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陈观今
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- 所属机构:海南医学院
- 所在地区:海南省 海口市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
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- 郭虹陈观今郑焕钦周永安
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- 1999年
- 目的 构建ＩＦＮ－γ基因真核表达重组质粒作为基因佐剂，观察其与ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１（ｐｃ－ＲＯＰ１） ＤＮＡ共同免疫小鼠所诱导的免疫应答。方法 将ＩＦＮ－γ基因片段定向插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３，双酶切鉴定，获得ｐｃＩＦＮ 重组子；碱裂解法大量制备，经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，每只鼠注射ｐｃＩＦＮ、ｐｃ－ＲＯＰ１ 各１００μｇ，两周后同量加强免疫一次，以ｐｃＤＮＡ３空质粒及生理盐水组为对照。分别于免疫后第３０ 天、５０ 天、７０天共三次用ＭＴＴ法测定小鼠脾脏Ｔ淋巴细胞增殖活性及ＮＫ细胞活性；双夹心ＥＬＩＳＡ 测定血清细胞因子ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２及酶法测定ＮＯ含量；ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ抗体滴度。结果 构建成功的作用下，该两项指标均明显提高，且ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２ 及ＮＯ水平均较不加佐剂组显著提高（Ｐ＜ ０．０１）；而对ＩｇＧ抗体滴度无显著影响（Ｐ＞ ０．０５。结论 ＩＦＮ－γ基因佐剂具有协同ｐｃ－ＲＯＰ１ＤＮＡ免疫的作用，可增强免疫鼠细胞免疫应答，ＩＦＮ－γ。
- 郭虹陈观今郑焕钦
- 关键词：弓形虫DNA免疫
- 含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究 IV.免疫鼠血清细胞因子IFN-γ、IL-2及NO的测定被引量：15
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- 郭虹陈观今郑焕钦
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- 1999年
- 通过体外扩增弓形虫ＲＨ、ＺＳ１、ＺＳ２、ＧＴ１４个分离株的编码棒状体蛋白（ＲＯＰ１）和主要表膜蛋白（Ｐ３０）抗原的基因片段，比较虫株间差异，为克隆及其ＤＮＡ免疫的研究做准备。特定引物的设计；弓形虫虫株的复苏、接种、收集、纯化；提取弓形虫ＲＨ、ＺＳ１、ＺＳ２及ＧＴ１分离株的基因组ＤＮＡ，并以此为模板进行ＰＣＲ扩增，扩增产物经１％琼脂糖凝胶电泳分析。结果从４个分离株基因组ＤＮＡ中均扩增出编码ＲＯＰ１、Ｐ３０抗原的基因片段，其大小ＲＯＰ１约７５６ｂｐ，Ｐ３０约１０２５ｂｐ，电泳条带未见虫株间的明显差别。研究表明，所扩增４个弓形虫分离株的ＲＯＰ１和Ｐ３０基因片段均与理论预测值相符，并具有高度保守性。
- 郭虹陈观今郑焕钦周永安
- 关键词：弓形虫分离株表膜抗原扩增
- 弓形虫ROP1基因的体外扩增及克隆
- 1997年
- 弓形虫棒状体蛋白（ROP1）存在于速殖子棒状体内。根其已知基因序列设计合成一对引物，用PCR技术从弓形虫RH及ZS2株的基因组DNA中扩增出编码ROP1的基因片段，将扩增产物与pBV220原核高效表达质粒重组，构建成功pBV200-RCP1重组子，转化大肠杆菌TG1，DHSα，以进一步诱导表达RCP1非融合蛋白，用于对弓形虫侵入机制及免疫特性的研究。
- 郭虹陈观今刘彦文郑焕钦
- 关键词：弓形虫克隆寄生虫
- 全文增补中
- 弓形虫ZS1株抗原基因的扩增及克隆被引量：1
- 1997年
- 本文采用PCR技术，自行设计一对寡核酸引物(P1，P2)，从弓形虫ZS2基因组DNA中特异扩增出编码P30抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用FxcoRⅠ和HindⅢ双酶切后,克隆到真核表达质粒pcDNA3中，转化人大肠杆菌TG1，用氨苄青霉素和PCR初筛，将PCR扩增阳性的重组子用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定。结果成功地构成建真棱型表达质粒pcDNA-P30，从而为进一步进行重组P30抗原的体外表达创造有利条件。
- 周永安陈观今刘彦文罗树红郑焕钦
- 关键词：弓形虫抗原基因克隆聚合酶链反应
- 全文增补中
- 昆明市妊娠妇女弓形虫感染的调查分析被引量：6
- 2003年
- 贾雪梅李飞陈观今
- 关键词：妊娠妇女弓形虫感染血清
- 编码弓形虫ROP1蛋白基因的体外扩增、克隆及在E.coli中的表达被引量：10
- 1999年
- 目的构建弓形虫棒状体蛋白（ＲＯＰ１）基因重组质粒并在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达。方法用ＲＨ株接种小鼠，收集腹水，纯化速殖子，抽提基因组ＤＮＡ；据ＲＯＰ１基因序列设计合成一对引物，将上、下游引物分别引入ＥｃｏＲＩ，ＢａｍＨＩ酶切位点，用ＰＣＲ技术从ＲＨ株基因组ＤＮＡ中扩增编码ＲＯＰ１的基因片段，插入ｐＢＶ２２０质粒，转化大肠杆菌ＤＨ５α感受态细胞，于氨苄阳性ＬＢ培养平板上筛选阳性克隆，酶切鉴定；经温度诱导在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫印迹分析。结果ＲＯＰ１基因体外扩增产物大小与预期值相符，约７５６ｂｐ；构建成功ｐＢＶ２２０－ＲＯＰ１重组质粒；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹显示特异蛋白条带的分子量约４３ｋＤ，表达产量约占菌体蛋白１３．２３％。结论从弓形虫基因组ＤＮＡ中获取ＲＯＰ１基因，并成功构建ｐＢＶ２２０－ＲＯＰ１重组质粒，诱导表达ＲＯＰ１非融合蛋白，为进一步分离纯化、用于对弓形虫侵入机制及免疫特性的研究做好准备。
- 郭虹陈观今刘彦文郑焕钦罗树红
- 关键词：弓形体基因克隆基因重组
