“十五”国家科技攻关计划(2004BA519A19-4)
- 作品数：2 被引量：15H指数：2
- 相关作者：杨涛刘明刘春国张云张晓霁更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所沈阳农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- H5N1亚型禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及其生物活性鉴定被引量：9
- 2007年
- 经RT-PCR扩增了H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)片段,限制性内切酶酶切后将其克隆到pFastBacHTA杆状病毒转座载体,经酶切鉴定及测序,筛选出阳性重组转座载体pFastBac-H5。将pFastBacH5转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选和PCR鉴定获得重组杆状病毒穿梭载体rBacmid-H5。rBacmid-H5在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot、血凝试验和血凝抑制试验分析表明:分子量约63kDa重组血凝素蛋白(rH5)在sf9昆虫细胞中实现了高效表达。rH5具有血凝活性,而且其血凝活性能够被H5N1禽流感病毒高免血清所抑制;rH5免疫鸡诱导产生针对H5N1禽流感病毒亚型特异的血凝抑制抗体,说明表达的重组蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性。
- 张晓霁刘明刘春国杨涛张云
- 关键词：血凝素基因杆状病毒
- 流感病毒M2蛋白研究进展
- 目前,每年的流感流行都会造成世界范围内约有10%～20%的人感染流感病毒,其中约有300～500万人会产生严重症状,并可导致大约25～50万人的死亡,给整个人类社会带来很大的经济负担。目前的禽流感疫情更是引起全世界的关注...
- 万春和刘明刘春国张晓霁杨涛
- 关键词：流感病毒氨基酸序列胞外区金刚烷胺金刚乙胺
- 猪流感病毒神经氨酸酶基因(N1和N2)在昆虫细胞中的表达
- 根据GenBank发表的N1和N2亚型猪流感NA基因序列设计引物,扩增出NA基因片段,将其克隆到pFastBacGP67A和pFastBacGP67C杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67A-N1和...
- 万春和刘明刘春国杨涛
- 关键词：猪流感病毒神经氨酸酶基因
- H5N1亚型禽流感病毒NS1基因在昆虫细胞中的表达被引量：11
- 2006年
- 将H5N1亚型禽流感病毒(AIV)NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移载体pFastBac1-NS1。将pFastBac1-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1。在脂质体转染试剂介导下将rBacmid-NS1转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rBV-NS1。rBV-NS1感染Sf9细胞后,通过SDS-PAGE、Westernblot和ELISA分析表明:获得了分子量为26kDa的特异性NS1蛋白;并且该蛋白可与H5N1AIV攻毒鸭的血清发生特异性免疫反应,而不能与H5N1AIV灭活疫苗免疫鸭的血清发生反应。试验结果表明:NS1在Sf9昆虫细胞中获得了高效表达,具有与天然蛋白相似的免疫活性,并可以作为区分免疫及自然感染个体的鉴别诊断抗原,为建立禽流感病毒自然感染家禽与禽流感灭活疫苗免疫家禽的鉴别诊断方法奠定了基础。
- 刘春国刘明张云杨涛
- 关键词：H5N1NS1杆状病毒表达
