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基于核酸适配体的SYBR Green I qPCR法检测鳗弧菌(Vibrio anguillarum) 2024年 SYBR Green I实时荧光定量PCR(qPCR)扩增,通过Ct值来定量检测鳗弧菌的浓度,从而建立了鳗弧菌的适配体-qPCR定量检测方法。从特异性、标准曲线、灵敏度、重复性和应用效果对该方法进行分析,表明该方法具有很强的特异性,能特异性地扩增鳗弧菌,且对哈维氏弧菌、溶藻弧菌、变形假单胞菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌均无扩增;在10^(3)~10^(11) CFU/L的检测范围内有较好的线性关系,可用于鳗弧菌的定量检测;同时,该方法有较高的灵敏度和稳定性,其最低检测限为10^(3) CFU/L,组内和组间变异系数分别小于0.17%和1.98%;最后采用该方法对鱼体组织样品进行了应用检测,证明了该方法具有较好的可行性和应用性,可用于水产品或食品中鳗弧菌的定量检测。关键词：鳗弧菌 核酸适配体 实时荧光定量PCR 检测限 丝虫SYBR Green实时荧光PCR检测方法的建立 2024年 SYBR Green实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法,为丝虫病的快速筛查和临床诊断提供实验室依据。方法 根据丝虫基因组保守区域,设计并筛选特异性引物。对引物浓度、荧光染料浓度及扩增条件进行优化,建立丝虫SYBR Green实时荧光PCR检测方法,并对其检测下限、特异性、抗干扰能力、重复性和亚型检测能力等进行评估。结果 本研究建立的丝虫SYBR Green实时荧光PCR检测方法能对感染人的5种丝虫(班氏丝虫、马来丝虫、盘尾丝虫、罗阿丝虫、帝汶丝虫)进行特异性扩增,与其他相近寄生虫(锥虫等)无交叉反应。该方法的检测下限为500 fg,批内精密度测试循环阈值(Ct值)为32.37~33.03,均值为32.73,标准差为0.20,变异系数(CV)为0.61%。干扰试验中,存在干扰因素样本的Ct值与正常样本的Ct值差值分别为0.79(溶血)、0.78(脂血)、0.29(乳糜尿)、0.51(腐败蚊体),表明该方法能有效对抗溶血、脂血、乳糜尿、腐败蚊虫组织等干扰因素的影响。结论 本研究建立的SYBR Green实时荧光PCR方法具有特异性强、敏感度高、重复性好以及抗干扰能力强的优点,是一种快速检测丝虫的可行方法。关键词：丝虫 丝虫病 PCR 猪丹毒丝菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立 2024年 SYBR Green Ⅰ荧光定量 PCR 检测方法,并对该方法进行灵敏度、特异性和重复性测定。 结果表明,本研究建立的检测方法对在 2×10^(2)~2×10^(9)copies/ μL 浓度范围内的质粒标准品有良好的线性关系, 线性相关系数 R^(2)=0.999 5,标准曲线为 y=-3.231x+41.834,未见非特异性扩增。 该方法对质粒标准品最低检测浓度为 20 copies/ μL,敏感度比普通 PCR 提高了 1 000 倍。 用该方法检测猪支气管败血波氏杆菌(Bb)、猪链球菌 3 型(Ss3)、猪链球菌 2型(Ss2)、大肠杆菌(E.coli)、沙门菌(Salmonella)和多杀性巴氏杆菌(Pm)时,检测结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。重复试验结果显示,组内和组间的变异系数均小于 2%,表明该方法具有良好的重复性。运用本试验建立的方法对 20 株疑似猪丹毒丝菌临床样品进行检测,阳性检出率为 60%,高于普通 PCR 检出率(50%)。 综上,本试验建立的检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,适合临床上快速诊断丹毒丝菌。鸡圆环病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：1 2024年 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果显示:试验建立的方法对2.87×10^(8)~2.87×10^(1)copies/μL浓度范围的CCV重组质粒标准品呈现良好的线性关系,相关系数(R^(2))为0.9936,灵敏度比常规PCR高100倍;该方法对鸡传染性贫血病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒等常见鸡病毒性病原以及多杀性巴氏杆菌、禽致病性大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌无特异性扩增,批内和批间变异系数均不超过1%;该方法对60份疑似CCV感染临床样品检测结果显示,CCV阳性检出率(16.67%)高于常规PCR。上述结果表明,研究建立的CCV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,检出限为2.87×10^(1)copies/μL,可以用于CCV的快速定量检测。基于SYBR Green的实时qPCR法定量检测动物脂肪中的RNA 2024年 SYBR Green的实时荧光定量PCR(Quantitative Real-Time PCR,RT-qPCR)测定不同动物脂肪中RNA表达水平的方法。结果表明,改进后的TRIzol^((R))提取方法能够从动物脂肪中有效提取出200~500 ng·μL^(-1)的高纯度RNA。经RT-qPCR反应后所有提取的RNA样本均展现出了优异的扩增性能。本研究开发的TRIzol^((R))提取法结合RT-qPCR的新方法,可为后续动物脂肪的鉴别和追溯提供数据支撑。关键词：动物脂肪 RNA提取 实时荧光定量PCR 水禽细小病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立与应用 2024年 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR通用检测方法。该方法的扩增效率(E)为90.0%,相关系数(R~2)=0.99,标准曲线方程为y=-3.607x+38.77;除WPV出现S形扩增曲线外,新城疫病毒(NDV)、H9亚型禽流感病毒(H9 AIV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭肝炎病毒(DHAV)、鸭肠炎病毒(DEV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)样品均未出现S形阳性扩增曲线;批内变异系数(CV)为0.15%~0.23%,批间变异系数为0.09%~0.28%。结果表明,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法重复性好、灵敏度高和特异性强。临床样品检测结果表明,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR与普通PCR的符合率达98.4%,灵敏度是普通PCR的1 000倍。SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法不仅能定性检测WPV,还可以进行定量检测,可用于种鸭场、种鹅场的WPV净化检测,也可用于WPV临床大量样品的快速检测。关键词：荧光定量PCR 猪流行性腹泻病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：1 2024年 SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。经过一系列试验表明,该检测方法线性关系良好,R^(2)值为0.99;特异性强,敏感性高,最低可检测至2.23 copies/μL,比普通PCR灵敏约100倍;重复性好,组内变异系数为0.25%~0.43%,组间变异系数为0.67%~0.97%;对于各地区96份临床样品检测出PEDV阳性率为25%。本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法为PEDV的临床诊断、流行病学调查以及定量研究提供了有效的检测工具。关键词：猪流行性腹泻病毒 N基因 荧光定量PCR 鸽圆环病毒Cap基因SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立及应用 2024年 关键词：实时定量PCR 香辛料SYBR GREENⅠ染料实时聚合酶链式反应检测方法的建立及应用 2024年 SYBR GREENⅠ染料实时聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法,通过设计特异性引物成功建立了特异性检测八角、茴香、胡椒和花椒的分析技术。结果:该方法能够特异性检测出八角、茴香、胡椒、花椒,Ct值在标准品体积分数0.001%~10%范围内线性关系良好。针对八角标准品,检测限为1%;针对茴香、花椒、胡椒标准品,最检测限均为0.001%。利用该方法对5份实际样本进行检测,分别在样本1中未检测出八角、茴香、胡椒、花椒;样本2、3、5中检测出八角、茴香、胡椒;样本4中检测出八角、茴香、胡椒、花椒。结论:本实验建立的SYBR GREENⅠ染料实时PCR方法灵敏度高、重复性好,可应用于实际样品的检测。关键词：香辛料 3型哺乳动物正呼肠孤病毒SYBR Green I荧光定量PCR方法的建立及应用 2024年 SYBR Green I荧光定量PCR(q PCR)方法。将质粒标准品10倍倍比稀释后作为模板经该q PCR扩增,建立标准曲线,结果显示,质粒标准品在1.3×10^(8)拷贝/μL~1.3×10^(3)拷贝/μL与各自的Ct值均呈良好的线性关系,斜率为-3.1706,R^(2)为0.9999,熔解曲线为单峰。以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛肠道病毒(BEV)、水牛匈爱病毒(Buf Hu V)、牛冠状病毒(BCo V)、牛细小病毒(BPV)和MRV-3的基因组DNA/c DNA为模板,利用本研究建立的q PCR方法检测,评估该方法的特异性;将质粒标准品10倍倍比稀释至1.3×10^(2)拷贝/μL~1.3×10^(8)拷贝/μL后作为模板,分别利用本研究建立的q PCR和常规PCR检测,比较两种方法的检测结果,评估本研究建立q PCR方法的敏感性;以1.3×10^(3)拷贝/μL~1.3×10^(7)拷贝/μL 5个不同浓度的质粒标准品为模板,利用该方法分别进行批内和批间的重复性试验,评估该方法的重复性。结果显示,该方法只能检测出MRV-3,其他相关病原的检测结果均为阴性;该q PCR对质粒标准品的检测限为1.3×10^(3)拷贝/μL,比常规PCR敏感性高10 000倍;批内和批间重复性试验的变异系数均小于或等于1.0%,表明该q PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好。利用该方法检测220份牛粪便样品,结果显示MRV-3的检出率(3.64%,8/220)高于常规PCR的检出率(1.36%,3/220),两种检测方法的阳性符合率达100%,阴性符合率为97.75%,总符合率为97.78%。综上所述,本研究首次建立的检测MRV-3的SYBR Green关键词：荧光定量PCR 病毒检测
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