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人源R -spondin 2蛋白的生物信息学分析、表达、纯化及活性检测 2024年 目的构建人源R -spondin 2(r oof plate-specific spondin 2,R SPO2)的真核表达载体,表达、纯化融合蛋白R SPO2-Fu-Fc,用3C蛋白酶切除Fc结构域后,检测R SPO2-Fu的生物学活性。方法基于生物信息学方法分析人源R SPO2蛋白的理化性质和结构,筛选获得可在溶液中稳定存在的R SPO2截短蛋白R SPO2-Fu。将编码R SPO2-Fu蛋白的基因亚克隆至pCMV-Fc载体后,将质粒pCMV-R SPO2-Fu-Fc瞬时转染入HEK293F细胞中表达72 h,通过Pr otein A层析柱纯化融合蛋白R SPO2-Fu-Fc,用3C蛋白酶切去Fc结构域,分子筛进一步提纯获得R SPO2-Fu蛋白。最后,通过M50Super 8×TOPFlash检测R SPO2-Fu蛋白的生物学活性。结果生物信息学分析结果显示,R SPO2全长有243个氨基酸,相对分子质量为28300,等电点为9.42,为亲水性不稳定蛋白,R SPO2-Fu截短蛋白在溶液中的稳定性得到了极大提高;重组表达质粒pCMV-R SPO2-Fu-Fc经菌落PCR 及测序证明构建正确;获得了纯度达95%的R SPO2-Fu蛋白;生物学活性检测结果显示,R SPO2-Fu的EC50值为1.5×10^(-12)mol/L。结论对R SPO2蛋白适当截短后,可获得稳定表达的R SPO2-Fu蛋白,其对Wnt信号通路有明显激活作用,为Wnt信号通路中R SPO2相关生物学研究提供了更好的参考。 耿腾洁 许剑锋关键词:荧光素酶报告基因 WNT信号通路 R -spondin 2调控Wnt/β-catenin信号通路的机制及其对骨骼系统的影响2024年 R -spondin 2(R spo2)是蛋白质家族R SPOs成员之一,其可以通过富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体4/5(leucine-r ich r epeat-containing G pr otein-coupled r eceptor 4/5,LGR 4/5)、细胞表面跨膜E3泛素连接酶ZNR F3/R NF43(zinc and r ing finger 3/r ing finger pr otein 43)、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(hepar an sulfate pr oteoglycans,HSPGs)和含GTP酶激活蛋白质1的IQ基序(IQ motif-containing GTPase-activating pr otein 1,IQGAP1)来调控Wnt/β连环蛋白(catenin)信号通路,Wnt/β-catenin信号通路是目前研究最广泛且与基础骨生物学直接相关的信号通路,该通路中任何一环节出现问题都可能对骨的调控产生影响。近年来研究发现,R spo2可以通过Wnt/β-catenin对成骨细胞(osteoblast,OB)、破骨细胞(osteoclast,OC)和软骨细胞产生作用,并参与一些骨骼疾病如脊柱后纵韧带骨化(ossification of the poster ior longitudinal ligament,OPLL)、骨关节炎(osteoar thr itis,OA)和类风湿性关节炎(r heumatoid ar thr itis,R A)的发生发展,因此对R spo2的研究可能会成为骨相关疾病新的治疗方向。本文结合最新研究进展,就R spo2的结构和主要功能、R spo2调控Wnt/β-catenin信号通路的相关机制及其对骨骼系统的影响作一综述,以期为骨相关疾病的防治提供新的思路和途径。 晋俊杰 李晶 胡广璇 吴若萌 衣雪洁关键词:WNT/Β-CATENIN信号通路 成骨细胞 破骨细胞 软骨细胞 外源激素对中华鳖R -Spondin 2(R spo2)和R -Spondin 3(R spo3)基因表达和胚胎发育的影响 中华鳖(Pelodiscus sinensis)是中国重要的水产养殖品种,具有显著的性别二态性,雄性个体比雌性个体具有更高的经济价值。在脊椎动物中,已有多个R -Spondin家族蛋白与性别分化机制密切相关;然而,它们在中... 曹继增 周同 陈国彬 邹桂伟 梁宏伟关键词:中华鳖 性逆转 胚胎发育 R -spondin 蛋白家族调控WNT信号通路机制及其对肿瘤进展的影响2024年 R -spondin 蛋白家族由4种分泌糖蛋白R -spondin 1~4组成,是包含凝血酶敏感蛋白1型重复序列(TSR )-1结构域家族。R -spondin s通过富含亮氨酸的G蛋白耦联受体LGR 4/5/6、细胞表面跨膜E3泛素连接酶(ZNR F3/R NF43)、硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPGs)、包含GTPase激活蛋白(IQGAP)1来增强WNT信号通路在胚胎发育、器官稳定、干细胞自我更新发挥作用。 陈明洲 李朝旭 贵鹏 王胜涛 陈东旭 彭伟关键词:WNT信号通路 肿瘤 R -spondin 1对食管鳞癌类器官培养的影响和传代消化酶的选择2024年 目的优化食管鳞癌类器官的培养方法。方法收集郑州大学第二附属医院胸外科2023年5月至2024年3月食管鳞癌手术标本20例,用含/不含R -spondin 1的培养基培养类器官,观察二者对类器官生长的影响,同时比较市售的0.25%Tr ypsin-EDTA、1×Tr yple和自配的组织消化液对类器官的消化效果。结果用含/不含R -spondin 1培养基培养食管鳞癌类器官时,两者的类器官大小、生长速率无明显差别(P>0.05)。0.25%Tr ypsin-EDTA消化细胞球时,细胞分散状态好,所生成的细胞球的数量均多于组织消化液和1×Tr yple,1×Tr yple消化细胞球的效率和所生成的细胞球的数量均大于组织消化液。结论R -spondin 1对食管鳞癌类器官的形成无明显影响;类器官传代扩增时,用0.25%Tr ypsin-EDTA有较好的消化效果。 邹锋 银潇迪 张澳华 赵家辉 郑玮涵 马军关键词:食管鳞癌 脊椎蛋白2对BMSCs成骨分化及卵巢去势小鼠骨代谢的作用研究 2024年 目的探讨脊椎蛋白2(R -spondin 2,R spo2)对BMSCs成骨分化及卵巢去势(ovar iectomy,OVX)小鼠骨密度和骨矿含量的影响。方法取7只4周龄雌性C57BL/6小鼠长骨骨髓,采用全骨髓培养法分离培养BMSCs并传代,经流式细胞仪鉴定细胞表型后,取第3代细胞与10、20、40、80和100 nmol/L R spo2共培养,采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞增殖,评价R spo2对BMSCs活性影响并筛选不影响细胞活性的R spo2干预浓度;与不同筛选浓度R spo2培养后更换为成骨诱导培养基诱导培养,行ALP及实时荧光定量PCR (r eal time fluor escence quantitative PCR ,R T-qPCR )检测R UNX家族转录因子2(R UNX family tr anscr iption factor 2,R unx2)、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠalpha 1,Col1)、骨钙素(osteocalcin,OCN)基因表达,评价R spo2对BMSCs成骨能力的影响;以上检测均以正常培养BMSCs作为对照。另取18只10周龄雌性C57BL/6小鼠,随机分为假手术组、OVX组和OVX+R spo2组,每组6只。假手术组仅行双侧背部切开缝合,其余两组通过双侧OVX建立骨质疏松模型;术后OVX+R spo2组每周腹腔注射R spo2(1 mg/kg),其余两组接受相同剂量生理盐水。干预12周后,3组称重小鼠体质量及子宫质量,评估OVX模型制备是否成功;取胫骨行HE染色观察骨量变化、免疫组织化学染色观察骨组织中R unx2蛋白表达水平;ELISA法检测血清中骨代谢标记物[ALP、OCN、Ⅰ型前胶原氨基端肽(typeⅠpr ocollagen amino-ter minal peptide,PINP)]和骨吸收标记物[β胶原降解产物(β-isomer ized C-telopeptide,β-CTX)]表达水平;Micr o-CT检测胫骨微结构变化,并对骨小梁厚度(tr abeculae thickness,Tb.Th)、骨小梁数量(tr abeculae number ,Tb.N)、骨小梁分离度(tr abeculae separ ation,Tb.Sp)和骨体积分数(bone volume fr action,BV/TV)进行三维组织形态计量分析。结果CCK-8检测示80 nmol/L以下浓度的R spo2不会产生细胞毒性(P>0.05),且20 nmol/L R spo2组细胞活力明显高于对照组(P<0.05)。基于上述结果,� 柳鑫 石博文 蔡成阔 王昊天 贾鹏关键词:BMSCS 骨形成 小鼠 R -spondin 蛋白的重组变体及其用途 本发明涉及R ‑spondin 蛋白的重组变体及其作为药物的用途,特别是用于治疗糖尿病。 P·科隆巴 P·博蒂一种Wnt-3a和R -spondin 1共表达细胞株的构建方法和应用 本发明公开了一种Wnt‑3a和R ‑spondin 1共表达细胞株的构建方法和应用,属于分子生物技术技术领域。通过构建同时搭载有人Wnt‑3a和R ‑spondin 1两个基因的多顺反子表达质粒pCDH‑pur omycin‑Wn... 郭燕 张慧 王晨 杨铁林 安珂Let-7i-5p maintains the stemness via R -spondin 2/Wnt pathway in hepatocellular car cinoma 2024年 Cancer stem cells(CSCs)ar e r elated to tumor igenesis,r ecur r ence,metastasis,and dr ug r esistance in hepatocellular car cinoma(HCC).1 Let-7i is a noncoding small R NA,belonging to the famous miR NA let-7 family.R ecently,let-7i has been r evealed as a tumor suppr essor on CsCs in ovar ian cancer . Qinghua Wei Xueshan Dai Jiahui Wei Wenwei Sun Xiaoqian Yang Yuxin Zhang Xin Guo Yi Chen关键词:HEPATOCELLULAR METASTASIS 一种类器官培养关键因子R -spondin 1及其制备方法和应用 本发明涉及生物技术领域,公开一种类器官培养关键因子R ‑spondin 1及其制备方法和应用,该方法包括:构建用于制备关键因子R ‑spondin 1的核酸,对核酸进行优化,然后与质粒通过酶切连接,获得重组质粒转化至大肠杆菌... 孙益军 张玥 张峰 杨文骏 李利云 王琪玉
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