-
胡海燕
-
-
- 所属机构:山东大学
- 所在地区:山东省 济南市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
- 耿昭
- 作品数：40被引量：124H指数：7
- 供职机构：山东大学医学院
- 研究主题：双启动子 DNA疫苗 鸟氨酸脱羧酶 基因表达 钙调蛋白
- 刘贤锡
- 作品数：117被引量：247H指数：9
- 供职机构：山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所
- 研究主题：鸟氨酸脱羧酶 ODC 基因表达 腺病毒 反义
- 卢翌
- 作品数：19被引量：51H指数：4
- 供职机构：山东大学医学院
- 研究主题：双启动子 疫苗 乳头瘤病毒 鸟氨酸脱羧酶 基因表达
- 卞继峰
- 作品数：87被引量：236H指数：8
- 供职机构：山东大学医学院
- 研究主题：乳头瘤病毒 人乳头瘤病毒 乳头状瘤病毒 双启动子 DNA疫苗
- 张冰
- 作品数：142被引量：106H指数：6
- 供职机构：山东大学
- 研究主题：鸟氨酸脱羧酶 加载 试件 反义 腺病毒
- 肝内胆管癌hTR反义RNA及锤头状核酶基因真核表达载体的构建
- 2002年
- 用反转录PCR法 ,调取肝内胆管癌细胞内的端粒酶RNA(hTR)基因 ,并针对其序列设计反义RNA封闭基因及锤头状核酶切割基因序列 ,将其构建入真核表达载体pTriEx 4内。根据hTRcDNA序列设计引物 ,经RT PCR法从体外培养的肝内胆管癌细胞内调取hTR模板区基因 ,根据其测序结果 ,合成反义RNA基因及核酶基因 ,与经相应酶切的真核表达载体连接 ,酶切鉴定重组体的正确性。经RT PCR从细胞内调出 68bp序列 ,与hTRcDNA比较 ,与模板区域碱基序列一致 ,反义RNA与核酶基因重组子经酶切鉴定序列正确。肝内胆管癌细胞内端粒酶的活性明显增高 ,RT PCR法可调出其hTR基因有效片段 ;
- 靳斌姜希宏刘贤锡刘博刘师莲王伟胡海燕卢翌耿昭
- 关键词：真核表达载体真核表达反转录聚合酶链反应
- 弓形虫表面抗原P22、P30复合基因在原核细胞中表达的研究被引量：10
- 2002年
- 目的 :对含有P2 2、P30复合基因的重组菌进行IPTG诱导表达 ,进而检测复合基因的融合表达产物的免疫活性。方法 :用IPTG对工程菌进行诱导表达 ,表达产物行SDS PAGE蛋白凝胶电泳及Western Blot免疫印记检测。结果 :蛋白电泳结果显示 ,阳性重组菌比阴性菌在 6 6 .5KDa位置上明显多一条带 ,此条带可与P30抗体结合并使免疫印记显示阳性结果。结论 :含有P2 2、P30基因片段的质粒重组体经诱导表达出融合蛋白 ,其内的组分蛋白P30具有与其相应抗体结合的能力。
- 古钦民王伟卞继峰丛华胡海燕何深一李瑛
- 关键词：弓形虫基因P30基因P22
- ODC单抗的制备及其在大肠癌检测中的应用被引量：1
- 2005年
- 目的:制备鸟氨酸脱羧酶(ODC)单克隆抗体并观察其在大肠癌检测中的意义。方法:以人ODC重组蛋白免疫小鼠,用杂交瘤细胞技术制备单克隆杂交瘤细胞,以ELISA和Westernblot法验证阳性单克隆细胞所产生的免疫球蛋白。免疫组化检测大肠癌组织中ODC的表达水平。结果:筛选出稳定分泌抗ODC单抗的细胞株,ELISA检测证明其所分泌单抗属于IgG2a型。免疫组化检测大肠癌组织中ODC的表达显示该单抗检测效果较好,大肠癌组织中ODC的表达水平明显高于正常组织(P<0.05)。结论:成功地制备出ODC单克隆抗体,为进一步研究ODC基因表达与大肠癌的发病机理及其诊断的关系打下了良好基础。
- 胡海燕姜春英张岩耿昭卢翌王晓明张冰刘贤锡
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶结直肠肿瘤杂交瘤
- 鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对大肠癌细胞生长的抑制作用被引量：5
- 2007年
- 目的:研究鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)双反义腺病毒(Ad-ODC-AdoMetDCas)对大肠癌细胞生长的抑制作用,并初步探讨其参与细胞周期调节的分子机制。方法:将Ad-ODC-AdoMetDCas感染大肠癌细胞株HT-29,通过MTS法观察其对HT-29细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞周期的影响,采用Western blot检测Ad-ODC-AdoMetDCas对细胞中ODC、AdoMetDC及细胞周期调节蛋白(Cyclin D1 and CDK4)的表达的影响,利用RT-PCR检测Ad-ODC-AdoMetDCas对细胞周期蛋白Cyclin D1的mRNA水平的影响。结果:Ad-ODC-AdoMetDCas可抑制HT-29细胞中ODC和AdoMetDC蛋白的表达,并可明显抑制细胞的增殖,引起细胞周期Gl期阻滞,抑制G1期主要的细胞周期蛋白Cyclin D1的转录和翻译。结论:Ad-ODC-AdoMetDCas可有效下调ODC和AdoMetDC的表达,并通过抑制Cyclin D1的表达使其细胞周期停滞于G1期,从而抑制大肠癌细胞HT-29的增殖,为进一步研究大肠癌的基因治疗打下基础。
- 龚磊姜春英张冰胡海燕王伟刘贤锡
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶细胞周期蛋白D1结直肠肿瘤
- 人S-腺苷蛋氨酸脱羧酶α亚基的克隆、表达与纯化
- 2006年
- 目的:构建人S-腺苷蛋氨酸脱羧酶(SAMDC)的α亚基的原核表达载体,诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化表达的重组蛋白。方法:从大肠癌细胞中提取总RNA,RT-PCR方法扩增人SAMDCα亚基的cDNA片段801 bp,经TA克隆及亚克隆方法构建原核表达载体pTriEx-4-SAMDC-α。将重组表达质粒转化入E.coliJM109(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定表达蛋白,并通过6×His.Tag,利用亲和层析法纯化表达的融合蛋白。结果:酶切鉴定和DNA测序显示,人SAMDCα亚基的cDNA片段成功插入表达载体pTriEx-4且方向正确,SDS-PAGE电泳显示表达出32kD的外源蛋白。Western blot检测结果显示,表达出的蛋白为6×His.Tag的融合蛋白,且Ni-NTA亲和层析法纯化了该重组蛋白。结论:成功构建、表达且纯化了重组SAMDC-α亚基,为制备抗SAMDC抗体、研究SAMDC基因与结直肠肿瘤的关系提供了必要的工具。
- 龚磊刘贤锡张冰张岩胡海燕赵志艺
- 关键词：结直肠肿瘤原核表达
- 脑脊液寡克隆IgG区带检测方法研究被引量：2
- 2001年
- 刘师莲秦延江刘传华刘贤锡胡海燕祁维平王哓明于素贞
- 关键词：寡克隆区带电泳聚丙烯酰胺凝胶高压液相色谱法
- rAd-ODC/Ex3as对前列腺癌PC-3细胞抑制作用的研究
- 2004年
- 目的:探讨重组腺病毒rAd鄄ODC/Ex3as对前列腺癌细胞的体外抑制作用及对前列腺癌的作用机制。方法:利用报告基因GFP测定病毒感染效率,用WesternBlot检测rAd鄄ODC/Ex3as是否抑制鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因的表达,采用MTT法、Matrigeal侵袭实验观察rAd鄄ODC/Ex3as对前列腺癌细胞PC鄄3恶性表型的影响,并用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果:当MOI为50时,腺病毒感染PC鄄3细胞的效率约为70%,WesternBlot证实rAd鄄ODC/Ex3as可抑制ODC基因的表达。rAd鄄ODC/Ex3as以20MOI感染PC鄄3细胞可明显抑制其生长增殖和侵袭性穴P<0.01雪,流式细胞仪检测结果证实rAd鄄ODC/Ex3as可引起PC鄄3细胞G1期阻滞,但并未引起凋亡。结论:rAd鄄ODC/Ex3as在体外能有效地干扰ODC基因的表达,并可抑制前列腺癌细胞PC鄄3的生长与侵袭,诱导其发生G1期阻滞,有望成为治疗前列腺癌的基因药物。
- 张岩刘贤锡胡海燕王晓明张冰龚磊
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶PC-3细胞
- 含变形链球菌PAcA基因的真核表达质粒pcDNA3.1-PAcA的构建与鉴定被引量：2
- 2002年
- 目的 :构建含有免疫刺激序列、可防止变形链球菌在牙面粘附的DNA疫苗。方法 :利用PCR技术由质粒pPAcA CTA2 B扩增编码PAcA的DNA片段 ;通过T A克隆技术将目的DNA片段克隆于载体pMD1 8 T ,鉴定插入方向后 ,将目的DNA从载体上释放 ,再克隆于含有CpG免疫刺激序列的真核表达载体pcDNA3 .1 ,构建出用作防龋疫苗的真核表达质粒pcDNA3 .1 PAcA。结果 :通过对重组质粒pcDNA3 .1 PAcA进行酶切图谱和DNA序列测定分析 ,证明真核表达重组质粒pcDNA3 .1 PAcA构建成功、阅读框架正确。结论 :利用T A克隆等技术可成功将编码PAcA的DNA片段克隆到含有免疫刺激序列CpG的真核表达载体pcDNA3 .1 ,构建出真核表达重组质粒pcDNA3 .1 PAcA。
- 杨小青姜广水张兆莲王晶杨丕山刘贤锡卞继峰胡海燕耿昭卢翌
- 关键词：疫苗构建CPG基元变形链球菌
- 基于GIS的配电站实时数据的分析和动态画面的设计
- 该文分析了电力系统的自身特点,设计了一个配电站GIS实用系统.其中采用了GIS功能组件--TopMapActiceX,实现了在任何支持ocx格式的环境下,和其它系统的高效无缝集成.该文把地理信息系统技术应用于电力系统,可...
- 胡海燕
- 关键词：面向对象配电站监控软件
- 文献传递
- 鸟氨酸脱羧酶基因反义RNA对前列腺癌细胞生长的抑制作用被引量：8
- 2005年
- 为研究鸟氨酸脱羧酶 (ODC)基因反义RNA对前列腺癌细胞的生长抑制作用 ,将表达ODC第 3外显子反义RNA的重组腺病毒rAd ODC Ex3as分别感染前列腺癌细胞株PC 3和LNCap .通过MTT法观察其对前列腺癌细胞增殖的影响 ,并确定不同细胞合适的感染滴度 ,再采用Western印迹和流式细胞术检测rAd ODC Ex3as对细胞中ODC表达的抑制作用、对细胞周期和凋亡的影响以及与CDK抑制物p2 1的关系 .实验显示 ,rAd ODC Ex3as分别以 5 0MOI、2 5MOI感染PC 3和LNCap细胞可明显抑制其生长增殖 ,而不引起细胞毒性作用 ;其对两种细胞中ODC表达的抑制作用分别为4 5 %和 5 9% .流式细胞DNA含量分析证实 ,rAd ODC Ex3as可引起PC 3和LNCap细胞周期G1期阻滞 ,但并未引起凋亡 .通过Western印迹发现 ,细胞中ODC表达的降低可诱导p2 1蛋白的过表达 .结果表明 ,rAd ODC Ex3as在体外能有效地干扰ODC基因的表达 ,并通过诱导p2 1的过表达使其细胞周期停于G1期 ,从而抑制前列腺癌细胞PC 3和LNCap的增殖 ,为其进一步基因治疗的研究打下基础 .
- 张岩刘贤锡张冰胡海燕龚磊
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶腺病毒基因治疗反义RNA前列腺癌细胞
