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人髓样细胞触发受体-1原核表达载体的构建和表达及多克隆抗体的制备被引量：1: 2011年; 目的构建人髓样细胞触发受体-1（TREM-1）原核表达载体使其表达并制备多克隆抗体。方法采用特异性引物扩增人TREM-1胞外段cDNA，经酶切、连接、构建到原核表达载体pET28a（＋），将构建的重组表达质粒转化入E．coliB121（DE3）菌株，采用IPTG诱导表达、Ni．NTA柱亲和层析纯化目的蛋白、SDS—PAGE分析蛋白纯度，将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体，并对其进行纯化及鉴定。结果序列测定证实构建的重组表达载体pET28a（＋）-TREM-1含有人TREM-1编码序列，其序列分析与Genbank中公布序列对比一致，质粒在E．coli中诱导表达相对分子质量（Mr）为21．80kDa的目的蛋白，SDS—PAGE分析表明纯化后的目的蛋白达到电泳纯，双向琼脂扩散法检测抗体效价为1：16，ELISA法检测抗体效价为1：25600，Westernblot分析显示抗体能特异性结合人TREM一1重组蛋白。结论成功构建高表达重组人TREM-1蛋白的原核表达载体及制备高效价兔抗人TREM-1多克隆抗体。; 卢燕郑淑华刘伟李明意徐军发张良清; 关键词：原核表达载体脓毒症多克隆抗体

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广东省科技计划工业攻关项目(20088030301022)