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地黄饮子含药血清对大鼠BMSCs与NSCs共培养影响转归的研究被引量：2: 2017年; 目的探讨以升麻为药引子的地黄饮子(CRD)含药血清对经过骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养后的大鼠神经干细胞(NSCs)的存活和分化的影响。方法建立BMSCs与NSCs共培养模型,在共培养体系中加入CRD含药血清,从培养第3天开始分别进行5-溴-2-脱氧尿嘧啶(Brd U)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性标志物微管相关蛋白2(MAP-2)、少突胶质细胞特异性表达蛋白标志物(MBP)免疫细胞化学双染色。采用流式细胞仪检测NSCs的存活率,利用细胞免疫荧光和Western blot法鉴定NSCs的分化情况,比较NSCs的存活率和分化率,分析CRD含药血清对共培养后NSCs的存活及分化的影响。结果与生理盐水对照组相比,中、高浓度CRD含药血清在BMSCs与NSCs共培养体系中第7天能显著提高NSCs存活率和NSE、GFAP、MAP-2、MBP活性(P<0.01)。结论 CRD含药血清在BMSCs与NSCs共培养体系中能促进NSCs有效分化和提高NSCs存活率。; 武博文武密山王慧娜郭金栋高维娟高维娟韩红伟王茹; 关键词：药引子地黄饮子含药血清神经样细胞

去卵巢骨质疏松模型大鼠小肠钙结合蛋白mRNA表达与菟丝子黄酮的干预被引量：12: 2014年; 背景:菟丝子是旋花科植物菟丝子Cuscutachinensis Lam.的成熟种子,为温补肾阳的要药,前期研究表明,由菟丝子组成的补肾复方在抑制骨量丢失,改善骨密度方面有明显疗效。目的:探讨菟丝子黄酮对去卵巢骨质疏松模型大鼠股骨骨密度、血清和肾脏1,25-二羟基维生素D3(1,25(OH)2D3)含量、小肠钙结合蛋白(CaBp-D9K)mRNA表达的影响。方法:72只SD雌性大鼠,随机数字表法均分为6组(n=12):假手术组、模型组、维生素D3组和菟丝子黄酮小、中、大剂量组。假手术组仅行假手术,其余5组分别行卵巢切除,1周后分别灌胃给予维生素D3(2 mg/kg)以及小、中、大剂量菟丝子黄酮连续给药3个月。腹主动脉取血,分离血清,取出肾脏,采用酶联免疫吸附法检测1,25(OH)2D3含量。之后处死动物,取出股骨,测定骨密度;取出第2腰椎,采用实时荧光反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)测定腰椎和肾脏组织维生素D受体mRNA表达。取出小肠,采用RT-PCR测定小肠CaBp-D9K mRNA表达。结果与结论:与假手术组相比,模型组股骨骨密度、血清和肾脏1,25(OH)2D3、腰椎组织维生素D受体mRNA、小肠CaBp-D9K mRNA表达均下降。与模型组比较,菟丝子黄酮中、大剂量组和维生素D3组均可使股骨骨密度、血清和肾脏1,25(OH)2D3、腰椎组织维生素D受体mRNA、小肠CaBp-D9K mRNA表达增加。菟丝子黄酮能够显著提高去卵巢大鼠股骨骨密度、血清和肾脏1,25(OH)2D3、腰椎组织维生素D受体mRNA、小肠CaBp-D9K mRNA表达,促进肠钙吸收与成骨细胞活性,增强骨质量。; 李小林武密山朱紫薇邓勇存叶圆圆赵素芝任立中李彬; 关键词：菟丝子黄酮 1,25-二羟基维生素D3 钙结合蛋白国家自然科学基金

地黄对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎骨组织整合素β1 mRNA表达的影响被引量：9: 2015年; 目的探讨地黄对去卵巢骨质疏松大鼠股骨骨密度、腰椎骨组织整合素β1 mRNA表达的影响。方法 72只雌性大鼠,随机分为假手术组、模型组、雌二醇组和地黄小、中、大剂量组。假手术组仅行假手术,其余五组行卵巢切除术。术后1w分别灌胃给予17β-雌二醇和地黄小、中、大剂量,连续给药3个月。测定血钙、磷和碱性磷酸酶(ALP),尿钙(u-Ca)、磷、尿脱氧吡啶酚(D-Pyr)和肌酐(Cr)。之后处死动物,取出右侧股骨,测定骨密度;取出第2腰椎,测定骨钙(b-Ca)、磷(b-P)含量;取出第4腰椎,采用实时荧光逆转录聚合酶链反应测定腰椎骨整合素β1 mRNA表达。结果与假手术组相比,模型组血清ALP、u-Ca、D-Pyr/Cr显著增加,股骨密度、腰椎骨整合素β1 mRNA表达均降低。与模型组比较,地黄中、大剂量组和雌二醇组均可使血清ALP、u-Ca、D-Pyr/Cr排出量降低,股骨密度、腰椎骨整合素β1 m RNA表达均增加。结论地黄能抑制由于去卵巢雌激素缺乏引发的骨转换增强,提高骨密度,促进腰椎骨组织整合素β1 m RNA表达,增强骨质量。; 李小林武密山朱紫薇邓勇存叶圆圆赵素芝任立中王茹白霞韩红伟李彬; 关键词：骨质疏松地黄

密骨打老儿丸对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎和肾脏维生素D受体mRNA表达的影响被引量：7: 2014年; 目的探讨密骨打老儿丸(打老儿丸加淫羊藿、骨碎补、补骨脂、菟丝子等)对去卵巢骨质疏松大鼠生化指标的影响。方法 72只SD雌性大鼠,随机分为6组:假手术组、模型组、维生素D3(2 mg/kg)组和密骨打老儿丸小、中、大剂量组。假手术组仅行假手术,其余5组分别行卵巢切除术。术后1周分别灌胃给予密骨打老儿丸和维生素D33个月。采用酶联免疫吸附法检测血清1,25-二羟基维生素D3(1,25(OH)2D3)水平。测定股骨骨密度,采用实时荧光RT-PCR测定第2腰椎和肾脏组织维生素D受体(VDR)mRNA表达。结果与假手术组相比,模型组股骨骨密度、血清和肾脏1,25(OH)2D3、腰椎和肾脏组织VDR mRNA表达均下降。与模型组比较,密骨打老儿丸中、大剂量组和维生素D3组均可使股骨骨密度、血清和肾脏1,25(OH)2D3、腰椎和肾脏组织VDR mRNA表达增加。结论密骨打老儿丸和维生素D3显著提高去卵巢大鼠腰椎和肾脏组织VDR mRNA表达,促进肠钙吸收与成骨细胞活性,增强骨质量。; 武密山赵素芝任立中王茹白霞韩红伟李彬; 关键词：1,25-二羟基维生素D3 维生素D受体

升麻苷H-1利用鼻腔嗅觉区鼻-脑通道进行鼻脑靶向给药的可行性被引量：1: 2016年; 背景:近些年研究表明,鼻腔给药作为脑靶向给药的途径之一,可有效使通过其他给药途径不易透过血脑屏障的药物绕过血脑屏障,靶向递送到脑部,为治疗中枢神经系统疾病提供一种极有发展前景的给药途径。目的:研究大鼠鼻腔给药及静脉注射升麻苷H-1的药代动力学和脑靶向性归经的组织分布特性,探索升麻苷H-1利用鼻腔嗅觉区的鼻-脑通道进行鼻脑靶向给药的可行性。方法:鼻腔给药及静脉注射给予升麻苷H-1后,检测各时间点血浆和主要的归经组织器官(肺、脾、胃、大肠、肝、肾、脑、大脑、小脑、脑脊液、嗅球、嗅区等)药物浓度,绘制药-时曲线,用DAS程序拟合房室模型并计算药代动力学参数。结果与结论:1升麻苷H-1吸收迅速,分布广泛。在主要的归经器官中,肺、脑药物浓度分布均远高于其他脏器组织。2升麻苷H-1鼻腔给药后经以下吸收通路直接转运入脑:鼻腔嗅黏膜吸收进入蛛网膜下腔的嗅球,然后相继进入嗅区、脑脊液大脑、小脑等部位,嗅球是药物分子经鼻腔入脑的必经之路。3与静脉注射给药相比,升麻苷H-1鼻腔给药具有明显的肺、脑靶向性。; 武密山赵素芝高维娟王茹韩红伟师旭亮; 关键词：鼻腔给药示踪剂

升麻苷H-1对脑缺血大鼠纹状体氨基酸类神经递质含量的影响被引量：20: 2016年; 目的:研究脑缺血大鼠脑纹状体区域细胞外液中氨基酸类神经递质的表达变化,以探讨升麻苷H-1神经保护作用的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血组、升麻苷H-1高、中、低剂量组和金纳多组。用线栓法造成右侧大脑中动脉闭塞(MCAO),建立局灶脑缺血模型,假手术组和脑缺血组分别给予生理盐水腹腔注射,升麻苷H-1高、中、低剂量组和金纳多组分别给予不同剂量的药物腹腔注射,每天1次,连续7 d。采用脑微透析技术在大鼠脑纹状体区域内进行微透析活体采样,将微透析液注入高效液相-电化学检测器,检测样品中谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)和γ-氨基丁酸(GABA)的含量。结果:与假手术组相比,脑缺血组的兴奋性氨基酸Glu和Asp在脑缺血后2 h浓度升高(P<0.05)。升麻苷H-1高剂量组、金纳多组分别与脑缺血组相比,Glu和Asp在脑缺血后2 h显著降低(P<0.05);升麻苷H-1低、中剂量组分别与脑缺血组相比,Glu和Asp在脑缺血后2 h没有显著降低(P>0.05)。与假手术组相比,脑缺血组的抑制性氨基酸神经递质GABA和Gly在脑缺血后3 h浓度降低(P<0.05)。升麻苷H-1高剂量组、金纳多组分别与脑缺血组相比,GABA和Gly在脑缺血后3 h显著升高(P<0.05);升麻苷H-1低、中剂量组分别与脑缺血组相比,GABA和Gly在脑缺血后3 h没有显著升高。结论:升麻苷H-1可以抑制脑缺血时兴奋性氨基酸的过度释放,并增加抑制性氨基酸的浓度。升麻苷H-1不仅能透过血脑屏障,同时可调节脑缺血兴奋性氨基酸神经递质的功能紊乱,可能对缺血脑组织神经元有一定的保护作用。; 武密山赵素芝高维娟王茹韩红伟师旭亮; 关键词：脑缺血微透析天门冬氨酸

淫羊藿苷元磷脂复合物防治去卵巢骨质疏松大鼠骨丢失和提高骨质量的实验研究被引量：12: 2013年; 目的:探讨淫羊藿苷元磷脂复合物防治去卵巢骨质疏松大鼠骨丢失和提高骨质量的作用。方法:72只雌性大鼠,随机分为6组:假手术组、模型组、雌二醇组和淫羊藿苷元磷脂复合物低、中、高剂量组。假手术组仅行假手术,其余5组行卵巢切除术。术后1周分别灌胃给予17β-雌二醇(2 mg.kg-1)和淫羊藿苷元磷脂复合物低、中、高剂量(15,30,60 mg.kg-1),连续给药3个月。测定血钙、血磷和碱性磷酸酶(ALP),尿钙(u-Ca)、尿磷(u-P)、尿脱氧吡啶酚(D-Pyr)和肌酐(Cr)。之后处死动物,取出股骨、腰椎和胫骨,分别测定股骨密度,骨钙、骨磷,腰椎生物力学性能,胫骨组织形态计量学参数。结果:与假手术组相比,模型组血清ALP,u-Ca,D-Pyr/Cr显著增加,子宫萎缩,股骨密度、骨钙、骨磷、腰椎生物力学参数(弹性载荷、最大载荷、断裂载荷、刚度)、胫骨上段静态参数(骨组织总面积、骨小梁面积、骨小梁周长)、动态参数(标记周长百分数、骨形成率)均降低。与模型组比较,淫羊藿苷元磷脂复合物中、高剂量和雌二醇组可使血清ALP,u-Ca,D-Pyr/Cr排出量降低,股骨密度、骨钙、骨磷、腰椎生物力学参数(弹性载荷、最大载荷、断裂载荷、刚度)、胫骨上段静态参数(骨组织总面积、骨小梁面积、骨小梁周长)、动态参数(标记周长百分数、骨形成率)均增加。雌二醇组大鼠子宫增生,淫羊藿苷元磷脂复合物组大鼠子宫没有增生性变化。结论:淫羊藿苷元磷脂复合物能抑制由于去卵巢雌激素缺乏引发的骨转换增强,提高骨密度,增强腰椎抗压生物力学性能,且长期服用对子宫没有刺激作用。; 武密山赵素芝任立中王茹白霞韩红伟李彬; 关键词：淫羊藿苷元磷脂复合物骨质疏松骨组织形态计量学

基于“升降开阖”通玄府的引经药诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化被引量：2: 2015年; 背景:地黄饮子诱导的骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能恢复有明显的影响。目的:探讨应用"升降开阖"通玄府的引经报使药(升麻、牛膝分别置换薄荷)地黄饮子诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的可行性,并进一步研究在骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化中的调节作用。方法:取4周龄健康清洁级SD大鼠骨髓,采用全骨髓贴壁法体外培养骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测第3代细胞表面的骨髓基质标志CD90和造血细胞标志CD45。取第3代细胞,根据诱导条件不同分为4组:空白对照组、地黄饮子组、牛膝组、升麻组,空白对照组只用含体积分数为1%胎牛血清的DMEM/F12培养,后3组用地黄饮子含药血清、以牛膝为药引子的地黄饮子含药血清、以升麻为药引子的地黄饮子含药血清+体积分数为1%胎牛血清+DMEM/F12培养,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,诱导7 d后,采用免疫细胞化学法和Western blot检测神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白的表达,RT-PCR检测胶质细胞源性神经营养因子、脑源性神经营养因子m RNA的表达。结果与结论:第3代骨髓间充质干细胞大致呈单一的长梭形或扁平形,紧密漩涡样排列生长,流式细胞仪示CD90表达高达98%,而CD45表达仅1.3%。诱导7 d后,升麻组、牛膝组和地黄饮子组的细胞收缩变圆,向四周伸出多个明显突起,部分突起间存在连接,表现出典型的神经元样细胞形态,而空白对照组变化不明显。免疫组化染色显示牛膝组及升麻组神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白表达均高于地黄饮子组,牛膝组高于地黄饮子组,升麻组高于牛膝组,差异均有显著性意义(P<0.05)。Western blot检测结果与免疫细胞染色结果一致。RT-PCR检测胶质细胞源性神经营养因子、脑源性神经营养因子m RNA改变类似于相应蛋白改变,升麻组>牛�; 武密山赵素芝高维娟任立中王茹刘营韩红伟李彬; 关键词：细胞分化干细胞药引子地黄饮子骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化

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河北省自然科学基金(H2013206005)

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