国家自然科学基金(81271204)
- 作品数：14 被引量：58H指数：5
- 相关作者：李军曹红韩园刘绪华王孝庆更多>>
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- 信号蛋白HMGB1和RAGE在Aβ_(25-35)损伤神经元中的表达变化被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)、晚期糖基化终末产物受体(receptor of advanced glycation,RAGE)在β淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)_(25-35)损伤海马神经元中的变化。方法:培养至第7天的原代海马神经元加入不同浓度Aβ_(25-35)作用不同时间后,行细胞计数试剂(cell counting kit,CCK-8)检测细胞活力,确定Aβ_(25-35)浓度及作用时间。将原代海马神经元分为两组:正常细胞组、损伤组。行两组神经元形态学观察,应用免疫印迹技术检测神经元胞浆、胞核HMGB1及胞浆RAGE、NF-κB的表达,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α的表达。结果:神经元CCK-8的活力检测确定给予25μmol/L Aβ_(25-35)、作用24 h造神经元损伤模型。形态学观察损伤组神经元明显减少,呈聚集状态。损伤组神经元胞浆HMGB1明显低于正常细胞组(1.596±0.189 vs.0.146±0.043,P<0.05),损伤组神经元胞核HMGB1高于正常细胞组(0.934±0.145 vs.1.370±0.354,P<0.05),损伤组神经元胞浆RAGE、NF-κB均高于正常细胞组(0.962±0.180 vs.1.253±0.254,0.825±0.116 vs.1.023±0.150,P<0.05)。ELISA检测发现损伤组上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α均高于正常细胞组(P<0.05)。结论:信号蛋白HMGB1与RAGE、炎症因子IL-1β与TNF-α在Aβ_(25-35)损伤神经元中表达均升高,HMGB1可能通过RAGE-NF-κB炎症通路参与Aβ_(25-35)损伤神经元的炎症反应。
- 杨芳骅南克项芳芳刘绪华韩园曹红李军
- 关键词：淀粉样蛋白神经元高迁移率族蛋白1
- RNA干扰高迁移率族蛋白1对Aβ25-35刺激HT22细胞中晚期糖基化终末产物受体/Toll样受体4信号通路相关蛋白表达的影响被引量：5
- 2019年
- 目的研究RNA干扰高迁移率族蛋白1(HMGB1)对β淀粉样蛋白片段25-35(Aβ25-35)刺激HT22细胞HMGB1、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、Tol样受体4(TLR4)、NF-κB、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等蛋白表达的影响。方法 Aβ25-350,2.5,5,10,20和40μmol·L-1作用HT22细胞24 h后,MTT法检测细胞存活,计算半数抑制浓度(IC50)。将对数生长期的HT22细胞分为5组:正常细胞对照组、Aβ25-3540μmol·L-1组、小干扰RNA(siRNA)50μmol·L-1组、siRNA或scramble siRNA+Aβ25-35组(HT22细胞转染si RNA或scramble si RNA 50μmol·L-1作用24 h后,再加入终浓度为40μmol·L-1人工合成的Aβ25-35处理24 h),显微镜观察细胞形态变化,免疫荧光检测HMGB1在细胞中位置的改变,Western印迹法检测细胞内HMGB1,RAGE,TLR4和NF-κB P65的表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-1β和TNF-α的水平。结果Aβ25-35作用HT22细胞24 h,IC50为41.17μmol·L-1。后续采用Aβ25-3540μmol·L-1进行实验。Aβ25-3540μmol·L-1作用24 h后,细胞大量死亡,聚集成团,突起减少,细胞间隙增大,且HMGB1从核内转移至核外。细胞内的HMGB1,RAGE,TLR4和NF-κB P65表达均显著升高(P<0.05),细胞上清液中IL-1β和TNF-α的水平显著升高(P<0.05);经siRNA 50μmol·L-1处理24 h,可显著降低细胞内HMGB1,RAGE,TLR4和NF-κB P65的表达(P<0.05)及细胞上清液中IL-1β和TNF-α的水平(P<0.05)。结论 RNA干扰HMGB1可减少Aβ25-35刺激HT22细胞HMGB1,RAGE,TLR4和NF-κB P65的表达。
- 韩园刘煜戈文威王孝庆曹红李军
- 关键词：小干扰RNA高迁移率族蛋白1Β淀粉样蛋白
- 姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆及海马炎症信号通路的影响被引量：2
- 2018年
- 目的:探讨喂饲姜黄素对淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因小鼠学习记忆和海马β-淀粉样蛋白(Aβ)含量及高迁移率族蛋白1(HMGB1)、晚期糖基化终产物受体(RAGE)、Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)p65表达的影响。方法:20只雄性转基因小鼠随机分为模型组(M组,n=10)和治疗组(T组,n=10),另选10只雄性同窝野生型小鼠作为对照组(C组,n=10)。T组4月龄起喂饲含姜黄素(100mg·kg-1·d-1)的饲料,M组和C组喂饲普通饲料,9月龄时进行Morris水迷宫实验,免疫组织化学和Westernblot分别检测Aβ和HMGB1、RAGE、TLR4、NF-κBp65蛋白的表达。结果:与C组比,M组水迷宫实验中逃避潜伏期延长(P<0.05),且平均跨平台次数减少(P<0.05),海马CA1区和DG区Aβ数量及IOD值增加(P<0.05),海马中HMGB1、RAGE、TLR4和NF-κBp65表达均增多(P<0.05)。与M组比,T组逃避潜伏期缩短(P<0.05),且平均跨平台次数增多,海马CA1区和DG区Aβ数量及IOD值降低(P<0.05),海马中HMGB1、RAGE、TLR4和NF-κBp65表达均减少(P<0.05)。结论:持续喂饲姜黄素5个月可显著改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力并减少海马Aβ含量,其机制可能与抑制海马HMGB1-RAGE/TLR4-NF-κB信号通路有关。
- 韩园黄晨苗方钱娟刘启星南克项芳芳曹红李军
- 关键词：姜黄素高迁移率族蛋白1晚期糖基化终产物受体核转录因子-ΚB
- 依托孕烯对阿尔茨海默病大鼠学习记忆的影响
- 2016年
- 目的 建立大鼠阿尔茨海默病（AD）模型,观察背侧海马注射依托孕烯对AD大鼠学习记忆能力、海马γ-氨基丁酸（GABA）A受体α1亚基（GABAAα1）及γ-氨基丁酸转运蛋白-1（GAT-1）表达的影响.方法 雄性SD大鼠36只,体重230～270 g,双侧基底核各注射IBO 8 μg建立AD模型,成模后随机分为4组（n=9）：假手术组（Sham组）、溶剂对照组（Con组）、依托孕烯组（ENG组）、GABAA受体拮抗剂组（BIC组）.术后1周行连续6d的Morris水迷宫定位航行实验检测大鼠学习记忆能力,Con、ENG、BIC组在测试第1、2d后2h内背侧海马给予相应药物,BIC组在ENG海马给药前30 min腹腔注射8 mg/kg荷包牡丹碱.免疫组织化学法（n=6）和Western blot法（n=3）检测各组海马CA1/3区GABAAα1及GAT-1的表达.结果 分别与Sham组及Con组比较,ENG组及BIC组大鼠平均逃避潜伏期（AEL）均明显缩短（P＜0.05）,海马CA1/3区GABAAα1阳性细胞数均显著减少[CA1：（5.9±0.7）、（6.6±1.0）个比（3.7±0.8）、（3.1±0.4）个;CA3：（5.9 ±1.3）、（6.2±0.6）个比（3.8±0.6）、（2.8±0.6）个,P＜0.01],CA3区GAT-1阳性细胞均显著减少[（23.7±2.3）、（23.0±1.7）个比（18.3±1.8）、（17.6±2.4）个,P＜0.01],海马GABAAα1（P＜0.05）和GAT-1（1.7±0.5、1.7±0.4比0.9±0.4、0.5±0.2,P＜0.01）蛋白表达水平均明显降低.4组间CA1区GAT-1阳性细胞数差异无统计学意义（P＞0.05）;ENG组和BIC组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 依托孕烯可显著改善AD大鼠学习记忆能力,其机制与调节GABA受体水平的表达有关,其中GABAAα1及GAT-1可能参与其中记忆功能的调节作用.
- 祁旦巳王孝庆王中苏叶莉莎王斌曹红李军
- 关键词：阿尔茨海默病记忆Γ-氨基丁酸
- HMGB1与小胶质细胞在阿尔茨海默病发生发展中的研究进展被引量：2
- 2016年
- 高迁移率族蛋白B1(High mobility group box protein-1,HMGB1)和小胶质细胞在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)疾病的发生发展中起了重要的作用。HMGB1不但参与了其神经炎症的过程,并能抑制小胶质细胞对Aβ清除。通过受体结合激活了NF-κB轴信号通路的级联反应,启动基因转录和表达,释放大量炎症介质和转录产物,加重了AD的炎症反应,但有研究表明不同转录因子有不同作用,如P50敲除具有保护作用,但P65激活也具有保护作用。HMGB1通过紧密结合Aβ42,使Aβ42处于稳定的寡聚体状态,减弱小胶质细胞对Aβ42清除的能力。Aβ可直接与小胶质细胞上TLR结合,尤其是TLR2、TLR4,可以促进小胶质细胞分泌各种细胞因子和趋化因子,正反馈促进小胶质细胞的激活以及对Aβ的清除。HMGB1和小胶质细胞对Aβ清除之间失衡也是AD发生及进展的重要原因之一,因此HMGB1可能成为治疗AD的一种新的靶标。
- 孔微微刘绪华曹红李军
- 关键词：阿尔兹海默病Β-淀粉样蛋白小胶质细胞高迁移率族蛋白B1
- 高迁移率族蛋白1对Aβ_(25-35)刺激下BV-2细胞NF-κB表达的作用被引量：3
- 2017年
- 目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)对β-淀粉样蛋白(Aβ)_(25-35)刺激下的小鼠小胶质细胞系BV-2中核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法:将对数期生长的BV-2细胞分为4组:正常细胞组(不做任何处理)、模型组(加入40μmol/L Aβ_(25-35))、RNA干扰组(采用RNA干扰HMGB1后加入40μmol/L的Aβ_(25-35))和溶剂对照组(加入终浓度为0.1%的DMSO)。各组细胞孵育72 h后(Aβ_(25-35)处理24 h)采用Western blot法检测HMGB1和NF-κB p65的蛋白表达情况。结果:CCK-8结果显示40μmol/L Aβ_(25-35)为最佳造模浓度。选择30 nmol/L带GFP荧光基团的HMGB1-siRNA转染BV-2细胞,转染效率约为80%~90%。Western blot实验结果显示,HMGB1-siRNA片段干扰后BV-2细胞中HMGB1的表达明显降低(P<0.05);Aβ_(25-35)刺激BV-2细胞后,胞内HMGB1和核内NF-κB p65表达均明显升高(P<0.05),HMGB1-siRNA作用后,HMGB1和核内NF-κB p65表达均明显下降(P<0.05)。结论:RNA干扰HMGB1表达可减少Aβ_(25-35)刺激的BV-2细胞核内NF-κB的表达。
- 韩园南克项芳芳方钱娟黄晨苗雍慧媛曹红李军
- 关键词：高迁移率族蛋白1Β-淀粉样蛋白核因子-ΚBRNA干扰
- 姜黄素通过抗应激作用改善脑缺血再灌注大鼠工作记忆被引量：5
- 2014年
- 目的:探讨姜黄素预先给药对大鼠全脑缺血再灌注后空间工作记忆改善作用的机制。方法:成年雄性SD大鼠120只,经T迷宫训练后按随机数字表法分成5组:假手术组(SHAM组)、脑缺血再灌注组(IR组)、姜黄素组(CUR组)、皮质酮组(CORT组)和姜黄素+皮质酮组(CUR+CORT组),每组24只。各组给予相应药物、溶媒注射,1h后全脑缺血10min后再灌注,于再灌注7d行T迷宫检测工作记忆,于再灌注2h、1、3、7d采血清和脑组织标本,TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡情况,ELISA检测血清皮质酮(CORT)和海马脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果:与SHAM组比较,IR组CORT水平增加(164±36vs 92±24,P<0.05),海马BDNF含量降低(8.7±2.8vs 19.4±5.1,P<0.05),海马CA1区凋亡神经元数目增加(233±22vs 21±4,P<0.01),T迷宫正确率降低(65%±7%vs 87%±9%,P<0.05);与IR组比较,CUR组CORT水平降低(102±18,P<0.05),海马BDNF含量增加(13.3±3.3,P<0.05),海马CA1区凋亡神经元数目减少(163±11,P<0.05),T迷宫正确率增高(79%±10%,P<0.05);与IR组比较,CORT组海马BDNF降低(4.4±1.2,P<0.05),海马CA1区凋亡神经元数目增加(332±35,P<0.05),T迷宫正确率降低(58%±6%,P<0.05);与CORT组比较,CUR+CORT组海马BDNF含量增加(10.5±2.3,P<0.05),海马CA1区凋亡神经元数目降低(211±27,P<0.05),T迷宫正确率增高(71%±12%,P<0.05)。结论:姜黄素预先给药可通过抑制应激反应改善大鼠全脑缺血再灌注后空间工作记忆。
- 姬斌刘绪华杨芳骅周瑞曹红李军
- 关键词：再灌注损伤工作记忆应激姜黄素
- 姜黄素通过抗炎作用改善大鼠脑缺血再灌注后工作记忆的效果被引量：5
- 2014年
- 目的 评价姜黄素预先给药对大鼠全脑缺血再灌注后空间工作记忆的作用并探讨机制.方法 成年雄性SD大鼠120只,经T迷宫训练后按随机数字表法分成5组：假手术组（S组）、脑缺血再灌注组（IR组）、姜黄素组（C组）、LPS组（L组）和姜黄素＋LPS组（C＋L组）,每组24只.各组给予相应药物或溶剂腹腔注射,1h后全脑缺血10 min后再灌注,于再灌注7d行T迷宫检测工作记忆,于再灌注2h、1、3、7d采血清和脑组织标本,HE和Nissl染色计数海马CA1区平均锥体细胞密度,免疫组化和ELISA分别检测海马和血清白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白表达.结果 与S组比较,IR组T迷宫正确率降低（88％±12％比69％±8％,P＜0.05）,海马平均锥体细胞密度减少,海马和血清中IL-1β（0.26±0.04比0.53±0.06,P＜0.05;48 ±13比161±31,P＜0.05）和TNF-α（40.244±0.025比0.418±0.036,P＜0.05;33±4比85±15,P＜0.05）含量增高;与IR组比较,C组T迷宫正确率（78％±13％）增高,海马平均锥体细胞密度增高,海马和血清中IL-1β（0.44±0.09,72±19）和TNF-α（0.307 ±0.047,57±14）含量减少（P＜0.05）;与IR组比较,L组T迷宫正确率（61％±6％）降低、海马平均锥体细胞密度降低、海马和血清中IL-1β（0.86±0.13,331±51）增加、TNF-α（0.735 ±0.059,185±20）含量增加（P＜0.05）;与L组比较,C＋L组T迷宫正确率（69％±12％）增高,海马平均锥体细胞密度增高,而海马和血清中IL-1β（0.69±0.09,246±24）降低,TNF-α（0.586 ±0.047,105±25）含量降低（P＜0.05）.结论 姜黄素预先给药可通过抑制炎症反应改善大鼠全脑IR后病理学变化和空间工作记忆障碍.
- 姬斌韩园刘启星刘绪华杨芳骅周瑞连庆泉曹红李军
- 关键词：再灌注损伤工作记忆炎症姜黄素
- 姜黄素抑制β淀粉样蛋白致小胶质瘤细胞神经炎症反应被引量：5
- 2017年
- 目的:采用β-淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))致小鼠小胶质瘤细胞(BV2细胞)炎症建立阿尔茨海默病(AD)模型,观察高迁移率族蛋白1(HMGB1)与糖基化终末产物受体(RAGE)介导炎症反应的关系,并探讨姜黄素(Cur)对BV2细胞活力、HMGB1、RAGE、IL-1β、TNF-α、NF-κB表达的影响。方法:将对数生长期的BV2细胞分为4组。对照组:不做任何处理;Aβ_(25-35)模型组:40μmol/L Aβ_(25-35)刺激24 h;Aβ_(25-35)+RAGE受体阻断组:抗RAGE抗体10μmol/L预处理1 h后,加入40μmol/L Aβ_(25-35)刺激24 h;Aβ_(25-35)+Cur治疗组:姜黄素10μmol/L预处理1 h后,加入40μmol/L Aβ_(25-35)刺激24 h。孵育24 h后行细胞形态学观察,CCK8检测细胞活性,Western blot法检测细胞HMGB1、NF-κB、RAGE蛋白的表达情况,ELISA法检测上清液HMGB1、IL-1β、TNF-α的含量。结果:与对照组相比,Aβ_(25-35)模型组、Aβ_(25-35)+RAGE受体阻断组细胞活力明显下降,胞内HMGB1表达明显升高(P<0.05),总NF-κB表达增加(P<0.05),上清液中IL-1β和TNF-α含量升高(P<0.05)。与Aβ_(25-35)模型组、Aβ_(25-35)+RAGE受体阻断组相比,Aβ_(25-35)+Cur治疗组细胞内HMGB1、RAGE、NF-κB表达明显下降(P<0.05),上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α含量明显下降(P<0.05)。结论:姜黄素可减轻Aβ_(25-35)引起的BV2细胞炎症反应,其机制与抑制HMGB1表达及核外释放、抑制NF-κB通路有关,与RAGE表达下调部分相关。
- 张旭彤王孝庆王中苏张英曹红李军
- 关键词：姜黄素淀粉样Β蛋白BV2细胞高迁移率族蛋白质类糖基化终末产物受体
- 抗HMGB1治疗改善认知功能的进展被引量：3
- 2017年
- 高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1，HMGB1）是存在于真核生物细胞内的一种进化上高度保守的非组蛋白染色体结合蛋白。生物活性取决于其在细胞内的位置，在核内，HMGB1作为DNA分子伴侣，参与DNA复制、转录、重组和修复。
- 李军韩园
- 关键词：HMGB1高迁移率族蛋白DNA复制结合蛋白非组蛋白真核生物
