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潮霉素抗性油菜遗传转化体系优化 2023年 油菜分子育种有赖于高效的遗传转化技术。为提高甘蓝型油菜的遗传转化效率,采用油菜品种中双6号为材料,以下胚轴为外植体,通过农杆菌介导遗传转化,通过改变筛选培养基状态,增加液体培养基筛选处理的方式,对以潮霉素为筛选剂的油菜遗传转化体系进行了优化。在传统的固体筛选培养基培养21 d后,以液体筛选培养基形式对愈伤组织进行3 d再筛选培养。与传统方法相比,优化后再生苗形成提前约一周,出苗率提高6.94%,转基因苗阳性率提高15%,总转化效率提高6%。综上,该优化后的方法可为油菜基因功能解析与转基因育种研究提供有效技术支撑。 刘婧琳 范世航 华玮 李俊关键词:甘蓝型油菜 潮霉素 下胚轴 农杆菌介导法 不同甘蔗品种对潮霉素B耐受性的研究 2023年 旨在探讨不同甘蔗品种对潮霉素B的耐受性,为甘蔗遗传转化后的筛选提供参考。以甘蔗品种新台糖22号与粤糖00-236的胚性愈伤组织与增殖阶段的组培苗为试验材料,分别接入加有潮霉素B5、15、25、35、45 mg/L的愈伤分化培养基和加有潮霉素B 15、30、45 mg/L的繁殖培养基中。结果表明,2个品种甘蔗对潮霉素B的耐受性存在差异。新台糖22号的愈伤组织在潮霉素B浓度为45 mg/L时转绿率和成苗率分别为12.60%和5.20%;粤糖00-236转绿率和成苗率分别为36.17%和2.66%,2个品种绝大部分转绿的愈伤块都不能分化成苗。潮霉素B浓度为45 mg/L时,新台糖22号组培苗的死亡率为76.28%,勉强存活的苗生长受到严重抑制,苗矮小叶色黄;而粤糖00-236的组培苗死亡率已达92.6%,基本停止生长。因此,在甘蔗愈伤组织分化阶段和组培苗增殖阶段选择潮霉素B浓度45mg/L为适合的筛选浓度。 何慧怡 陈勇生 张南南 吴嘉云 王勤南 高小宁 黄咏虹 陈兴龙关键词:甘蔗 耐受性 潮霉素B对拟南芥种子萌发及幼苗生长的影响 2023年 为探究拟南芥种子进行1/2 MS培养基筛选的最适潮霉素浓度,将野生型拟南芥种子灭菌后,点播在含0,20,30,40,50 mg/L潮霉素的1/2 MS培养基上进行培养(分别记为M_(0)、M_(1)、M_(2)、M_(3)、M_(4)),观察潮霉素对种子萌发、幼苗生长形态变化的影响,统计种子萌发率、第3天萌发势、第13天幼苗失绿死亡率,测定第7天幼苗鲜重、干重、相对含水率、主根长度,结合逆向思维的变异系数-熵权组合赋权的TOPSIS方法得出不同浓度潮霉素处理效果的综合排序。结果表明,潮霉素对拟南芥种子萌发和幼苗生长均有明显的抑制作用;变异系数-熵权组合赋权的TOPSIS方法得出不同处理对拟南芥种子萌发和幼苗生长抑制效果的排序为:M_(4)>M_(3)>M_(2)>M_(1)>M_(0),M_(2)的接近度为0.531 5,约为0.5,最接近抑制效果的50%;综合实验结果可知,拟南芥种子进行1/2 MS培养基筛选的适宜潮霉素浓度为30 mg/L,种子点播的第7~10天为幼苗移栽的适宜时期。 程琳琳 王璇 彭文涛 王璇 王纪坤 周立军 安锋关键词:拟南芥 种子萌发 幼苗生长 TOPSIS方法 Bi_(2)S_(3)/TiO_(2)纳米锥光阳极的制备及其光电催化降解土霉素 2023年 使用两步水热法成功制备了棒状Bi_(2)S_(3)修饰的TiO2纳米锥(TNCs)光阳极材料,通过调节硫元素的含量探索最佳负载,并用于模拟可见光下降解土霉素。对Bi_(2)S_(3)/TNCs光阳极的晶型、元素价态、表面形貌和光电、电化学性能进行了详细的表征。结果表明,Bi_(2)S_(3)/TNCs光阳极显著提高了光电催化性能,表现出更低的电荷转移电阻,光电流密度是TNCs的3倍左右。紫外-可见分光光度计在355nm处测试结果表明,Bi_(2)S_(3)/TNCs光阳极在90min内成功降解了80.3%的土霉素,5次循环后仍保持良好的稳定性。此外,还对带隙能、价带谱、莫特-肖特基曲线和自由基捕获实验进行分析,提出了一种可能的光电催化降解机理。这些结果表明,Bi_(2)S_(3)/TNCs光阳极对降解抗生素具有很大的潜力。 张会霞 周立山 张程蕾 钱光磊 谢陈鑫 朱令之关键词:光电催化 土霉素 宁夏枸杞潮霉素抗性浓度筛选研究 被引量:3 2022年 研究旨在探索适合枸杞的潮霉素筛选剂量,为枸杞基因功能的研究、遗传转化提供参考。以宁夏枸杞无菌苗叶片为外植体,设置4个潮霉素浓度梯度,研究其对诱导愈伤组织和愈伤组织诱导分化芽的影响,以选出适合枸杞转化体筛选的抗生素剂量。结果表明,随着潮霉素浓度的升高,其对枸杞诱导愈伤组织和愈伤组织诱导芽分化的抑制作用加强。潮霉素浓度越高,枸杞叶片的出愈率越低,愈伤组织的褐化率越高,且叶片逐渐变黄、白化甚至死亡。将潮霉素作为抗性选择标记时,抗性浓度以2 mg/L为最佳。 樊云芳 刘露露 张晶 罗青 张波 曹有龙关键词:宁夏枸杞 潮霉素 Transcriptome Responses of Hygromycin B Resistance Gene-Transformed, Hygromycin B-Adaptive and Wild Nannochloropsis oceanica Strains to Hygromycin B 2020年 In order to decipher the hygromycin B tolerance and resistance mechanisms of Nannochloropsis oceanica,the transcriptome profiles of a transgenic strain carrying a randomly integrated hygromycin B resistant gene,a hygromycin B-adaptive strain and a wild type strain of N.oceanica were compared by transcriptome sequencing(RNA-seq)without referring to a high quality genome sequence.The results showed that the adaptive strain adapts to the hygromycin B existing environments mainly by intensifying the expressions of the efflux pump ABC and MFS superfamily transporter genes,thus reducing the intracellular concentration of hygromycin B.The transgenic strain obtains the hygromycin B resistance ability solely by expressing exogenous resistance gene.Accordingly,the screening and maintenance of N.oceanica transformants should be carried out at an antibiotics concentration higher than the adaptive threshold.Our findings can help the genetic modification of N.oceanica with the application of hygromycin B. LIU Hang ZHANG Zhongyi LIANG Sijie GUO Li SUN Shiyang PAN Kehou YANG Guanpin关键词:TOLERANCE TRANSCRIPTOME 八棱海棠高效再生体系的建立及潮霉素的抗性试验 被引量:1 2020年 以八棱海棠子叶为外植体,比较了不同浓度植物激素、不同激素组合、不同暗培养时间及不同浓度潮霉素对八棱海棠再生体系的影响,建立了八棱海棠高效再生体系,筛选并分析了潮霉素在八棱海棠遗传转化中的适宜浓度。结果表明:诱导子叶愈伤的最佳培养基为Sc+2.0 mg·L^-1 TDZ+0.2 mg·L^-1 NAA+0.5 mg·L^-1 GA3,芽再生的最佳培养基为Sc+2.0 mg·L^-1 TDZ+0.2 mg·L^-1 NAA,暗培养最佳时间为10 d,生根最佳培养基为1/2MS+0.25 mg·L^-1 IBA。八棱海棠在整个再生过程中均对潮霉素敏感,在潮霉素浓度为2.0 mg·L^-1的愈伤诱导培养基上,外植体的愈伤诱导率仅为23.33%,分化率仅为9.88%;当潮霉素浓度为4.0 mg·L^-1时,愈伤诱导率下降为13.00%,而且愈伤不分化,随着培养时间延长,愈伤组织变得更加致密,之后变褐死亡。在诱导生根培养基上添加3.0 mg·L^-1潮霉素,生根率仅为3.52%,大部分外植体再生芽底部只会诱导出愈伤组织,没有根原基形成。八棱海棠子叶愈伤诱导及分化的潮霉素筛选临界浓度为2.0~4.0 mg·L^-1,生根时潮霉素筛选浓度为2.0~3.0 mg·L^-1。 张苓 彭日荷 付晓燕 高建杰 王明清 姚泉洪关键词:八棱海棠 潮霉素 潮霉素和草铵膦对4种草莓资源的选择效果分析 2019年 以‘红颜’‘申阳’‘章姬’‘Yellow Wonder’的离体叶片、叶柄、根为试验材料,对潮霉素(Hyg)敏感性进行研究;并以上述4种草莓资源的离体叶片为材料,探究其对草铵膦有效成分PPT的敏感性。结果表明:野生草莓‘Yellow Wonder’对两种筛选剂最为敏感。除‘申阳’草莓(叶片比根敏感)外,其他3种草莓资源均为根对Hyg较其叶片敏感。结合愈伤诱导受抑制情况,认为‘红颜’‘申阳’‘章姬’‘Yellow Wonder’叶片Hyg最佳选择压分别为4 mg/L、6 mg/L、6 mg/L、4 mg/L;PPT最佳选择压分别为0.8 mg/L、0.8 mg/L、1.0 mg/L、0.6 mg/L。 赵映洁 杨静 邹小花 高清华 郑洪建 段可关键词:草莓 潮霉素 草铵膦 敏感性 选择压 铁皮石斛原球茎对潮霉素及卡那霉素的敏感性研究 2019年 为了探索农杆菌介导的遗传转化中铁皮石斛对抗生素的耐性,本试验以铁皮石斛原球茎为原材料,在培养基中分别添加不同浓度潮霉素和卡那霉素进行培养,筛选出最适合铁皮石斛遗传转化的抗生素种类和浓度。研究表明:潮霉素浓度为40 mg/L时为临界浓度,接种一周后,植株出现黄化现象,2周后,出现死亡植株,培养17周后,铁皮石斛完全死亡。潮霉素浓度越大,铁皮石斛褐化和黄化速率增加,死亡速率越快,浓度低于40 mg/L,铁皮石斛则拥有一定的存活率,为15%左右。当卡那霉素浓度为600 mg/L,铁皮石斛的褐化和黄化现象出现在培养后第3周,培养17周后,浓度为200 mg/L、400 mg/L、600 mg/L卡那霉素,铁皮石斛原球茎死亡率依次为72%、68%、78%,之后仍保持一定的存活量。实验结果表明,铁皮石斛对潮霉素敏感性远大于卡那霉素,由此说明,铁皮石斛遗传转化中应选用潮霉素作为抗生素,而且使用浓度应在40 mg/L以上,卡那霉素不能用于铁皮石斛遗传转化。 刘玉红 和凤美 朱永平 赵家清关键词:铁皮石斛 潮霉素 卡那霉素 死亡率 原球茎 条斑紫菜对潮霉素敏感性研究 2018年 条斑紫菜作为重要的经济海洋藻类,已在基因工程领域中做了诸多研究,包括核遗传转化和质体遗传转化,并且已经在紫菜中实现稳定表达和瞬时表达。文章研究了条斑紫菜对潮霉素的敏感性,获得筛选条件。结果表明,潮霉素对条斑紫菜叶状体的筛选浓度为2mg/mL,其中RZ品系筛选时间为15天;野生型品系为14天。对条斑紫菜原生质体的筛选浓度为0.5mg/mL,其中RZ品系筛选时间为7天;野生型品系为6天。该结果有助于基因编辑系统CRISPR/Cas9技术在条斑紫菜研究中的应用。 何婕培关键词:条斑紫菜 敏感性 潮霉素