α、GLUT1蛋白表达,实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测细胞PKM2、HIF-1α、GLUT1 mRNA表达,发光法检测细胞的细胞内丙酮酸激酶(PK)活性、葡萄糖含量、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)水平及分泌乳酸水平,酶联免疫吸附测定法检测细胞白细胞介素-17(IL-17)和TNF-α分泌水平。结果 根据CCK-8结果,选择1、5、10μg/mL QRLXD含药血清设置为低、中、高剂量组,并干预24 h进行后续实验。与C组比较,M组细胞活力比值增加、凋亡率减少(P<0.01);PKM2、HIF-1α、GLUT1蛋白及m RNA表达升高(P<0.05,P<0.01);糖酵解相关指标葡萄糖含量、PK活性、乳酸及ATP含量均显著升高(P<0.01);炎症因子IL-17和TNF-α也明显增加(P<0.01)。与M组比较,C3K组及QRLXD-L、M、H组均能抑制细胞增殖且使细胞凋亡率增加(P<0.01),下调细胞中PKM2、HIF-1α、GLUT1蛋白及mRNA表达(P<0.05,P<0.01),细胞内PK活性、葡萄糖含量、ATP水平及培养液中乳酸水平均降低(P<0.05,P<0.01),细胞分泌的炎症因子IL-17、TNF-α显著减少(P<0.05,P<0.01),且含药血清的作用呈现剂量依赖性关系。与C3K组比较,各含药血清组抑制PKM2通道�
- 张维明董晓宛陈柏林白彦萍
- 关键词:清热凉血汤糖酵解M2型丙酮酸激酶缺氧诱导因子-1Α葡萄糖转运蛋白1HACAT细胞
- 向日葵油、山茶油和亚麻子油对脂多糖诱导HaCaT细胞的作用
- 2024年
- 为研究向日葵油、山茶油和亚麻子油对损伤的角质形成细胞的修复作用机制,构建脂多糖(LPS)诱导的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)作为损伤研究模型,通过免疫印迹法和实时定量荧光PCR(qPCR)分别检测植物油对细胞损伤模型中丝裂原活化的蛋白激酶(MAPKs)信号通路的磷酸化激活水平和屏障相关蛋白mRNA表达情况。结果发现在1%(质量分数)时山茶油和亚麻子油能够显著抑制MAPKs信号通路主要蛋白的磷酸化水平和人组织激肽释放酶7(KLK7)mRNA的表达,显著促进丝聚蛋白(FLG)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白14(Caspase14)mRNA表达,提示山茶油和亚麻子油可抑制MAPKs信号通路介导的生物学损伤,促进LPS诱导的HaCaT细胞修复。
- 方婷欢余娅丽蒋晴李晓霞唐礼荣
- 关键词:山茶油角质形成细胞
- 四氢嘧啶对HaCaT细胞活力及AQP3、Claudin-1、ZO-1表达的影响
- 2024年
- 目的研究四氢嘧啶(Ectoine)对人角质形成细胞(HaCaT)的细胞活力、细胞凋亡率和细胞活性氧(ROS)的影响,并分析水通道蛋白3(AQP3)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、闭锁连接蛋白(ZO-1)的表达水平。方法设置Ectoine浓度实验组和空白对照组,培养HaCaT细胞(24 h),采用CCK8法检测HaCaT细胞的细胞活力,甄选最佳的Ectoine作用浓度。用Western Blot法检测HaCaT细胞的AQP3、Claudin-1、ZO-1表达水平;用流式细胞仪检测HaCaT细胞的凋亡率及胞内ROS水平。结果CCK8法检测结果显示,0.10%Ectoine组、0.20%Ectoine组、0.30%Ectoine组的HaCaT细胞活力均高于120%,其中0.20%Ectoine组最高(146.92%±7.67%)。Ectoine浓度实验组相对于空白对照组,HaCaT细胞的AQP3、Claudin-1、ZO-1表达水平明显升高(P<0.05),且细胞凋亡率和胞内ROS水平均明显降低(P<0.05)。结论Ectoine可提高HaCaT细胞的细胞活力,降低凋亡率和胞内ROS水平,上调AQP3、Claudin-1、ZO-1表达水平。Ectoine可能与相关保湿蛋白的表达相关,对HaCaT细胞具有一定的保护作用。
- 高翔严雅军徐烁乔丽娟李欣冉朱德锐
- 关键词:四氢嘧啶人角质形成细胞水通道蛋白3
相关作者
- 顾军

- 作品数:570被引量:2,105H指数:19
- 供职机构:第二军医大学附属长海医院
- 研究主题:银屑病 银屑病患者 角质形成细胞 HACAT细胞 红细胞
- 王春波

- 作品数:286被引量:1,002H指数:18
- 供职机构:青岛大学医学院
- 研究主题:扇贝多肽 左卡尼汀 HACAT细胞凋亡 HACAT细胞 小鼠
- 骆丹

- 作品数:515被引量:1,665H指数:18
- 供职机构:江苏省人民医院
- 研究主题:中波紫外线 成纤维细胞 黄芩苷 紫外线 紫外线诱导
- 曹毅

- 作品数:319被引量:967H指数:13
- 供职机构:浙江中医药大学附属第一医院
- 研究主题:疗效观察 跖疣 HACAT细胞 黄褐斑 斑秃
- 杨晓红

- 作品数:93被引量:231H指数:8
- 供职机构:浙江省中医院
- 研究主题:HACAT细胞 银屑病 MIR-21 HACAT 特应性皮炎