邹修平
所属机构: 西南大学 所在地区: 重庆市 研究方向: 农业科学 发文基金: 国家现代农业产业技术体系建设项目
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陈善春 作品数:185 被引量:698 H指数:13 供职机构:西南大学 研究主题:柑橘 柑桔 柑橘溃疡病 抗性 溃疡病 何永睿 作品数:151 被引量:493 H指数:11 供职机构:西南大学 研究主题:柑橘 柑橘溃疡病 抗性 溃疡病 柑桔 彭爱红 作品数:85 被引量:387 H指数:11 供职机构:西南大学柑桔研究所 研究主题:柑橘 柑橘溃疡病 柑桔 溃疡病 抗性 许兰珍 作品数:72 被引量:333 H指数:10 供职机构:西南大学 研究主题:柑橘 柑桔 柑橘溃疡病 溃疡病 转基因 雷天刚 作品数:71 被引量:296 H指数:9 供职机构:西南大学 研究主题:柑橘 柑桔 柑橘溃疡病 溃疡病 柑橘黄龙病
检测柑橘铁螯合还原酶家族基因的方法 本发明公开了一种检测柑橘铁螯合还原酶家族基因的方法,包括步骤:1)选取1年生的资阳香橙、卡里佐枳橙和枳的实生苗用作组织表达分析的材料;2)提取各实生苗根、茎、叶组织的RNA;3)以步骤2)提取的RNA为模板,反转录合成c... 姚利晓 陈善春 何永睿 许兰珍 雷天刚 邹修平 彭爱红柑橘溃疡病抗性相关转录因子CitMYB20的功能 被引量:3 2020年 [目的]了解柑橘不同品种CitMYB20对柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)和外源植物激素的应答情况,评价转基因植株对柑橘溃疡病的抗性,验证CitMYB20的生物学功能.[方法]根据柑橘基因组序列设计引物,PCR法同源克隆柑橘溃疡病抗性品种金弹金柑(Fortunella japonica)和敏感品种枣阳小叶枳(Poncirus trifoliata)的CitMYB20基因序列和启动子序列,利用在线软件PlantCARE对启动子序列进行顺式作用元件预测.以针刺法对金弹金柑和枣阳小叶枳离体叶片接种柑橘溃疡病菌,用外源激素水杨酸、茉莉酸甲酯和乙烯利处理金弹金柑和枣阳小叶枳的叶片,在处理的不同时期收集材料,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CitMYB20的表达水平.分别构建CitMYB20的过表达载体和抑制表达载体,根癌农杆菌法转化枳上胚轴,随机摘取转基因株系成熟叶片进行柑橘溃疡病离体抗性评价.[结果]金弹金柑和枣阳小叶枳中CitMYB20(GenBank登录号分别为MN689609和MN689608)序列高度保守,相似度达到99%;两者的启动子序列(GenBank登录号分别为MN689611和MN689610)虽然都具有脱落酸和茉莉酸甲酯的响应元件,但金弹金柑中还具有水杨酸响应的顺式作用元件,而枣阳小叶枳中缺少该元件.在体外接种柑橘溃疡病菌5 d时,金弹金柑成熟叶片中CitMYB20表达量显著上升,达到对照的2.5倍;而枣阳小叶枳叶片CitMYB20在整个接菌周期内表达量未发生显著变化.外源激素处理时,CitMYB20对水杨酸和茉莉酸甲酯的响应相似,即在金弹金柑中呈现出先升高后降低的趋势,而在枣阳小叶枳中表达量降低,随后又恢复正常.乙烯利处理时,CitMYB20在金弹金柑中表达量略有下降,在枣阳小叶枳中表达量先升后降.遗传转化共获得7株过表达植株和5株抑制表达植株,转基因植株与对照植株相比在形态发育上未见明显差异.CitMYB20过表达植株能够在一定程度上减弱柑橘溃� 姚利晓 范海芳 张庆雯 何永睿 许兰珍 雷天刚 彭爱红 李强 邹修平 陈善春关键词:柑橘溃疡病 过表达 柑橘中黄龙病菌效应子SDE70的表达特征及寄主互作蛋白解析 被引量:7 2020年 柑橘黄龙病菌主要致病种亚洲种(‘Candidatus Liberibacter asiaticus’,Las)具有完整的Sec依赖型分泌系统,可分泌致病因子(效应子)作用于寄主靶标蛋白或基因,调控寄主的抗(感)病反应。为了研究黄龙病菌Sec依赖型效应子在柑橘中的致病机理及其寄主靶标基因,本研究中从感病‘锦橙’中克隆了Las病原菌Sec依赖型效应子基因SDE70(CLIBASIA02470)。生物信息分析显示,SDE70蛋白全长132个氨基酸,N端20个氨基酸为典型信号肽。大肠杆菌碱性磷酸酶活性分析显示,该信号肽具有胞外分泌功能。亚细胞定位显示,SDE70::GFP融合蛋白在洋葱细胞质和细胞核中积累。定量PCR分析发现,耐黄龙病酸柚显症叶脉中SDE70表达量显著低于未显症叶脉,相反,易感黄龙病‘锦橙’显症叶脉中表达显著高于未显症叶脉;‘锦橙’根中SDE70表达量显著高于叶脉,而幼叶叶脉中显著低于老叶。SDE70在不同品种不同症状发育时期以及不同组织中表达差异显著。利用酵母双杂交试验筛选获得26个与SDE70互作的柑橘蛋白。GO富集分析表明,42.3%的蛋白质与细胞内生物合成过程有关;65.4%的靶标蛋白位于细胞质或质膜上;34.6%的靶标蛋白具有核糖核苷酸结合的分子功能。进一步酵母点对点杂交试验验证3个与SDE70效应子强相互作用的靶标蛋白(CsTRAPP、CsARF、CsRub1),其主要参与植物囊泡转运、类泛素化等过程,暗示SDE70效应子极有可能调控柑橘信号转导和胞质运输途径影响寄主抗(感)病反应。 龙俊宏 赵珂 杜美霞 谢竹 陈善春 何永睿 邹修平关键词:柑橘 柑橘黄龙病 定量PCR 一种改良柑橘的sgRNA及其应用和使用方法 本发明涉及植物基因工程技术领域。本发明提供了一种改良柑橘的sgRNA及其应用和使用方法,所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ... 邹修平 文庆利 龙俊宏 刘语诺 龙琴 何永睿 彭爱红 陈善春文献传递 柑橘转基因成分多重PCR检测体系的建立 被引量:2 2012年 [目的]建立柑橘转基因成分的多重PCR检测体系。[方法]根据GenBank中pBI121质粒序列和柑橘(Citrus.)Actin基因序列,分别设计CaMV35S启动子、NOS启动子、NOS终止子特异引物和Actin基因的特异引物,建立能同时检测出4种序列的多重PCR检测体系,同时通过正交试验确定该体系的最佳引物浓度和比例及PCR反应体系中各因素的浓度及反应程序,并对该方法的灵敏度进行验证。[结果]试验得到的最佳MPCR反应体系为:10×buffer 2.5μl,25 mmol/L MgCl22.0μl;dNTP Mixture(2.5 mmol/L each)2.0μl,10μmol/L的Actin基因、35S启动子、NOS启动子、NOS终止子引物分别加入1.0、1.0、1.5、0.5μl,模板DNA 0.1μg,Taq DNA聚合酶1.25U,加ddH2O至25μl。PCR反应程序为:94℃预变性5 min;94℃30 s,64.1℃45 s,72℃50 s,31个循环;72℃10 min。试验中,经正交优化后的4重PCR反应灵敏度达0.1%。[结论]该研究建立的MPCR检测体系,理论上已能满足柑橘或其深加工产品的转基因成分检测。 李政利 彭爱红 邹修平 何永睿 姚利晓 陈善春关键词:多重PCR 正交试验 转基因成分 响应黄龙病侵染的柑桔韧皮部蛋白2基因筛选及表达分析 2018年 为了探索柑桔韧皮部蛋白2(Phloem Protein 2,PP2)在寄主与黄龙病菌互作中的功能,以嫁接传毒后的高感种质锦橙Citrus sinensis和耐病种质酸柚Citrus grandis病枝叶片为材料,通过实时荧光定量PCR方法从全基因组水平初步筛选到6个响应黄龙病侵染诱导的PP2基因,并比较了其在锦橙和酸柚中的相对表达量。结果表明,CsPP2B15可能与耐病有关,CsPP2B2和CsPP2B10可能与感病相关。采用生物信息学的方法对6个基因编码氨基酸序列从结构组成、基本理化性质、亲疏水性进行分析并构建了系统发育树,发现在柑桔中CsPP2B15和CsPP2A与拟南芥PP2的亲缘关系较近,而CsPP2B2、CsPP2B10、CsPP2B12-1、CsPP2B12-2与大豆PP2亲缘关系较近,CsPP2A与拟南芥PP2的亲缘关系最近。 文庆利 吴柳 白晓晶 许兰珍 陈善春 邹修平关键词:柑桔黄龙病 柑橘黄龙病病原菌Las在叶圆片嫁接接种的‘锦橙’中早期扩散研究 被引量:9 2018年 为了探究黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)病原菌在柑橘韧皮部的早期运动情况,以柑橘黄龙病亚洲致病种CandidatusLiberibacterasiaticus(Las)为毒源,黄龙病高感品种‘锦橙’实生苗为受体材料进行叶圆片嫁接传毒。利用定量PCR技术对嫁接口处近端主脉、远端主脉、叶柄以及缘周叶组织进行了为期84d的菌量测定。结果发现,病原菌在近端主脉中积累最快,其次是远端主脉、叶柄和缘周叶组织。以近端主脉为原初侵染部位,Las在嫁接叶片中1~84 d的早期运动可分为潜伏期(1~42 d)、指数期(43~70 d)和稳定期(71~84 d)。在早期侵染过程中,Las病原菌主要沿叶主脉从原初侵染部位由近向远扩散,其扩散趋势与症状从原初侵染部位向外扩散紧密相关。证实叶圆片嫁接法可作为柑橘HLB一种有效的传毒方式。 吴柳 白晓晶 文庆利 谢竹 何永睿 王丽娟 陈善春 邹修平关键词:柑橘黄龙病 柑橘响应黄龙病侵染的韧皮部蛋白2基因CsPP2B15的克隆与表达分析 被引量:6 2018年 黄龙病病原菌诱导柑橘筛孔胼胝体过度积累是其致病的一个重要因素。柑橘韧皮部蛋白(PhloemProtein,PP)在筛孔胼胝体积累中起着重要作用。为研究柑橘韧皮部蛋白响应黄龙病亚洲种(CandidatusLiberibacterasiaticus,CLas)侵染的功能,克隆获得了一个响应黄龙病侵染差异表达的PP基因CsPP2B15的编码区和长1.5 kb的启动子序列,并以高感品种锦橙和耐病品种酸柚老叶和嫩叶为材料,进行基因表达分析。结果发现,CsPP2B15在高感品种锦橙嫩叶中受CLas诱导显著上调表达,而在耐病品种酸柚嫩叶中受CLas诱导显著下调表达,且在叶肉中的表达量显著高于叶脉。嫩叶和嫩梢被认为是柑橘响应黄龙病侵染的早期原初侵染部位。因此,CsPP2B15可能在CLas侵染柑橘早期中起重要作用。CsPP2B15启动子的顺式作用元件预测分析发现,CsPP2B15启动子含有许多与逆境和激素有关的顺式作用元件。进一步构建了CsPP2B15启动子控制GUS报告基因的植物表达载体,转化枳[Poncirustrifoliata(L.)Raf.]上胚轴。GUS组织化学染色和GUS酶活性测定均表明,CsPP2B15启动子具有较强的韧皮部组织特异性。 文庆利 谢竹 吴柳 何永睿 陈善春 邹修平关键词:柑橘 黄龙病 基因表达 观赏植物组织培养与基因工程研究进展(综述) 被引量:38 2002年 本文综述近年来观赏植物组织培养和基因工程的研究进展。 彭爱红 何永睿 邹修平 许兰珍 邹哨兵关键词:观赏植物 生物技术 基因工程 柑橘基因工程育种研究策略及其进展 被引量:10 2013年 由于柑橘具有童期长、基因高度杂合、多胚性、远缘杂交不亲和及性器官败育等生物学特性,在很大程度上限制了传统育种的发展,基因工程育种能高效地对植物进行定向改良,将成为柑橘定向改良育种研究工作的重要手段。近十余年来,已成功利用农杆菌侵染法将外源基因转入到越来越多的柑橘品种,并建立柑橘成年态材料的遗传转化体系和标记基因删除系统。对近年来柑橘成年态材料转化、标记基因的更替和转基因柑橘安全性研究等方面的成果进行了总结,对柑橘基因工程育种在抗细菌病、真菌病、病毒病等生物逆境和干旱、低温等非生物逆境,以及在改善柑橘果实性状和生长性状等方面的研究进展进行了综述。 姚利晓 何永睿 邹修平 雷天刚 许兰珍 彭爱红 陈善春关键词:柑橘 基因工程 育种 生物安全