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南京军区医学科技创新课题(12MA025)
作品数:
1
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相关作者:
陈玲
杨蕾
徐广峰
赵亚萍
郭锡熔
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相关机构:
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史春梅
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郭锡熔
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赵亚萍
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1篇
2013
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hsa-miR-26b沉默载体的构建及验证
2013年
目的构建hsa-miR-26b沉默载体,与其靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果。方法用miRNA海绵体技术设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将短发卡状RNA(shRNA)克隆入LV3-GFP-Puro载体,与靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞,于24 h后收集细胞RNA,用real-time PCR检测hsa-miR-26b表达水平,同时用双荧光素报告系统检测其对靶基因的作用。结果成功构建了有效的hsa-miR-26b沉默载体,经测序验证与设计序列一致;real-time PCR验证hsa-miR-26b表达水平降低了75%;双荧光素报告系统验证其对靶基因无抑制作用(P>0.05)。结论成功构建hsa-miR-26b沉默载体,并验证其对靶基因PTEN无抑制作用。
史春梅
徐广峰
宋桂仙
季晨博
陈玲
杨蕾
庞玲霞
赵亚萍
郭锡熔
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