国家自然科学基金(30570631)
- 作品数：6 被引量：57H指数：4
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- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院西安交通大学更多>>
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- 大鼠三叉神经节离体培养可用于血管性头痛发病机制和药物治疗的靶点研究被引量：10
- 2009年
- 目的颈动脉血降钙素基因相关肽水平升高是引发血管性头痛发作的重要原因之一,本研究探讨血管性头痛的发生机制和药物作用靶点的理想体外模型。方法SD大鼠三叉神经节在无血清DMEM培养液中离体培养12、24、48 h后免疫组化方法比较降钙素基因相关肽(CGRP)阳性细胞数表达水平,实时定量PCR法(real time-PCR)确定CGRP-mRNA表达水平的变化。结果大鼠三叉神经节离体培养24 h后CGRP的免疫阳性表达细胞数明显增高,CGRP-mRNA表达水平也较新鲜组明显增高(P均<0.05)。结论大鼠三叉神经节离体培养后能精确模拟体内血管性头痛发作期CGRP的变化,是研究血管性头痛发生机制和开发药物作用靶点的理想体外模型。
- 罗国刚雷莉吕社民樊文静徐仓宝
- 关键词：三叉神经节离体培养降钙素基因相关肽体外模型
- 偏头痛实验动物模型的研究现状被引量：22
- 2011年
- 偏头痛是一种由体外触发和体内病理生理机制相互作用、伴有神经心理及胃肠症状、具有遗传性及复发性的头痛综合征。其发病机制至今尚未完全明了,动物模型基于三叉神经血管学说、皮层扩散抑制学说和血管学说等理论而建立。现从造模机制、特点、适用范围及效度等方面对目前常用的偏头痛动物模型的研究现状进行综述。
- 袁博博罗国刚
- 关键词：偏头痛动物疾病模型
- 三叉神经节离体培养后降钙素基因相关肽调变的细胞内信号转导机制研究被引量：7
- 2010年
- 目的:探讨大鼠三叉神经节(TG)离体培养后降钙素基因相关肽(CGRP)表达增高的细胞内信号转导通路。方法:成年雄性SD大鼠TG在DMEM培养液离体培养12、24和48 h,应用免疫组化和实时定量PCR法分别检测CGRP阳性细胞数和mRNA表达水平变化。在培养液中分别加入一定浓度的炎症抑制剂地塞米松、转录水平特异性抑制剂放线菌素D、蛋白翻译水平特异性抑制剂环己酰胺,以及细胞内丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导系统ERK1/2、JNK、P38的3条信号通路上关键激酶的特异性阻断剂U0126、SP600125、SB239063与三叉神经节共同培养24 h,免疫组化和实时定量PCR法分别检测CGRP阳性反应细胞数和mRNA表达水平变化。结果:TG离体培养后12、24和48 h后CGRP阳性反应细胞数、平均吸光度和累积吸光度值均比新鲜组织明显增高,CGRP mRNA表达水平也明显增高。浓度为1×10^(-5)mol·L^(-1)的地塞米松、放线菌素D、环己酰胺以及U0126、SP600125分别与三叉神经节共同孵育24 h后,CGRP mRNA表达水平都显著降低。结论:TG离体培养后CGRP表达水平增高是通过细胞核内转录因子上调mRNA转录和蛋白翻译水平,是TG内非特异性炎症反应的结果,细胞内MAPK信号转导的ERK1/2通路和JNK信号通路参与了上调过程。
- 罗国刚雷莉樊文静吕社民徐仓宝
- 关键词：降钙素基因相关肽三叉神经节离体培养信号转导
- 天麻皂苷对三叉神经节离体培养后降钙素基因相关肽表达影响的机制研究被引量：18
- 2011年
- 利用成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)离体培养模型,深入研究天麻活性成分天麻皂苷对TG内降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)表达水平的影响以及相关的细胞内信号转导机制。将不同质量浓度的天麻皂苷与TG孵育后,免疫组织化学染色比较CGRP免疫反应(CGRP-immunoreactivity,CGRP-ir)阳性细胞数;实时定量PCR(real-time RT-PCR)对比与琥珀酸舒马普坦和盐酸氟桂利嗪作用下CGRP-mRNA表达变化;Western blotting检测进一步对比与细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)通路特异性阻滞剂PD98059、U0126作用下,磷酸化ERK1/2蛋白(phosphorylated ERK1/2,pERK1/2)水平变化。实验结果显示,天麻皂苷(5和10 mmol.L-1)与1.2 mmol.L-1琥珀酸舒马普坦程度相当地显著降低TG内CGRP-ir(+)细胞表达,而天麻皂苷(2.5、20和40 mmol.L-1)对CGRP-ir(+)细胞表达与培养组比较无显著差别。天麻皂苷(5和10 mmol.L-1)与1.2 mmol.L-1琥珀酸舒马普坦和10μmol.L-1盐酸氟桂利嗪分别显著降低CGRP-mRNA表达水平(P<0.01)。Western blotting检测结果显示,天麻皂苷(5和10 mmol.L-1)降低TG内pERK1/2蛋白表达水平的能力接近于PD98059和U0126(10μmol.L-1)。研究结果表明,天麻皂苷(5和10 mmol.L-1)能显著抑制大鼠TG内CGRP-ir(+)细胞表达,抑制CGRP mRNA表达的强度相当于琥珀酸舒马普坦和盐酸氟桂利嗪;降低TG内pERK1/2蛋白表达的能力接近于ERK1/2信号通路特异性阻滞剂的作用,提示天麻皂苷可能通过细胞内ERK1/2信号转导通路抑制CGRP上调表达。
- 罗国刚樊文静袁兴运袁博博吕社民曹永孝徐仓宝
- 关键词：降钙素基因相关肽细胞外信号调节激酶1/2三叉神经节信号转导
- 肿瘤坏死因子α、白介素1β和舒马曲坦对大鼠三叉神经节离体培养后降钙素基因相关肽mRNA表达水平的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和抗偏头痛药物舒马曲坦(Sumatriptan)对大鼠三叉神经节(TG)离体培养后降钙素基因相关肽(CGRP)mRNA表达水平的影响及其细胞内信号转导机制。方法将不同浓度的TNF-α、IL-1β、IL-2和Sumatriptan分别加入DMEM培养液中,与SD大鼠TG离体孵育24h;进一步将细胞内丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导系统ERK1/2、JNK、P38三条信号通路关键激酶特异性阻断剂PD98059、SP600125、SB239063加入DMEM培养液中,30min后分别加入有效浓度的炎性因子TNF-α和IL-1β后,与大鼠TG共同孵育24h,实时定量PCR(RT-PCR)法检测TG内CGRP-mRNA表达水平变化。结果 50μg/L的TNF-α、25μg/L的IL-1β可明显上调离体TG内CGRP-mRNA表达水平(P<0.05),0.1g/L和0.5g/L Sumatriptan能显著下调TG内CGRP-mRNA表达水平,而20～80μg/L的IL-2对CGRP-mRNA表达无影响。特异性阻滞剂SP600125、SB239063分别与50μg/L TNF-α、25μg/L IL-1β孵育24h后,CGRP-mRNA表达量较对照组显著降低(P<0.05)。结论 TG离体培养时,炎性因子TNF-α、IL-1β可显著上调CGRP-mRNA表达水平;一定浓度的舒马曲坦能下调CGRP-mRNA表达;JNK和P38信号转导通路参与了TNF-α、IL-1β诱导的TG内CGRP-mRNA上调过程。
- 罗国刚袁兴运袁博博雷莉吕社民曹永孝徐仓宝
- 关键词：降钙素基因相关肽三叉神经节肿瘤坏死因子Α白介素1Β舒马曲坦
- 舒马普坦通过细胞外信号调节激酶1／2和c—Jun氨基末端激酶信号通路下调三叉神经节内降钙素基因相关肽的表达被引量：3
- 2012年
- 目的探讨舒马普坦对大鼠三叉神经节（TG）离体培养后降钙素基因相关肽（CGRP）表达水平的影响。方法采用TG离体培养模型，按数字随机表法将54个TG随机分为新鲜组（6个）、对照组（6个）和实验组（7个亚组，每亚组6个，共42个）。实验组TG培养液中分别加入4种不同浓度舒马普坦，细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）信号通路阻滞剂U0126和PD98059，c—Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路阻滞剂SP600125，孵育24h后免疫组织化学染色检测CGRP免疫反应（CGRP—ir）阳性细胞表达，实时定量PCR检测CGRP—mRNA表达量，Western blot定量磷酸化ERK1／2（pERK1／2）和JNK（pJNK）蛋白水平。结果离体培养24h后，TG内CGRP—ir（＋）细胞表达明显增高，0．1和0．5mg／ml舒马普坦组CGRP-ir（＋）细胞百分比、阳性面积、累积吸光度、平均吸光度、CGRP—mRNA水平较对照组明显下降（tPcP=8．652、26．382，tarca=6．220、13．917，tId=5．606、15．904，tM=2．661、21．748，tmRNA=8．032、15．675，均P〈0．05）；而0．02和2．50mg／ml舒马普坦与对照组CGRP表达差异无统计学意义。Western blot结果显示：0．50mg／ml浓度舒马普坦显著降低TG内pERK1／2、pJNK水平，降低程度分别接近于10μmol/L的U0126、PD98059和SP600125。结论一定浓度舒马普坦通过细胞内ERK1／2、JNK信号通路下调大鼠TG离体培养后CGRP的过度表达。
- 罗国刚袁博博樊文静袁兴运霍康吕社民曹永孝徐仓宝
- 关键词：舒马普坦降钙素基因相关肽三叉神经节信号传导
