广州市科技攻关项目(2006Z2-E4051)
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 相关作者：邓宁王宏向军俭朱中松杨琴更多>>
- 相关机构：暨南大学广州铭康生物工程有限公司更多>>
- 发文基金：广州市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- bFGF与VEGF抗原表位筛选及复合肽的表达鉴定被引量：7
- 2010年
- 目的筛选bFGF与VEGF抗原表位,构建复合肽进行原核表达,并对复合肽免疫原性及抑瘤效果进行研究。方法生物信息学方法分别预测bFGF和VEGF抗原表位,筛选优势表位,通过柔性Linker连接各表位构建复合肽,合成引物,重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE PCR)方法合成复合肽cDNA序列,克隆入原核表达载体pET32a进行表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western-Blot鉴定,Ni-NTA柱纯化复合肽并免疫小鼠,间接ELISA法测定抗bFGF抗体和抗VEGF抗体滴度。构建黑色素移植瘤C57BL/6小鼠模型,研究复合肽免疫后肿瘤生长情况。结果生物信息学方法筛选获得3个bFGF表位和2个VEGF表位连同一个噬菌体多肽库筛选表位构建成复合肽,SOEPCR方法成功合成复合肽cDNA序列,构建原核表达载体表达bFGF与VEGF复合肽,纯化的复合肽免疫小鼠产生抗bFGF抗体和抗VEGF抗体;并且体内能有效抑制黑色素瘤生长。结论生物信息学方法筛选bFGF和VEGF获得的抗原表位构建的复合肽在体内同时激发抗bFGF抗体和抗VEGF抗体,并且能抑制肿瘤的生长,为研究bFGF与VEGF表位的抗肿瘤作用奠定基础。
- 王宏朱中松杨琴向军俭杨红宇邓宁
- 关键词：生物信息学BFGFVEGF原核表达重叠延伸PCR肿瘤
- 酵母表面展示技术应用的研究进展被引量：5
- 2009年
- 酵母菌的蛋白表达方式与高等真核生物细胞十分相似,酵母表面展示技术是研究真核生物,尤其是人类蛋白质表达的理想方法之一。酵母菌表面标记可溶性配基,通过流式细胞技术对酵母菌展示文库进行快速、精确的筛选,其已广泛用于研究天然蛋白质-蛋白质的相互作用、抗体Fab片段的亲和力,成熟、抗体的检测与筛选,以及功能蛋白质抗原表位图谱绘制等。
- 翟一凡邓宁
- VEGF189基因合成、原核表达及鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的获得编码VEGF189蛋白的基因,并通过原核表达系统表达VEGF189融合蛋白。方法应用SOE PCR技术合成VEGF189基因,克隆入pET-32a(+)原核表达载体,转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western blot检测,表达产物经HisTrapTMHP亲和柱层析纯化,测定蛋白浓度。结果DNA测序分析表明,合成的VEGF189基因与文献报道相一致。在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的Trx-VEGF189融合蛋白,以包涵体和可溶2种形式存在。表达产物可被兔抗鼠VEGF多抗特异识别。经HisTrapTMHP亲和柱纯化,获得纯度达85%的融合蛋白。结论成功合成VEGF189基因,并在原核表达系统中获得高表达,为研制高效抗肿瘤的VEGF抗体和疫苗奠定了前期基础。
- 陈丹王宏朱中松向军俭杨琴赵鑫邓宁
- 关键词：原核表达
- 抑制肿瘤血管新生的复合肽VBP3局部刺激与全身过敏性实验被引量：2
- 2011年
- 目的:评价抑制肿瘤血管新生的复合肽VBP3的安全性。方法:同体左右侧自身对比法对3只家兔进行皮下注射的局部刺激实验。28只豚鼠随机分为4组:无菌生理盐水(PS)阴性对照组6只,牛血清白蛋白(BSA)阳性对照组6只,复合肽VBP3低剂量组6只,复合肽VBP3高剂量组6只,进行全身过敏实验;剩余4只豚鼠,牛血清白蛋白阳性对照组和复合肽VBP3高剂量组各2只,不经致敏直接心脏激发。结果:抑制肿瘤血管新生的复合肽VBP3对家兔皮下注射的局部刺激反应轻微;豚鼠实验仅复合肽VBP3高剂量组1只豚鼠出现弱阳性过敏反应,且很快缓解,其余豚鼠未见过敏症状。结论:抑制肿瘤血管新生的复合肽VBP3在本实验条件下安全。
- 康艳丽王宏向军俭王盼盼吕卫东邓宁
- 关键词：血管内皮细胞生长因子成纤维细胞生长因子2
- 血管内皮细胞生长因子表位肽体外抗肿瘤作用研究被引量：2
- 2010年
- 目的:研究筛选血管内皮细胞生长因子(VEGF)不同表位肽抗肿瘤及抗血管新生效用。方法:构建4种不同的pCANTAB5-E/VEGF表位肽载体,将VEGF表位肽通过噬菌体展示技术展示于噬菌体表面,MTT法检测VEGF噬菌体表位肽对黑色素瘤细胞(B16)、人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,Transwell小室检测其对B16F10细胞迁移的影响,ECMgel检测其对HUVEC成管的影响。结果:筛选出VEGF的4种(VSB、VNB、VEB、VTB)表位肽中,VNB对HUVEC细胞增殖的抑制率达到64.8%,VEB、VTB对B16的增殖抑制率分别为75.7%和66.5%。4株表位肽对高转移细胞B16F10迁移抑制率均超过80%。结论:筛选得到的4株VEGF表位肽对黑色素瘤细胞、血管内皮细胞的增殖、迁移和成管有抑制作用,通过分析其表位区段后可制备成小分子多肽,为今后抗肿瘤多肽药物和疫苗的研发奠定基础。
- 赵鑫王宏向军俭朱中松宋其芳邓宁
- 关键词：VEGF表位肽抗肿瘤抗血管新生
- 重组VEGF-A_(189)发酵、纯化及鉴定
- 2009年
- 为了获得大量重组血管内皮生长因子(VEGF-A189)蛋白的可溶性表达,对重组VEGF-A189工程菌进行发酵条件的优化并开展发酵研究.通过摇瓶培养进行可溶性发酵条件优化,在5L发酵罐中发酵重组VEGF-A189工程菌,将发酵产物经镍离子柱亲和层析纯化,并对发酵产物进行SDS-PAGE,WesternBlot和ELISA等分析鉴定.结果表明,重组VEGF-A189工程菌可溶性发酵条件为:37℃培养重组VEGF-A189工程菌4h,加入0.3mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)于28℃诱导表达4h.在5L发酵罐中按比例放大发酵,在补料发酵3.5h后菌体密度(A600nm)达到8.0,调整发酵温度到28℃,IPTG诱导4h后的菌体密度为13.72,菌体产量为40g/L.镍离子柱亲合层析纯化后重组VEGF-A189纯度达到90%以上,回收率大于80%,WesternBlot、ELISA分析结果显示,重组VEGF-A189蛋白和抗VEGF抗体有良好的结合活性.结果表明经过发酵条件优化后发酵可获得有免疫结合活性的可溶性重组VEGF-A189蛋白.
- 朱中松王宏杨琴向军俭赵鑫杨红宇邓宁
- 关键词：发酵可溶表达
