国家自然科学基金(81100962)
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 相关作者：方伯言张延明赵云于国华王大江更多>>
- 相关机构：辽宁医学院辽宁医学院附属第一医院航天中心医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 水通道蛋白4基因表达与阿尔茨海默病相关性的动物实验被引量：1
- 2015年
- 目的探讨水通道蛋白-4(aquaporin 4,AQP4)基因表达与阿尔茨海默病的相关性。方法应用Agilent表达谱芯片,选用快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8),通过与同月龄正常对照小鼠(SAMR1)比较,提取脑组织总RNA,筛选出差异基因并应用Real time-PCR技术和免疫荧光方法进行鉴定。结果筛选差异表达基因共804个,其中表达上调521个,表达下调283个,在Gene Bank查找相关基因的生物学功能及通路,找到与AD密切相关基因有6条:Herc6,Lyst,Nkain1,Aqp4,Uch13,Slc9a8,其中Aqp4基因的差异倍数为6.26(P<0.001)。Real time-PCR检测结果显示,SAMP8组Aqp4基因表达量较SAMR1组增高(P=0.037 6),免疫荧光提示SAMP8组中Aqp4表达增加。结论 Aqp4在SAMP8小鼠中表达量增多,可能与清除β淀粉样蛋白沉积、代偿性星形胶质细胞增生有关。
- 周明月王可伊张延明赵云温宏峰孟凡磊方伯言
- 关键词：阿尔茨海默病基因芯片水通道蛋白-4
- 新型FKBPs配体HD5-6对SAMP8小鼠的抗老化研究被引量：1
- 2014年
- 目的观察FKBPs(FK506 blinding proteins)配体噻嗪酰胺衍生物(HD5-6)对SAMP8快速老化小鼠学习记忆能力和海马神经元的影响,以及对SAMP8小鼠海马神经元基因表达谱的影响。方法选用10月龄快速老化的SAMP8小鼠20只,随机分为痴呆组、HD5-6组;另选10月龄正常老化的SAMR1小鼠10只作为正常对照组。各组分别腹腔注射药物35 d,并于29 d采用Morris水迷宫实验评价各组小鼠学习记忆能力的变化。HE染色观察海马区神经元形态;TUNEL观察海马神经元凋亡情况,用基因芯片技术检测HD5-6组和痴呆组小鼠海马神经元基因表达谱的变化差异。结果与正常对照组相比,痴呆组在定位航行实验中表现出明显的学习记忆障碍,逃避潜伏期显著延长(P<0.05),HD5-6组自3 d开始逃避潜伏期比痴呆组明显缩短(P<0.05);空间探索实验中HD5-6组跨平台次数、原平台象限停留时间明显多于痴呆组(P<0.05)。与正常对照组相比,痴呆组海马区神经元数量明显减少,细胞排列紊乱,大量的神经元细胞核固缩,深染、坏死,其神经元凋亡指数(51.73±4.48)%明显高于正常对照组(28.02±11.25)%(P<0.05),HD5-6干预的SAMP8小鼠海马区神经元病理改变明显改善,海马神经元凋亡指数(20.47±2.25)%明显降低(P<0.01)。HD5-6组与痴呆组海马神经元基因表达谱相比,表达差异在2倍以上的基因有118条,表达上调的为9条,表达下调的为109条。其中有功能的mRNA中,表达上调的有4条,表达下调的有21条。结论 HD5-6能够改善快速老化小鼠SAMP8的学习记忆能力和海马神经元病理改变,并可能通过对基因表达谱产生影响而发挥明显的抗衰老作用。
- 张延明肖军海赵云韩丹王大江杨静方伯言
- 关键词：SAMP8MORRIS水迷宫TUNEL基因芯片
- NHE-1 miRNA转染所致细胞内pH值变化对BACE1的影响
- 2012年
- 目的探讨腺病毒介导的人Na+-H+交换体-1(NHE-1)miRNA转染人源性神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)后,细胞内pH值变化及其对β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)的影响。方法培养SH-SY5Y,随机分为正常对照组、NHE-1基因敲低组和阴性对照组,并构建NHE-1基因敲低细胞模型。采用荧光分光光度计测定各组细胞内pH值,通过Real-time PCR及Western blotting检测BACE1 mRNA及蛋白表达。结果与正常对照组相比,NHE-1基因敲低组细胞内pH值明显降低(P<0.01),阴性对照组细胞内pH值无明显变化;NHE-1基因敲低组细胞内BACE1 mRNA表达及蛋白含量明显增高(P<0.01),阴性对照组细胞内BACE1 mRNA表达及蛋白含量无明显变化。结论细胞内pH值降低能够增强BACE1的表达。
- 于国华方伯言
- 关键词：细胞内PH值
- 细胞内酸化对自噬的影响
- 2012年
- 目的探讨细胞内酸化对自噬的影响。方法利用pAd-miR-NHE-1病毒悬液转染人源性神经母细胞瘤细胞株,制备NHE-1基因敲低细胞模型。在透射电镜下观察阴性对照组及腺病毒转组转染成功后0.5、2、4、8 h自噬体的形成、线粒体形态及溶酶体数目的变化;Western blotting法检测自噬标记物LC3Ⅱ的表达。结果透射电镜下,阴性对照组线粒体形态及溶酶体数目正常,腺病毒转染成功后0.5～4 h可见线粒体肿胀、变形,溶酶体数目增多,自噬囊泡增多,自噬小体形成。8 h可见凋亡小体出现,线粒体数目减少,未见自噬小体,可见少量溶酶体。Western blotting显示,阴性对照组LC3Ⅱ表达较低,腺病毒转染成功后0.5 h LC3Ⅱ表达升高(P<0.01),4 h达高峰(P<0.01),8 h表达降低,且低于阴性对照组(P<0.01)。结论细胞内酸化可以激活自噬的发生。
- 肖楠方伯言
- 关键词：自噬LC3
- 细胞内pH降低对β分泌酶和γ-分泌酶的影响研究
- 2012年
- 目的研究细胞内pH值下降的情况下,β分泌酶和早老素-1的表达及活性的变化。方法培养人源性神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞,用RNA干扰技术和无血清培养分别制造细胞内酸化模型;实验分成4组,即正常细胞组、NHE-1基因敲低组、阴性对照组、无血清培养组。运用荧光分光光度计测定各组细胞内pH值,并通过Real-Time PCR和Western Blotting分别检测β分泌酶和早老素-1 mRNA及蛋白的相对表达量,通过ELISA检测β分泌酶和早老素-1的活性。结果 NHE-1基因敲低组及无血清培养组较正常细胞内pH值降低(P<0.05),阴性对照组细胞内pH值无明显变化;与正常、阴性对照组相比,NHE-1基因敲低组β分泌酶mRNA表达为5.65±0.33,蛋白表达为0.37±0.030;早老素-1 mRNA表达1.75±0.04,蛋白表达分别为0.70±0.01,无血清培养组β分泌酶mRNA表达为2.40±0.55,蛋白表达为0.32±0.031;早老素-1 mRNA表达1.39±0.03,蛋白表达分别为0.68±0.08,其表达及活性均明显增强(P<0.05);阴性对照组细胞与正常细胞比较,β分泌酶和早老素-1 mRNA和蛋白表达及活性均无明显变化(P>0.05)。结论细胞内pH降低能够增强β分泌酶的表达和活性;因早老素-1被认为是γ-分泌酶的主要成分和活性中心,因此推测细胞内pH降低也能够增强γ-分泌酶的表达和活性,从而影响APP的剪切,增加Aβ生成。
- 方伯言黄美风于国华
- 关键词：阿尔茨海默病细胞内PH值Β分泌酶早老素-1
