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苏州市科技计划项目(SYS201106)
作品数:
2
被引量:1
H指数:1
相关作者:
葛彦
居颂光
潘建忠
王卓
蔡文治
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相关机构:
苏州大学
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发文基金:
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2篇
2012
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人CD13基因克隆及其基因转染细胞株的构建
2012年
目的克隆人CD13全长cDNA,构建稳定表达人CD13分子的基因转染细胞株。方法提取人外周血单个核细胞总RNA,通过RT-PCR克隆人CD13基因,将人CD13基因重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term。将重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/CD13和辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,收集含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞,筛选获得Zeocin抗性的基因转染细胞。结果成功克隆人CD13基因和构建逆转录病毒载体pEGZ。Term/CD13,并成功获得稳定表达人CD13的基因转染细胞株L929/CD13。结论成功克隆了人CD13基因及其逆转录表达载体,成功制备了稳定表达人CD13的基因转染细胞株,为研究CD13生物学功能奠定了基础。
杨鹏
葛彦
陆婷
邓云
蒋林华
殷丽丽
居颂文
居颂光
关键词:
CD13
APN
基因转染细胞株
CD40基因特异性沉默对脑胶质瘤细胞株U87增殖和迁移的影响
被引量:1
2012年
目的探讨CD40基因特异性沉默对脑胶质瘤细胞增殖和迁移等恶性生物学行为的影响。方法构建特异性沉默CD40基因的重组表达载体(pSilencer3.1/shRNA-CD40)和随机对照载体(pSilencer3.1/shRNA-control),转染脑胶质瘤细胞株U87。采用RT-PCR和流式细胞术分别在mRNA和蛋白水平的检测CD40基因沉默效率,进而采用细胞计数法和Transwell法观察下调CD40分子表达后的U87细胞在sCD40L作用下增殖能力和迁移能力的改变。结果成功构建了特异性沉默CD40基因的稳定细胞株U87/shRNA-CD40,可显著下调U87细胞CD40 mRNA和蛋白质表达水平(P<0.05)。采用sCD40L激发CD40信号,结果显示,与野生型U87和对照组U87/shRNA-control相比,U87/shRNA-CD40细胞株增殖速率和迁移能力明显下降(均P<0.01)。结论特异性沉默脑胶质瘤细胞CD40分子表达,可以有效削弱肿瘤微环境中CD40信号导致的脑胶质瘤细胞增殖和迁移能力,这为临床治疗脑胶质瘤提供了新的线索。
蔡文治
王卓
谢炜
潘建忠
居颂光
葛彦
关键词:
基因沉默
CD40
增殖
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