国家科技重大专项(2009ZX10004-107)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 相关作者：赵友云王业富汪月汪峰刘彩林更多>>
- 相关机构：武汉大学湖北省中医院华中科技大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人类疱疹病毒6、7、8型实验室诊断方法的研究进展被引量：5
- 2013年
- 疱疹病毒是一类在分子生物学和医学上有重要意义的病毒,它们是典型的双链DNA病毒,在自然界中分布广泛。其中人类疱疹病毒（HHV）6、7、8型是近年来发现与幼儿急疹、移植性疾病和神经性疾病等相关的疱疹病毒。目前国内外对此3种病毒感染的致病机制、流行病学特征以及检测方法的研究比较活跃。疱疹病毒大约有100种之多,
- 郑毅赵友云王业富
- 关键词：疱疹病毒科感染
- 荧光定量PCR同步检测人类疱疹病毒6,7,8型方法的建立被引量：1
- 2013年
- 目的:建立同步检测人类疱疹病毒6,7,8型(HHV-6,-7,-8)的多重荧光定量PCR方法。方法:分别针对HHV-6,-7,-8的U67、U36、ORF65基因设计3对引物和3种Taq Man-LNA探针,构建三重荧光定量PCR反应体系,用于同步扩增HHV-6,-7,-8。分别应用HHV-6,-7,-8质粒建立对应标准曲线,并对多重荧光定量PCR方法进行线性范围、灵敏度、特异性、重复性和扩增效率等方法学评价。以DNA测序法为参考方法,检测45例疑似HHV感染者外周血单个有核细胞(PBMC)中的HHV-6,-7,-8,对多重荧光定量PCR方法进行临床特异性和敏感性评估。结果:多重荧光定量PCR方法检测HHV-6,-7,-8的线性范围均在10~6-10^(11)Copies/L,相关系数均>0.99,灵敏度为8×10~5Copies/L,最低检测限为5×10~5Copies/L,无非特异性扩增,线性范围内HHV-6,-7,-8的批间、批内变异系数(CV)均<5.5%;与单重荧光定量PCR相比,检测HHV-6,-7,-8质粒含量的相关性分别为0.980,0.987,0.965。以DNA测序方法为金标准,多重荧光定量PCR检测HHV-6,-7,-8的特异性均为100%,灵敏度分别是93.1%、80%、100%。结论:多重荧光定量PCR能够对HHV-6,-7,-8进行同步、快速和准确的定量检测,将在输血安全筛查方面有着广泛的应用前景。
- 郑毅高应林张凡雄赵友云王业富唐景峰
- 关键词：人类疱疹病毒
- 应用16S rRNA宽范围聚合酶链反应快速检测临床无菌体液感染被引量：5
- 2011年
- 目的应用16S rRNA宽范围聚合酶链反应(PCR)快速检测临床无菌体液感染,并与传统培养方法进行比较分析。方法收集94份临床无菌体液(血液、脑脊液、胸腹水、关节液)标本,提取细菌基因组DNA,应用16S rRNA宽范围PCR扩增,并将PCR阳性产物测序,然后将测序结果在美国国家生物技术信息中心(NCBI)上进行BLAST比对,从而确定菌种。同时,应用常规培养方法检测94份无菌体液标本,并对2种方法的结果进行比较。结果 16S rRNA宽范围PCR敏感性高,最低扩增浓度为103 CFU/mL,且该技术特异性高,其阳性扩增产物经测序比对后结果和培养结果完全吻合。另外,94例临床标本中应用培养方法培养出阳性例数为9例,阳性率为9.6%,而应用宽范围PCR,除培养阳性的9例均为阳性外,另外扩增出6例阳性标本,阳性率为15.9%,而此6例经测序证实分别为4株铜绿假单胞菌、1株黏质沙雷菌、1株肺炎链球菌。结论 16S rRNA宽范围PCR与培养技术比较起来,敏感性高,特异性强,有望成为临床无菌体液病原体感染快速筛查的方法。
- 汪峰刘彩林廖亚龙汪月孙自镛
- 关键词：RRNA体液
