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柳满然
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- 所属机构:重庆医科大学
- 所在地区:重庆市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
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- 本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种乳腺癌标志物及其应用。乳腺癌标志物circSTT3A，其包括如SEQ ID NO.1所示序列。本发明中可以通过敲除HIF1α基因从而抑制circSTT3A，可以有效抑制乳腺癌肿瘤干...
- 柳满然徐铭侯懿烜孙艳
- Hedgehog信号通路调控Twist高表达乳腺肿瘤干细胞样细胞的富集及迁移被引量：7
- 2017年
- 目的 :探讨阻断Hedgehog信号通路对Twist高表达乳腺癌干细胞样细胞微球体富集及其迁移的影响。方法:分别采用蛋白质印迹法和微球体细胞形成实验检测正常乳腺上皮MCF-10A细胞、乳腺癌MCF-7和HS578T细胞中Twist蛋白的表达水平及微球体细胞形成能力。蛋白质印迹法检测MCF-10A、MCF-7和HS578T微球体细胞中Twist、GLI1家族锌指蛋白(GLI family zincnger1,GLI1)和音猬因子(Sonic Hedgehog,SHh)蛋白的表达情况。采用不同浓度的Hedgehog信号通路特异性抑制剂GDC-0449(10、20和30μmol/L)处理Twist蛋白表达水平最高的乳腺癌HS578T微球体细胞96 h,分别采用微球体细胞形成实验和Transwell小室法检测GDC-0449对HS578T微球体细胞再成球能力和迁移能力的影响,并进一步采用蛋白质印迹法检测HS578T微球体细胞中GLI1、性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2)和八聚体绑定转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)蛋白的表达情况。结果:乳腺癌HS578T细胞中Twist蛋白的表达水平明显高于MCF-10A和MCF-7细胞(P值均<0.05),且具有最强的微球体形成能力(P值均<0.05)。HS578T微球体细胞中Twist、GLI1和SHh蛋白水平均明显高于MCF-10A和MCF-7微球体细胞(P值均<0.05);经抑制剂GDC-0449处理后,乳腺癌HS578T微球体细胞的成球能力及迁移能力均明显降低(P值均<0.05),GLI1、SOX2和OCT4蛋白的表达水平明显下调(P值均<0.05)。结论:阻断Hedgehog信号通路的活化可抑制Twist高表达乳腺癌细胞微球体的形成及迁移能力。
- 周明莉唐石伏张海龙柳满然
- 关键词：乳腺肿瘤TWIST转录因子
- 癌相关成纤维细胞miR-200c对乳腺癌细胞侵袭的影响被引量：3
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- 探讨miR-200c在癌相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts,CAF）活化中的作用,研究其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭能力的影响。通过质粒构建的方法分别获得miR-200c稳定干扰的NF（normal fibroblast）及其对照细胞株、miR-200c稳定过表达的CAF及其对照细胞株;采用Western blotting法检测miR-200c对CAF活化标志物α-SMA和FAP表达的影响;采用细胞划痕愈合实验检测miR-200c对CAF迁移能力的影响;采用胶收缩实验和侵袭实验分别检测miR-200c对CAF细胞外基质和对癌细胞侵袭能力的影响。成功构建了miR-200c稳定干扰的NF及其对照细胞株、miR-200c稳定过表达的CAF及其对照细胞株;与低表达miR-200c的细胞株相比,高表达miR-200c细胞株的α-SMA和FAP表达水平及迁移能力明显降低,其胶收缩能力和癌细胞的侵袭能力也明显减弱。miR-200c能够明显抑制CAF细胞的活化并通过细胞外基质重塑（extracellular matrix remodeling,ECM）的方式抑制癌细胞的侵袭。
- 席磊付立新唐曦杜艳娥杨丹陈燕林柳满然侯懿烜
- 关键词：乳腺肿瘤癌相关成纤维细胞细胞外基质重塑肿瘤侵袭
- Hedgehog信号通路调控Twist高表达乳腺肿瘤干细胞样细胞的富集及迁移
- 目的：探讨Hedgehog信号通路对Twist高表达乳腺癌干细胞样细胞微球体富集及其迁移的影响。方法蛋白印迹法和乳腺微球体细胞形成实验分别检测正常乳腺上皮MCF10A细胞、乳腺癌MCF7和Hs578T细胞中Twist的表...
- 周明莉柳满然
- 关键词：TWISTHEDGEHOG信号通路
- c-ski基因重组腺病毒质粒的构建及其对肿瘤相关成纤维细胞增殖的影响
- 2013年
- 目的构建携带c-ski基因的重组腺病毒质粒,并检测其对肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)增殖活力的影响。方法以pcDNA3-c-ski质粒为模板,PCR扩增c-ski基因,与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,构建重组穿梭质粒pAdTrack-c-ski,经PmeⅠ线性化后,转化感受态大肠埃希菌BJ5183,获得重组腺病毒质粒,经PacⅠ线性化后,转染HEK-293细胞,获得重组腺病毒,经扩增及纯化后测定病毒滴度。将纯化的重组腺病毒感染乳腺癌CAFs,采用Western blot法检测感染细胞中c-Ski蛋白的表达水平;MTT法和细胞计数法检测重组腺病毒对CAFs细胞增殖活力的影响。结果重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切鉴定证明构建正确;转染HEK-293细胞48 h后可见大量绿色荧光蛋白的表达,纯化的重组腺病毒的滴度为3.11×1010IFU/ml;感染重组腺病毒的乳腺癌CAFs中c-Ski蛋白的表达水平明显高于空病毒组和空白对照组(P<0.001),且增殖活力明显高于空白对照组(P<0.05)。结论成功构建了表达c-ski基因的重组腺病毒质粒,其可明显促进CAFs的增殖,为进一步研究c-Ski对CAFs增殖分化等生物学功能的影响及作用机制提供了实验依据。
- 王黎阳赵浏阳彭琼乐孙艳柳满然
- 关键词：腺病毒成纤维细胞细胞增殖
- 按摩促进兔股四头肌损伤修复的体内研究被引量：20
- 2012年
- 目的研究按摩对兔股四头肌损伤的肌组织病理修复、细胞骨架蛋白结蛋白(Desmin)和α-肌动蛋白(α-Actin)表达的效应差异,探讨按摩促进肌肉损伤修复的作用机制。方法健康成年雄性新西兰大白兔27只,体重(2.0±0.5)kg,随机分为3组,正常对照组(A组,n=3)、自然恢复组(B组,n=12)和按摩组(C组,n=12)。A组实验动物不作任何处理,B、C组实验动物用自制打击器制备兔右后肢股四头肌损伤模型。C组于造模后第8天开始按摩,按摩转速3 000～3 100 r/min,按摩时间15 min,每天1次至处死取材为止;B组不予按摩。B、C组于伤后14 d及21 d各取6只实验动物股四头肌样本,HE染色观察组织病理变化,免疫组织化学染色及Western blot检测Desmin、α-Actin表达,并与A组正常股四头肌标本进行比较。结果 B、C组实验动物均存活至实验完成。A组肌纤维形态规整,排列整齐,无结缔样组织;B组股四头肌标本见明显组织坏死,多数肌纤维断裂、萎缩、排列紊乱;C组骨骼肌组织形态、肌萎缩较B组改善,受损部位可见新生肌纤维。免疫组织化学染色显示各时间点B、C组Desmin、α-Actin表达均低于A组(P<0.05);但C组Desmin、α-Actin表达均较B组增强(P<0.05),且21 d时明显高于14 d(P<0.05)。Western blot检测示A组Desmin、α-Actin高于B、C组(P<0.05),B组两种蛋白表达最低。结论按摩可促进兔损伤股四头肌的组织形态及细胞骨架恢复,可能通过上调Desmin、α-Actin表达促进骨骼肌组织损伤修复。
- 侯懿烜柳满然余敏张萍刘祖丽唐成林
- 关键词：按摩细胞骨架蛋白
- 用于诊断乳腺癌的标记物及其应用
- 本发明属于生物医药技术领域，具体为用于诊断乳腺癌的标记物及其应用。LncRNA030在乳腺癌干细胞中高表达，与乳腺癌病人的不良预后相关；LncRNA030位于人类第8号染色体，和其邻近基因SQLE都主要定位于细胞质；Ln...
- 柳满然秦旖璐侯懿烜
- 文献传递
- Twist基因逆转录病毒载体的构建及其诱导正常乳腺上皮细胞发生上皮间质转化被引量：3
- 2013年
- 目的构建Twist基因逆转录病毒载体,研究其对人正常乳腺上皮细胞MCF10A的影响。方法酶切pcDNA3/mycTwist获得myc-Twist,克隆到逆转录病毒载体pBABE-puro中,构建重组质粒pBABE-myc-Twist。通过酶切、测序鉴定Twist基因正确后,在体外将质粒pBABE-myc-Twist和其对照分别与包装质粒pAmpho共同转染人胚肾上皮细胞系293T细胞,进行逆转录病毒的包装,并感染人正常乳腺MCF10A上皮细胞,用嘌呤霉素(puromycin)筛选,获得成功转入Twist的MCF10A-Twist细胞和MCF10A-Vector对照细胞。通过RT-PCR和Western blot法验证Twist细胞在MCF10A-Twist和MCF10A-Vector细胞内的表达。免疫荧光技术和Western blot法检测细胞内上皮间质转化(EMT)标志蛋白的表达。Transwell^(?)法检测细胞的迁移和侵袭能力。结果重组逆转录病毒载体质粒pBABE-myc-Twist经酶切和测序鉴定构建正确;Twist基因被逆转录病毒成功导入MCF10A细胞,并在靶细胞内稳定表达,RT-PCR检测到Twist mRNA在MCF10A-Twist细胞中表达,Western blot法检测发现myc-Twist蛋白在MCF10A-Twist细胞中表达;免疫荧光和Western blot法检测显示在MCF10A-Twist细胞中E-cadherin表达显著下调、vimentin表达明显上调;与MCF10A-Vector细胞相比,Transwell^(?)法检测发现MCF10A-Twist细胞迁移和侵袭能力明显增加(P<0.01)。结论 Twist诱导MCF10A细胞发生EMT转化,并促进其迁移和侵袭。
- 杨佳佳胡萍周明莉黄杰涛柳满然
- 关键词：TWIST逆转录病毒
- 胃癌中线粒体DNA突变频率和突变类型及分布
- 胃癌发生发展是一个多因素、多阶段和多基因变异的复杂演变过程.以往的研究已确定胃癌中ras、erbB2等癌基因和p53、APC等抑癌基因突变或表达异常.近几年来的研究发现胃癌线粒体DNA（mitochondrialDNA，...
- 柳满然
- 关键词：MTDNA胃癌DHPLC基因突变
- 他莫昔芬通过GPR30介导CAF外分泌CXCL16促进乳腺癌MCF-7细胞迁移及侵袭被引量：5
- 2016年
- 目的 :探讨他莫昔芬(tamoxifen,TAM)通过雌激素G蛋白偶联受体30(estrogen G-protein-coupled receptor 30,GPR30)介导肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated i broblast,CAF)外分泌CXC型趋化因子配体16(CXCchemokine ligand 16,CXCL16)对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的影响。方法 :TAM和TAM联合GPR30特异性抑制剂G15分别处理CAF后,通过基因芯片检测2组细胞差异表达的基因,并从中挑选出CXCL16,应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法进行验证,应用ELISA法检测细胞上清液中CXCL16的浓度。用TAM和TAM联合G15处理后的CAF上清液、不做任何处理的CAF上清液、添加CXCL16或CXCL16中和抗体的培养液分别培养MCF-7细胞,采用MTT法、划痕愈合实验和Transwell小室法检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果 :与TAM联合G15处理组相比,TAM处理组CAF中2 358个基因表达上调,2 178个基因表达下调;TAM处理组CAF中CXCL16 m RNA和蛋白的表达水平及上清液中CXCL16的浓度均显著上调(P值均<0.01),且该效应可被G15阻断(P值均<0.01)。TAM处理组CAF上清液和添加CXCL16培养液培养的MCF-7细胞,其迁移和侵袭能力均增强(P值均<0.05),而增殖能力则无显著变化(P值均>0.05)。结论 :CAF经TAM处理后CXCL16分泌增多,该效应由GPR30介导,而外分泌的CXCL16可促进乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭能力。
- 吴晓安郭林英杜燕娥柳满然涂刚
- 关键词：他莫昔芬肿瘤相关成纤维细胞
