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王瑜
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- 所属机构:华中农业大学
- 所在地区:湖北省 武汉市
- 研究方向:农业科学
- 发文基金:国家科技支撑计划
相关作者
- 彭金美
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- 陈瑾田志军彭金美王瑜周艳君安同庆童光志
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- 伪狂犬病病毒BarthaK61株Us区缺失片段的鉴定被引量：6
- 2008年
- 为利用PCR技术对伪狂犬病病毒（PRV）BarthaK61株us区的具体缺失情况进行分析，根据已发表的PRV全基因组序列设计了4对引物，以PRV双城株基因组作为对照，对us区进行扩增。对扩增片段的序列分析表明，BarthaK61株基因组的Us区缺失了3489bp，为第122560～126049位核苷酸，其间包括部分gI基因、全部的gE和Us9基因以及部分Us2基因。
- 彭金美陈瑾田志军王瑜周艳君安同庆童光志
- 关键词：伪狂犬病病毒
- 带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究被引量：16
- 2009年
- 本研究通过基因克隆技术以伪狂犬病病毒(PRV)弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源重组序列,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记,构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载体pUCTK-EGFP-BACII。将PRV基因组和转移载体共转染Vero细胞,利用同源重组在Bartha K61株的TK基因中插入了BAC质粒和绿色荧光蛋白筛选标记,经过11轮噬斑纯化和鉴定证实获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC。通过噬斑试验和一步生长曲线测定等方法对重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC的生长特性进行研究,结果发现带有BAC质粒及筛选标记的重组病毒rv-PRVBAC在体外细胞培养中的增殖速度与亲本毒Bartha K61株相比没有明显差别,说明大的基因片段的插入没有影响重组病毒在体外的繁殖速度。重组病毒rv-PRVBAC在Vero细胞上盲传18代,其绿色荧光蛋白仍能够稳定表达,通过PCR鉴定可以检测到插入的外源片段和插入位点两侧的病毒基因序列,表明所获得的重组病毒rv-PRVBAC得到了稳定遗传。本研究成功获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC,为进一步开展PRV的细菌人工染色体的构建奠定了基础。
- 彭金美王瑜田志军周艳君陈瑾安同庆童光志
- 关键词：伪狂犬病毒BAC重组病毒
- 致弱过程中高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株部分生物学特性的研究被引量：2
- 2009年
- 为了研制高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)弱毒疫苗,将高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN4株进行了致弱驯化,在Marc-145细胞上对其进行了3次蚀斑克隆和连续传代。该毒株的病变速度随着代次增高逐渐加快,传至80代以后其病毒滴度达到最高并保持稳定;电镜观察发现低代次病毒粒子形态以棒状为主,高代次病毒粒子形态以球形为主;蚀斑形态比较发现低代次病毒形成的蚀斑大小不一,而高代次病毒形成的蚀斑大小均一;序列分析和病毒抗原性分析表明HuN4株传代过程中GP5蛋白羧基端1个主要抗原表位(196QWGRL200)发生突变即196Q突变为196R,针对该表位的单克隆抗体只与HuN4株低代次病毒反应而不与高代次病毒反应。以上结果表明:在Marc-145细胞上经蚀斑克隆和连续传代致使HP-PRRSVHuN4株部分生物学特性发生改变,这些特性的改变在病毒弱化过程中的作用还有待进一步的研究。
- 田志军安同庆周艳君彭金美陈谨王瑜童光志刘娣
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒生物学特性
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株致弱毒株特异性抗原表位的鉴定被引量：2
- 2009年
- 通过对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,HP-PRRSV)HuN4株亲本毒及其不同代次传代毒株Nsp2(Nonstndural protein2)蛋白氨基酸序列比较分析,发现不同代次的Nsp2蛋白存在4处氨基酸点突变,针对每个突变点分别人工合成编码短肽的核苷酸序列,经原核表达后进行Western blot分析。结果表明表达的融合蛋白F65-11(749KGEPVSDQPAK759)能够特异性的与HuN4-F40、HuN4-F65和HuN4-F112感染猪的血清发生反应,而与HuN4F5感染猪的阳性血清和CH-1a株阳性血清不发生反应,证实第4个氨基酸点突变(S754)处存在一个免疫优势抗原表位。将该表位肽段由N端和C端逐步缩短继续鉴定,当N端缩短到第5个氨基酸(754SDQPAK759)C端缩短到第3个氨基酸(749KGEPVSDQ757)时,表达的融合蛋白不能与PRRSV阳性血清反应,最终推测该抗原表位必需氨基酸为753VSDQ756。选取GenBank中提交的部分高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的Nsp2氨基酸序列,对该表位氨基酸所在位置进行序列比较,分析结果显示位于Nsp2蛋白749→759位氨基酸序列高度保守,F65-11变异位点C754→S754为HuN4株系列传代毒株所特有。本研究结果证实抗原表位F65-11可以作为鉴别HuN4-F112弱毒疫苗所诱导产生的特异性抗体的候选抗原。
- 姜一峰周艳君田志军安同庆肖燕韦天超王瑜彭金美于海李国新闫丽萍张善瑞童光志
- 关键词：PRRSV抗原表位
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- 王瑜
- 关键词：伪狂犬病病毒重组病毒
- 带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究
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- 彭金美王瑜田志军周艳君陈瑾安同庆童光志
- 关键词：伪狂犬病毒BAC重组病毒
- 文献传递
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- 关键词：伪狂犬病毒BAC重组病毒
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