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于翠娟
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- 所属机构:第四军医大学
- 所在地区:陕西省 西安市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家杰出青年科学基金
相关作者
- 杨安钢
- 作品数：349被引量：1,000H指数：13
- 供职机构：第四军医大学
- 研究主题：细胞凋亡 HELA细胞 基因表达 促凋亡作用 RNA干涉
- 王成济
- 作品数：181被引量：638H指数：11
- 供职机构：第四军医大学
- 研究主题：细胞凋亡 基因治疗 基因表达 HELA细胞 RNA干涉
- 许彦鸣
- 作品数：75被引量：188H指数：7
- 供职机构：汕头大学医学院
- 研究主题：基因表达 促凋亡作用 HELA细胞 细胞凋亡 CASPASE-6
- 赵晶
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- 供职机构：第四军医大学
- 研究主题：HELA细胞 基因表达 细胞凋亡 构型 促凋亡作用
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- 研究主题：RNA干涉 构型 SIRNA CASPASE-3 肿瘤
- 重组tBid融合蛋白基因的构建及其在HeLa细胞中的分泌表达
- 2006年
- 目的:构建重组的Immuno-tBid基因,并检测其在HeLa细胞中的分泌表达。方法:将肿瘤表面抗原HER2的单链抗体基因与绿脓杆菌外毒素PE的转膜结构域基因(PE253-364aa)和tBid基因连接,并在5'端连接前导肽基因,构建成Immuno-tBid(e23sFv-PEII-tBid61/tBid76)基因。将其克隆到pCMV载体并转染HeLa细胞,G418筛选获得阳性克隆,Genomic-PCR和RT-PCR分别扩增相应的重组基因片段。建株的HeLa细胞培养上清进行蛋白G琼脂糖凝胶免疫沉淀,Western Blot检测。并通过间接免疫荧光染色和细胞计数观察建株的HeLa细胞生长和形态变化。结果:成功构建了重组的Immuno-tBid基因的真核表达载体(pCMV-e23sFv-PEII(253-364)-tBid61/tBid76)。稳定转染HeLa细胞,获得G418抗性的阳性HeLa细胞克隆,Genomic-PCR检测证实目的基因已整合到细胞基因组中。RT-PCR检测表明目的基因在RNA水平上的表达。细胞培养上清进行蛋白G琼脂糖凝胶免疫沉淀,Western Blot检测,证实建株的HeLa细胞可以通过分泌途径产生Immuno-tBid蛋白。间接免疫荧光染色和核染色结果显示,分泌Immuno-tBid蛋白的HeLa细胞呈标准的S型曲线生长,形态正常。结论:成功构建了重组的Immuno-tBid基因,建株的HeLa细胞可以通过分泌途径产生Immuno-tBid蛋白。
- 裘秀春许彦鸣于翠娟赵晶孟艳玲杨彤涛龙华马保安周勇王成济杨安钢范清宇
- 关键词：TBID抗原分泌表达
- 前列腺特异性抗原启动子调控促凋亡基因caspase-7载体的构建及其对前列腺癌细胞的特异性杀伤作用被引量：1
- 2003年
- 目的 :构建前列腺特异性抗原启动子 (PSAP)调控的促凋亡基因caspase 7表达载体并观察其对前列腺癌细胞的促凋亡作用 .方法 :提取基因组DNA ,通过PCR法获得前列腺特异性抗原启动子 (PSAP)基因 ,利用基因重组方法以PSAP替换掉 pCDNA3真核表达载体中的 pCMV启动子 ,构建PSAP pCDNA3载体 .测序正确后 ,将PSAP分别替换绿色荧光蛋白载体pIRES2 EGFP和克隆入带有效应型caspase 7基因的绿色荧光蛋白载体 pIRES2 EGFP Csp7中的pCMV启动子片段 ,分别获得由PSAP启动子调控的绿色荧光蛋白载体和带有效应型Caspase 7基因的真核表达载体PSAP pIRES2 EGFP Csp7.利用脂质体转染法将该载体分别转染至PC 3m(前列腺癌 )、Hep2 (喉癌 )及MC3T3 (正常成纤维 )细胞中 ,通过荧光显微镜观察转染细胞绿色荧光蛋白表达及细胞形态变化 ,免疫组化检测细胞中效应型caspase 7蛋白的表达状况 ,细胞计数观察转染不同表达载体后各类细胞生长变化 .结果 :经酶切鉴定及测序结果证实所构建载体正确 .转染PSAP pIRES2 EGFP Csp7载体后 ,①在PC 3m细胞中可观察到绿色荧光蛋白的表达 ,并可检测到效应型Caspase 7蛋白表达 ,而在Hep2及MC3T3细胞中未观测到绿色荧光 ,②荧光显微镜下可见前列腺癌PC 3m细胞生长受到抑制并出现凋亡细胞形态 。
- 张更王禾张波于翠娟武国军秦卫军孟艳玲王成济杨安钢
- 关键词：脱噬作用
- 重组人肿瘤坏死因子-α诱导黏液表皮样癌细胞凋亡被引量：5
- 2004年
- 目的 :探讨重组人肿瘤坏死因子 α(rhTNF α)作用于人黏液表皮样癌细胞 (MEC 1 )的效应与机制 .方法 :应用细胞记数、DNA降解片段琼脂糖凝胶电泳观察、电镜观察和细胞周期测定rhTNF α作用后MEC 1细胞的凋亡状况 .结果 :rhTNF α作用于MEC 1细胞后 ,导致细胞存活数目减少 ,大量细胞发生凋亡 ;基因组DNA分解成寡聚核苷酸片段 ,DNA琼脂糖凝胶电泳有梯形条带 ;细胞周期发生改变 ,形态学观察细胞核皱缩 ,染色质边集 .结论 :rhTNF α是通过MEC
- 刘大庆司徒镇强周树夏曹云新许彦鸣于翠娟王成济杨安钢
- 关键词：重组人肿瘤坏死因子-Α凋亡
- AIF及AIF依赖的细胞凋亡被引量：17
- 2003年
- AIF是一种线粒体蛋白 ,具有氧化还原酶和诱导细胞凋亡两种活性。AIF从线粒体到细胞核的转位足以介导体外细胞凋亡的发生 ,而且是以非caspases依赖的方式进行的。AIF的诱导凋亡活性是小鼠胚胎形态发生过程中类胚体成腔所必需的 ,也参与了神经细胞的细胞凋亡。真菌、线虫等的细胞凋亡也有AIF同源分子的参与。因此 ,AIF介导的细胞凋亡代表了独立于caspase信号通路之外的另一条更原始、更保守。
- 于翠娟王成济杨安钢
- 关键词：AIF细胞凋亡线粒体凋亡诱导因子
- 截短型人bid基因的克隆、表达和促凋亡作用的研究被引量：8
- 2004年
- 目的 :探讨截短型bid(truncatedbid ,tbid)基因的表达对Hela细胞的促进凋亡活性。方法 :用RT PCR法克隆人全长bid基因 ,测序正确后 ,通过PCR截去编码N末端 6 0个氨基酸残基的基因 ,而获得tbid基因。将其克隆入含绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pIRES2 EGFP中 ,用脂质体法转染Hela细胞。通过荧光显微镜、电子显微镜观察和TUNEL检测法 ,检测目的基因的表达对转染细胞的形态及生长状况的影响。结果 :成功地构建了tbid基因的真核表达载体。以其转染Hela细胞后 ,tbid基因在细胞中得到表达 ,随后引起细胞荧光强度下降 ,生长状况不良甚至死亡。电镜观察及TUNEL检测的结果显示 ,许多细胞呈典型的凋亡特征。结论
- 裘秀春于翠娟孟艳玲许彦鸣赵晶金明王成济范清宇杨安钢
- 关键词：细胞凋亡绿色荧光蛋白HELA细胞
- 嵌合重组caspase-3诱导表达促进肿瘤细胞凋亡被引量：4
- 2003年
- 通过稳定转染人宫颈癌HeLa细胞 ,建立了野生型caspase 3(wt casp3) ,大小亚基序列颠倒的重组caspase 3(r casp3) ,和N端融合绿脓杆菌外毒素 (PE)转膜肽段的嵌合重组caspase 3(cr casp3)的诱导表达细胞系 .蜕皮素诱导后细胞中检测到目的基因的表达 ,MTT检测和细胞计数结果表明 ,r casp3和cr casp3诱导表达后有效地导致HeLa细胞死亡 ,通过测定细胞中caspase 3活性 ,以及细胞周期检测、DNA梯状电泳条带检测(DNAladder)、电镜观察等证实r casp3和cr casp3诱导表达后细胞发生了凋亡 ,且二者的促凋亡活性相当 ,而wt casp3诱导表达细胞并未出现上述效应 .结果表明 ,与野生型caspase 3活化需要上游分子的切割不同 ,重组caspase 3具有自发的促凋亡活性 ,而N端PE肽段的融合不影响这种活性 ,因此PE转膜结构域和重组caspase 3有望参与构建能转膜进入细胞内部 。
- 贾林涛张立红于翠娟纪宗玲曹云新王成济杨安钢
- 关键词：CASPASE-3肿瘤细胞凋亡绿脓杆菌外毒素
- 重构型人caspase-7基因对肿瘤细胞的促凋亡作用
- 2004年
- 目的观察重构型caspase-7的表达对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。方法用反转录PCR方法获取野生型人caspase-7基因,用重组PCR构建了两种重构型caspase-7基因,即大、小亚基序列次序颠倒的rev-ca2spase-7以及N-端带有绿脓杆菌外毒素转膜结构域部分肽段的融合蛋白(PEⅡ=rev-caspase-7)的基因。将两种重构型caspase-7基因克隆入表达载体pIRES2-EGFP,脂质体法转染肿瘤细胞,通过荧光显微镜观察、电镜观察、MTT检测等方法检测重组基因的表达及其对肿瘤细胞的促凋亡活性。结果 成功获得了caspase-7基因,构建了rev-caspase-7基因和rev-caspase-7与绿脓杆菌外毒素(PE)转膜肽段的融合蛋白(PEⅡ-rev-caspase-7)基因及其表达载体。将两种重构型caspase-7转染肿瘤细胞后,证实细胞发生凋亡。结论两种重构型caspase-7均可以有效地诱导肿瘤细胞发生凋亡。
- 于翠娟孟艳玲贾林涛裘秀春王智刘湘丽王成济苏成芝杨安钢
- 关键词：肿瘤细胞促凋亡作用细胞凋亡天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶
- 重组人肿瘤坏死因子-α联合肿瘤坏死因子受体1基因转染杀伤舌癌细胞的实验研究被引量：4
- 2004年
- 目的 :观察重组人肿瘤坏死因子 α(rhTNF α)对建系细胞 (T T)作用效应与机制。方法 :反转录PCR方法克隆人TNFR1基因 ,并将其稳定转染入舌癌细胞中 ,建系并鉴定 ;通过MTT法检测、DNA降解片段琼脂糖凝胶电泳及电镜观察检测rhTNF α对T T细胞的作用效果与机制。结果 :成功构建含TNFR1基因的真核表达质粒 pcDNA3 TNFR1,并建立表达TNFR1蛋白活性的舌癌细胞系T T ;较之亲本Tca 8113细胞及转染空载体的T pc细胞 ,rhTNF α对T T细胞具有更强的细胞毒作用 ,且通过介导细胞凋亡的方式发挥其作用。结论 :重组人肿瘤坏死因子 α联合肿瘤坏死因子受体 1基因转染可有效地杀伤舌癌细胞 ,为舌癌基因治疗提供理论依据。
- 刘大庆司徒镇强曹云新许彦鸣于翠娟王成济杨安钢
- 关键词：肿瘤坏死因子受体肿瘤坏死因子舌癌细胞
- 人截短型凋亡诱导因子的表达对HeLa细胞的促凋亡作用被引量：5
- 2003年
- 目的:观察人截短型AIF基因的表达对HeLa细胞的促凋亡作用。方法:用RT-PCR法分段克隆全长人AIF基因。经改造截去其N-端线粒体定位信号及部分Spacer区域(1～120位氨基酸)的编码序列,从而获得人截短型AIF(AIF△1-120)基因。将其克隆入pIRES2-EGFP绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察、 免疫组织化学检测、间接免疫荧光检测、电镜观察等方法,检测目的基因在转染细胞中的表达,以及对转染细胞的形态及生长状况的影响。结果:成功地构建了人截短型AIF(AIF△1-120)基因的真核表达载体。转染HeLa细胞后,可检测到人截短型AIF分子的表达。随着转染后时间的延长,可观察到表达人截短型AIF分子的HeLa细胞呈现典型的凋亡特征。结论:人截短型AIF基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡。
- 于翠娟孟艳玲赵晶王智王成济杨安钢
- 关键词：凋亡诱导因子HELA细胞基因表达细胞凋亡
- 重组人凋亡诱导因子基因的构建、表达及其对HeLa细胞的促凋亡作用被引量：13
- 2002年
- 凋亡诱导因子 (apoptosis inducingfactor ,AIF)定位于细胞的线粒体膜间隙 .当凋亡信号刺激时 ,AIF分子从线粒体释放到胞浆 ,然后转位到细胞核内 ,引起染色体核周边凝集和DNA呈大片段断裂 (～ 5 0kb) .用RT PCR法分段克隆得到人全长AIF基因 ,经改造截去其N端线粒体定位信号编码序列 ,代之以不同长度的绿脓杆菌外毒素 (PE)转膜结构域序列 .把这些重组基因克隆入 pIRES2 EGFP真核表达载体 ,脂质体法转染HeLa细胞 ,通过荧光显微镜观察、共聚焦显微镜观察、电镜观察等方法检测了多种重组人AIF基因的表达及其对细胞生长的影响 .证明了重组人AIF基因的表达可引起HeLa细胞死亡 。
- 于翠娟孟艳玲桂俊豪赵晶金明王智王成济杨安钢
- 关键词：HELA细胞促凋亡作用融合蛋白
