安徽省自然科学基金(11040606Q25)
- 作品数：10 被引量：25H指数：4
- 相关作者：尹宗生张辉杜怡斌高维陆张硕更多>>
- 相关机构：安徽医科大学第一附属医院安徽医科大学第四附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- EPO/EPOR信号通路对成体脊髓神经干细胞分化作用的实验研究被引量：1
- 2016年
- 目的研究促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPOR)信号通路对大鼠成体脊髓神经干细胞(NSCs)分化的影响。方法取成年SD大鼠脊髓细胞,在培养基DMEM/F12中进行培养,取第3代NSCs作为研究对象:在实验组的培养液中再加入重组人促红细胞生成素(rhE PO),同时在培养液中使用等体积生理盐水作为对照组。采用免疫荧光染色方法和Western blot法,检测NSCs上EPOR蛋白表达情况;采用免疫荧光染色法检测NSCs的分化现象。结果免疫荧光染色结果显示实验组与对照组NSCs中均有EPOR蛋白表达,实验组较对照组增强;Western blot结果显示实验组EPOR蛋白表达水平较对照组增高,差异有统计学意义(P<0.01);免疫荧光染色法显示实验组NSCs分化为神经元的比例高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论rhEPO能激活EPO/EPOR信号通路,从而提高成体脊髓NSCs向神经元分化的能力。
- 王少滨张辉李小波刘杰杜怡斌尹宗生
- 关键词：神经干细胞分化促红细胞生成素受体
- 血管内皮祖细胞在脊髓损伤修复中的研究进展被引量：5
- 2013年
- 脊髓损伤（SCI）是骨科临床工作中一种常见损伤，死亡率和致残性高，其发病率呈逐年上升趋势，给社会和家庭造成沉重负担。可是SCI的治疗至今仍缺乏有效措施，损伤后神经功能的恢复是国内外医学界的一个难题。
- 杜公文杜怡斌张辉尹宗生
- 关键词：内皮祖细胞神经干细胞脊髓损伤
- Wnt3a基因沉默对内皮祖细胞增殖的影响被引量：1
- 2015年
- 目的探讨wnt3a基因沉默对内皮祖细胞(EPCs)增殖的影响。方法体外分离、培养及鉴定EPCs。将沉默型p EGFP-shRNA-wnt3a重组质粒转染EPCs;Western blot法分析wnt3a在EPCs中的表达变化;MTT分析wnt3a沉默对EPCs增殖的影响。结果鉴定培养的细胞为EPCs;Western blot法结果提示p EGFP-shRNA-wnt3a转染EPCs后明显抑制了wnt3a蛋白的表达。MTT提示沉默型pEGFP-shRNAwnt3a转染组吸光度值明显低于空白对照组。结论成功分离、培养出EPCs,wnt3a有效沉默明显抑制EPCs的增殖,为进一步的实验提供了基础。
- 余涛杜怡斌杜公文张辉张硕方家刘高维陆尹宗生
- 关键词：内皮祖细胞WNT3A基因沉默基因转染细胞增殖
- 脊髓损伤后反应性星形胶质细胞的分离培养及多能性鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的探讨脊髓损伤(SCI)后反应性星形胶质细胞(RAS)的多能性,为其对SCI的临床治疗提供理论依据。方法成年大鼠SCI后,分离培养脊髓内RAS;对分离培养的细胞以及诱导分化后细胞行细胞免疫荧光鉴定;在培养RAS的培养基中添加5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),观察分离培养的细胞的增殖情况。结果分离培养的细胞可同时表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和巢蛋白(nestin),诱导分化细胞可表达微球相关蛋白2(MAP-2)、受体相互作用蛋白(RIP)和GFAP,培养基中添加BrdU培养一段时间后细胞球可表达BrdU。结论体内分离培养的成体大鼠SCI后的RAS具有多能性及自我更新潜能,可能作为内源性神经干细胞修复损伤脊髓。
- 沈政尹宗生高维陆张辉
- 关键词：脊髓损伤反应性星形胶质细胞内源性神经干细胞巢蛋白
- 大鼠外周血内皮祖细胞分离培养与鉴定被引量：1
- 2017年
- 目的获得大鼠外周血内皮祖细胞(EPCs)并进行鉴定。方法首先采用密度梯度离心法获得大鼠外周血单个核细胞,然后用EGM-2完全培养基体外培养条件下诱导单个核细胞分化为靶标细胞,最后分别用EPCs特异性标记物CD133和Flk-1检测及内吞乙酰低密度脂蛋白(ac-LDL)和荆豆凝集素-1(UEA-1)的能力,识别和鉴定靶标细胞。结果靶标细胞培养至第6天呈纺锤形,梭状排列,具有与典型EPCs形态一致的生物学特征,CD133及FLK-1双抗体荧光检测结果阳性,内吞ac-LDL及UEA-1的能力实验结果阳性,证明该纺锤形细胞为EPCs。结论通过密度梯度离心法及多细胞因子诱导大鼠外周血单个核细胞获得EPCs的方法可行,该方法可为EPCs的基础研究及临床应用提供理论与实验方法学基础。
- 杜公文高维陆张辉尹宗生
- 关键词：内皮祖细胞细胞分离细胞培养细胞鉴定
- EPO治疗对大鼠脊髓损伤后脊髓运动功能恢复的实验研究被引量：4
- 2016年
- 目的探讨人重组促红细胞生成素（rh-EPO）在大鼠脊髓损伤（SCI）后运动功能恢复中的作用。方法选取30只200~230 g成年雄性SD大鼠,随机分为假手术（Sham）组、脊髓损伤（SCI）组和EPO组,每组10只。Sham组仅行椎板切除术,不伤及脊髓。SCI组和EPO组行椎板切除及脊髓打击术。术后EPO组腹腔注射rh-EPO,SCI组和Sham组采用相同剂量的生理盐水。应用BBB评分评估大鼠术后第1、3、7、14天的后肢运动功能恢复情况。HE染色观察术后第14天脊髓形态学变化;免疫荧光测定新生神经元的增殖情况。结果术后第1、3天SCI组和EPO组之间BBB评分差异无统计学意义;术后第7、14天EPO组BBB评分明显高于SCI组（P〈0.05,P〈0.01）。SCI组可见大量胶质瘢痕、空洞形成和炎性细胞浸润;EPO组上述改变较SCI组减轻。Sham组、SCI组和EPO组新增殖神经元数目逐渐增多,各组间比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论大剂量rhEPO的治疗可减轻脊髓内炎症反应、刺激脊髓新生神经元的增殖和促进大鼠SCI后后肢运动功能的恢复。
- 王康康张辉方晓王少滨李小波刘杰尹宗生
- 关键词：脊髓损伤促红细胞生成素神经元
- 骨髓源性EPCs对脊髓源性NSCs增殖分化的影响被引量：4
- 2015年
- 目的观察骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)对脊髓源性神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响。方法通过密度梯度离心法获取骨髓血单个核细胞,以EBM-2进行诱导培养EPCs并进行免疫细胞化学染色鉴定,成熟的方法获取及鉴定SD大鼠的脊髓NSCs,1×105/ml第3代NSCs置于Transwell小室下层与1×105/ml上层原代EPCs进行体外1∶1共培养,以单纯第3代的NSCs培养为对照,培养7 d,双盲法分别计数各组在相差显微镜下神经球形成的数目,并用目镜测微尺测量神经球的平均直径,通过5%血清诱导培养NSCs7 d后,行β-微管蛋白-Ⅲ免疫荧光染色,Hoechst细胞核染色后在显微镜下计算神经元/细胞总数得出百分率。结果骨髓源性EPCs与脊髓源性NSCs共培养组神经球平均数目为(22.27±3.85)个,平均直径为(61.70±7.21)μm,诱导培养后分化为神经元的平均百分率为(46.10±3.70)%,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论骨髓源性EPCs能促进脊髓源性NSCs增殖及其向神经元分化。
- 张硕杜怡斌杜公文张辉余涛方家刘高维陆尹宗生
- 关键词：NSCSEPCS增殖分化微环境
- 共培养下内皮祖细胞对神经干细胞增殖及分化的影响被引量：6
- 2013年
- 目的探讨体外共培养下血管内皮祖细胞(EPCs)对神经干细胞(NSCs)增殖及分化的影响。方法运用成熟的分离、培养及鉴定方法获得SD大鼠的脊髓NSCs及外周血EPCs,再将二者置于Transwell小室进行体外共培养,以单纯的NSCs培养为对照,于第4天对神经球的数目、直径进行测算,测算后将载有EPCs的Transwell小室上层移去,对下层的NSCs进行诱导分化培养,第7天行微管相关蛋白2(MAP-2)免疫荧光染色,荧光显微镜下观察抗原表达并计算NSCs分化神经元百分率,最后将实验组与对照组数据进行统计学分析。结果共培养的NSCs球数目实验组明显多于对照组,其平均数目为(10.3±2.2)个,直径也呈现出大于对照组的趋势,平均直径可达(48.0±5.3)μm;共培养的NSCs神经元分化率明显高于对照组,平均百分率为(32.2±1.9)%。结论 EPCs在体外能促进NSCs增殖并诱导其向神经元分化。
- 杜公文杜怡斌张辉尹宗生
- 关键词：内皮祖细胞神经干细胞共培养脊髓损伤
- 胸腺素β4对大鼠骨髓源性内皮祖细胞功能的影响
- 2016年
- 目的观察梯度浓度胸腺素β4(Tβ4)对大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)生物学行为的影响。方法设置梯度浓度的Tβ4分别处理EPCs,同时在统一浓度下干预不同时间后进行细胞功能学实验。采用CCK-8细胞增殖试剂盒检测靶细胞的增殖能力,Transwell细胞迁移检测靶细胞迁移能力以及黏附能力。结果 Tβ4能够显著增强体外培养EPCs的增殖、迁移和黏附能力,并且呈现一定的量效关系,与对照组相比,在1 000 ng/ml时其增殖、迁移及黏附能力均显著增强(P<0.05)。在1 000 ng/ml时随着干预时间的推移,各时间点的EPCs增殖能力均显著增强且优于对照组(P<0.05);与对照组相比,黏附能力在48 h达到最大效应(P<0.05)。结论 Tβ4可增强体外培养的EPCs的功能,并且呈现一定的量效关系,1 000 ng/ml Tβ4预处理48 h可获得最优效应。
- 刘杰杜怡斌张辉李小波王少斌尹宗生
- 关键词：内皮祖细胞胸腺素Β4增殖迁移
- 组织块法体外分离培养大鼠脊髓成体神经干细胞被引量：1
- 2014年
- 取8月龄SD大鼠脊髓,分组织块法和细胞悬液法培养,测量神经干细胞球出现的时间、数量、直径。MTT法鉴定增殖能力及免疫荧光染色鉴定分化神经元和星型胶质细胞的比例。组织块组在神经干细胞球出现的时间、数量及增殖能力上与细胞悬液组比较差异有统计学意义,两组在分化细胞比例上差异无统计学意义。
- 张辉张硕江正余涛钟林尹宗生
- 关键词：组织块培养成体神经干细胞脊髓
