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发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒细胞嗜性研究被引量：17: 2014年; 目的了解发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（SFTSV）细胞嗜性,加强对SFTSV传播与致病机制的理解.方法通过不同感染复数（multiplicity of infection）的SFTSV感染Vero等10种不同组织来源的细胞株,采用双抗体夹心ELISA法和间接免疫荧光实验（IFA）检测不同时间点的细胞培养上清和细胞内病毒抗原表达水平,绘制病毒动态生长曲线,并观察记录细胞病变（cytopathic effect,CPE）情况,确定SFTSV细胞嗜性.结果 Vero、HEK 293、COS-7、CHO、HepG2、Hela、THP-1和MRC-5等不同组织来源的细胞均可感染SFTSV,并产生明显细胞病变,但病毒在不同细胞中的复制水平差异显著,其中Vero细胞对SFTSV较易感,病毒可增殖至10S0TCID50/ml以上；Raji细胞、Jurkat细胞不能感染SFTSV.结论 SFTSV具有广嗜性,可以感染肝、肺、肾、子宫和卵巢等多器官以及免疫系统等来源的细胞系,但不能感染T和B淋巴细胞源细胞系,为SFTSV相关基础研究提供重要线索.; 何程程李阿茜刘林李川李建东张全福李德新仇佩虹梁米芳; 关键词：细胞生理学

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒抗原定量检测方法的建立: 2015年; 目的建立定量检测发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus，SFTSV）抗原的方法，以用于疫苗生产过程中sFrSV抗原含量的检测。方法用SFTSV抗原免疫BALB／c小鼠，制备抗SFTSV单克隆抗体。抗体纯化后以辣根过氧化物酶进行标记，建立双抗体夹心ELISA法。确定该法的线性范围和灵敏度，并对该法的准确性、精密性、专属性进行验证。结果建立的ELISA法的线性范围为0．117～2．000mg／L，定量限为0．117mg／L，线性的决定系数为0．9903。该法具有良好的准确性和精密度，样品回收率为98％，变异系数均〈8％。该法的专属性良好，对6株不同sFTSV的检测结果均为阳性，而与其他布尼亚病毒、Veto细胞培养上清及其他生产辅料均无交叉反应。结论成功建立了SFTSV抗原的定量检测方法，为疫苗生产的质量控制奠定了基础。; 陈蕾戴新宪郝春生张越宋冬梅田龙李秀玲; 关键词：抗原酶联免疫吸附测定

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒非结构蛋白NSs的原核表达及初步鉴定: 2015年; 目的克隆、表达发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)非结构蛋白NSs,对其功能初步鉴定。方法采用PCR法扩增经密码子优化后的SFTSV NSs基因,并克隆至PGEX-4T-2载体中,构建原核表达载体PGEX-4T-2-NSs,经酶切、测序鉴定后转化表达菌BL21(DE3),再经诱导、纯化得到谷胱甘肽S-转移酶(GST)-NSs融合蛋白,用Western Blot验证融合蛋白GST-NSs的抗原性。结果成功构建了GST-NSs融合蛋白原核表达载体,并在BL21细菌中获得高效表达;纯化后的融合蛋白具有良好的抗原性。结论实现了SFTSV重组NSs蛋白的原核高效表达,为进一步深入研究其结构与功能奠定了基础。; 张文帅张黎温恬迟莹黄超曾晓燕焦永军; 关键词：原核表达

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒灭活疫苗生产用毒株的筛选及鉴定被引量：3: 2016年; 目的:从临床样本中分离发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)毒株,经过充分比较研究后,确定1株适合疫苗生产的毒株。方法:使用Vero细胞从发热伴血小板减少综合征患者临床样本中分离病毒株,经噬斑纯化鉴定后进一步适应传代,比较研究各毒株在细胞中的传代适应性、免疫原性、交叉保护性以及遗传稳定性等,筛选并确定1株疫苗生产用毒株,按照要求建立三级种子库。结果:共获得7个SFTSV分离株,各分离株病毒均可以在Vero细胞中良好复制,病毒滴度均可达到7.0 lg CCID50·m L^(-1)以上,其中AH12株滴度可达9.0 lg CCID50·m L^(-1)。毒株适应传代后滴度稳定,灭活病毒免疫动物均可产生针对本株及其他毒株的中和抗体,其中HB29株和AH12株免疫后具有较高的中和抗体水平以及良好的交叉保护性。基于AH12株建立的三级种子库经全面检定,结果符合《中华人民共和国药典》三部(2010版)要求。结论:经过对不同SFTSV毒株的比较研究,确定AH12株为疫苗生产用毒株并成功建立三级种子库。; 戴新宪郝春生陈蕾王潇潇刘宇吴蕴怡马淑花支惠宁海京李秀玲; 关键词：发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒灭活疫苗

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国家科技重大专项(2013ZX09102029)