国家自然科学基金(30200010)
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
- 相关作者：白雪帆李新红张野黄长形王平忠更多>>
- 相关机构：第四军医大学唐都医院中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 汉坦病毒G1和G2糖蛋白的基因克隆及糖蛋白杆状病毒表达载体的构建被引量：2
- 2006年
- 目的:克隆汉坦病毒G1和G2糖蛋白基因,构建基于杆状病毒表面展示系统(BSDS)的G1和G2糖蛋白杆状病毒表达质粒。方法:用PCR方法扩增汉坦病毒西安分离毒洙84FLi株G1和G2糖蛋白基因的编码区,将其克隆入T载体,构建糖蛋白基因的T-A克隆。然后将糖蛋白编码区从T-A克隆中切下,插入杆状病毒表达转移载体pBAcsurf-1的gp64信号肽和gp64成熟蛋白之间。结果:获得四个分别含有汉坦病毒G1和G2糖蛋白编码区的T-A克隆,并构建成功G1和G2糖蛋白的杆状病毒表达质粒。结论:构建成功基于BSDS的G1和G2糖蛋白杆状病毒表达质粒,为进一步用BSDS表达汉坦病毒糖蛋白奠定了基础。
- 李新红张岩张野王平忠李光玉黄长形白雪帆
- 关键词：汉坦病毒糖蛋白基因克隆
- 汉滩病毒84FLi株L片段全长cDNA克隆的构建及鉴定
- 2007年
- 目的:克隆汉滩病毒84FLi株L片段的cDNA。方法:提取病毒总RNA,反转录为cDNA模板,用高保真的Taq酶扩增出含有L片段部分克隆的片段84L1(1-1875)、84L2(1725-3352)、84L3(2921-4961)和84L4(4727-6533),将这4个片段分别与T载体pGEM-T-Easy连接,转化感受态大肠杆菌后获得4个克隆pGEM-L1、pGEM-L2、pGEM-L3和pGEM-L4。利用酶切连接方法获得pGEM-L12和pGEM-L34,2段产物覆盖全长的L片段,并且于2921-3352 nt区域内相互重叠;再利用酶切连接的方法获得了含有L片段全序列的cDNA克隆。结果:获得6个含有L片段部分片段的克隆,进而酶切组装为含有L片段全序列的cDNA克隆。结论:应用分段克隆和逐次拼接法成功构建了84FLi株L片段全序列的cDNA克隆。
- 张野李新红黄长形王平忠姜泓白雪帆
- 关键词：汉坦病毒基因克隆
- 汉滩病毒西安分离株84FLiM片段的克隆
- 2006年
- 目的:克隆汉滩病毒84FLi株M片段的cDNA.方法:提取病毒总RNA,反转录为cDNA模板,用高保真的Taq酶扩增出G1和G2两个糖蛋白编码的基因片段:84M2.0(1～2058)和84M1.6(1964～3616).将这两个片段分别与T载体pMD18T连接,转化感受态大肠杆菌后获得两个分别为G1和G2编码的克隆pMD84M2.0和pMD84M1.6.再利用酶切连接的方法获得M片段全序列的cDNA克隆.结果:获得两个分别为G1和G2糖蛋白序列编码的克隆,进而酶切组装为含有M片段全序列的cDNA克隆.结论:获得了84FLi株M片段全序列的cDNA克隆.
- 李新红张岩张野王平忠黄长形白雪帆
- 关键词：汉滩病毒糖蛋白基因克隆
- 汉坦病毒依赖RNA的RNA聚合酶研究进展
- 2008年
- 汉坦病毒（Hantavirus，HV）属于布尼亚病毒科（Bunyaviridae）汉坦病毒属，是单链、分节段的负链RNA病毒，其基因组由大（Large，L）、中（Medium，M）、小（Small，S）3个片段组成。分别编码病毒依赖RNA的RNA聚合酶（L蛋白）、G1和G2糖蛋白、核衣壳蛋白（NP）。汉坦病毒由啮齿类动物携带，在宿主动物中产生非致病性持续性感染，可以经过啮齿类动物排放的病毒污染的气溶胶等多种途径感染人类。
- 张野李新红白雪帆
- 关键词：RNA聚合酶汉坦病毒属啮齿类动物布尼亚病毒核衣壳蛋白
- 应用RNA聚合酶Ⅰ反向遗传操作技术拯救汉滩病毒84FLi株微基因组
- 2009年
- 目的建立基于汉滩病毒（HTNV）84FLi株L片段的RNA聚合酶Ⅰ微基因组拯救体系。方法将含有氯霉素乙酰转移酶（CAT）编码区的cDNA插入含有HTNV 84FLi株L片段5′端和3″端非编码区的质粒内的两个非编码区之间，将此cDNA嵌合体（polⅠ表达盒）克隆人人polⅠ启动子和终止子之间，分别获得正义和反义方向的RNA polⅠ转录报告质粒。用报告质粒转染293T细胞或等量293T和HTNV感染的Vero混合培养细胞，在HTNV的L蛋白和核衣壳蛋白表达质粒共转染后48h收获细胞，检测CAT活性。用上清液感染293T细胞，了解CAT活性的传代能力。结果构建了正义和反义方向的HTNV 84FLi株L片段微基因组RNA聚合酶Ⅰ报告质粒pLvRNA-CAT和pLcRNA-CAT，用此质粒转染细胞后能检测到CAT的表达，且CAT活性能在拯救病毒微基因组中传代。结论应用RNA聚合酶Ⅰ反向遗传操作技术成功拯救了HTNV 84FLi株微基因组。
- 张野李新红姜泓黄长形王平忠孙利白雪帆
- 关键词：汉滩病毒遗传学技术
- 汉滩病毒西安分离株84FLi的S片段全基因序列测定及分析
- 2004年
- 目的 : 测定我国陕西西安出血热肾病综合征 (HFRS)患者流产胎儿肝分离的病毒 84FLi株的全S片段基因序列 ,了解其分子特征 ,并确定其在汉坦病毒 (HV)种系发生中的位置。 方法 :采用逆转录 聚合酶链式反应(RT PCR) ,扩增出S基因的cDNA ,直接用PCR产物或克隆入 pMD18 T载体中测序。 结果 :84FLi株的全S基因共由 16 88个核苷酸组成 ,四种核苷酸的比例分别为A 31.39%、C 19.2 5 %、G 2 3.0 4 %和T 2 6 .30 % ,GC含量为4 2 .2 9% ,AT含量为 5 7.71%。最大开放读码框为 37～ 132 6 ,共编码 4 2 9个氨基酸。核苷酸序列同源性分析表明 ,84FLi株与汉滩病毒 (HTN)型同源性高于与其他型HTV的同源性。 84FLi株与中国毒株Chen4和RG9同属于一个进化分支 ,而与HTN型国外毒株距离较远 ,属于不同的进化分支。 结论 :84FLi株属于HTN ,并与国内分离的HTN同源性较高。
- 李新红杨为松杭长寿白雪帆马本江黄长形
- 关键词：汉坦病毒系统发生树
