国家自然科学基金(30400406)
- 作品数：8 被引量：27H指数：4
- 相关作者：邹全明石云吴超周维英张卫军更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 表位疫苗的设计与优化被引量：3
- 2007年
- 表位疫苗是近年发展起来的一种独特的疫苗设计思路,其安全性好,诱发的免疫应答针对性强。要发挥表位疫苗中各表位的功能,合理的设计至关重要。本文就表位疫苗的设计及优化作一简要综述。
- 石云吴超邹全明
- 关键词：表位疫苗
- 幽门螺杆菌尿素酶B亚单位Th表位的免疫学特性研究
- 2007年
- 采用MHC限制性分析、ELISA方法、淋巴细胞增殖实验等方法研究幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)的H- 2~d限制性Th表位U_(546-561)、U_(229-244)、U_(237-251)的免疫学特性。发现抗I-E^d抗体能够抑制U_(546-561)对CD4^+T淋巴细胞的刺激,抗I-A^d抗体能够抑制U_(229-244)、U_(237-251)对CD4^+T淋巴细胞的刺激作用。U_(229-244)、U_(229-244)能刺激CD4^+T淋巴细胞分泌IL-4和IL-10,U_(237-251)刺激CD4^+T淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2,且U_(546-561)、U_(229-244)、U_(237-251)三个表位肽免疫BALB/c小鼠能够引起针对各自免疫多肽和rUreB的CD4^+T细胞应答。结果表明U_(546-561)为I-E^d限制性Th2表位,U_(229-244)为I-A^d限制性Th2表位、U_(237-251)为I-A^d限制性Th1表位。三个表位之间具有协同刺激效应,可以用于Hp表位疫苗的研究。
- 石云吴超周维英邹全明
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位TH表位
- 幽门螺杆菌表位疫苗的设计、构建、表达及其免疫原性研究被引量：7
- 2006年
- 目的设计幽门螺杆菌(Hp)的表位疫苗并对其免疫原性进行研究。方法将Hp的尿素酶B亚单位的三个Th表位及一个B细胞表位串联,表位之间用两个赖氨酸(KK)间隔,合成全基因,克隆到pET22b载体上,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;表达的重组蛋白经鉴定纯化后皮下免疫Balbc小鼠,检测细胞免疫应答及体液免疫应答。结果克隆表达的重组表位疫苗蛋白纯化后纯度达到95%,经N端测序证实为设计的表位疫苗蛋白,Th表位多肽(U546-561、U229-244、U237-251)、表位疫苗蛋白及rUreB均能够刺激表位疫苗致敏的小鼠淋巴细胞增殖(SI>2),并且此疫苗能够刺激机体产生特异性抗体。结论本研究中表位疫苗的设计方法能够使疫苗中包含的四个表位均发挥功能,并且具有较强的免疫原性,为研究Hp预防性和治疗性疫苗提供实验基础。
- 毛旭虎石云吴超张卫军邹全明
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位表位疫苗
- 幽门螺杆菌尿素酶B亚单位H-2~d限制性T_H表位的预测与鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的鉴定幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)的H-2d限制性TH表位,为研究Hp表位疫苗奠定实验基础。方法用RANKPEP软件预测尿素酶B亚单位可能的H-2d限制性TH细胞表位,合成表位肽,采用淋巴细胞增殖试验、流式细胞分析及CD4+T淋巴细胞增殖试验进行表位鉴定。结果经软件预测获得7条可能的H-2d限制性TH细胞表位,多肽合成经分析各表位肽纯度均>85％,其中3条表位肽U546-561、U229-244、U237-251能够刺激rUreB致敏的BALB／c(H-2d)小鼠的CD4+ T淋巴细胞增殖(SI>2)。结论U546-561、U229-244、U237-251是UreB的H-2d限制性TH细胞表位,可进一步用于Hp表位疫苗的研究。
- 石云吴超邹全明
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位TH表位
- 幽门螺杆菌双亚单位表位疫苗的构建及免疫原性研究被引量：5
- 2008年
- 目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶B亚单位(UreB)双亚基多表位疫苗,并对其免疫原性进行研究。方法设计引物采用PCR法将黏附素(HpaA)的一个B细胞表位与尿素酶B亚单位的三个TH表位及一个B细胞表位串联起来(HUepi),表位之间用两个赖氨酸(KK)间隔,T-A克隆后构建融合基因表达质粒pET-22b(+)-HUepi,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,重组蛋白采用阳离子和疏水层析进行纯化,经鉴定后皮下免疫BALB/c小鼠,检测细胞免疫应答及体液免疫应答。结果PCR法扩增出了约233bp的目的片段;原核表达质粒pET-22b(+)-HUepi经酶切及测序鉴定,目的基因序列与设计序列一致;重组蛋白HUepi表达率约20.0%,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约8.38×103Dr,破菌后电泳证实目的蛋白以可溶形式表达,纯化后蛋白纯度大于97.6%,经N端测序证实为设计的表位疫苗蛋白,TH表位多肽、表位疫苗蛋白及rUreB均能够刺激表位疫苗致敏的小鼠淋巴细胞增殖(SI>2),并且此疫苗能够刺激机体产生特异性抗体。结论Hp HpaA、UreB双亚基表位疫苗HUepi经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫原性。为新一代Hp疫苗的研制奠定实验基础。
- 周维英吴超石云邹全明
- 关键词：表位疫苗
- 幽门螺杆菌双亚单位表位融合蛋白的构建、表达及鉴定被引量：5
- 2007年
- 目的构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶B亚单位(UreB)表位串联体(HUepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合蛋白(HUepi-LTB),并对其进行纯化和鉴定。方法采用PCR技术分别扩增HpaA-UreB表位多肽编码基因HUepi和LTB的编码基因LtB,重叠延伸PCR将2段基因拼接起来,T-A克隆后构建融合基因表达质粒pET-22b(+)-HUepi-LtB,经酶切鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,采用阳离子和阴离子交换层析进行纯化,PAGE检测、N端测序和westernblotting、ELISA检测、GM1活性检测。结果成功构建表位串联体(HUepi)与LTB融合蛋白的高效表达质粒pET-22b(+)-HUepi-LtB,重组工程菌pET-22b(+)-HUepi-LtB/BL21经IPTG诱导目的蛋白表达率约28%,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约20.7×103,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度达97%,免疫学鉴定该融合蛋白与兔抗LTB抗血清可以发生特异性的结合。结论HpHpaA-UreB表位串联体(HUepi)与LTB融合蛋白(HUepi-LTB)经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫活性。为新一代Hp疫苗的研制奠定基础。
- 周维英吴超石云张卫军邹全明
- 关键词：幽门螺杆菌黏附素尿素酶B亚单位
- 小鼠骨髓树突状细胞的体外诱导培养及生物学特性分析被引量：4
- 2006年
- 目的探讨从小鼠骨髓中体外诱导培养树突状细胞(DC)的可行性并进行生物学特性分析与鉴定。方法用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)体外诱导小鼠骨髓细胞分化为树突状细胞,倒置显微镜动态观察形态学变化,扫描电镜观察其表面形态特征,流式细胞术分析细胞表面分子,同时进行抗原吞噬功能和刺激初始型T淋巴细胞增殖能力的检测。结果经体外诱导培养可获得大量未成熟和成熟DC,出现典型树突状形态。未成熟DC的细胞表型为CD11chigh、MHCⅡlow、CD86low,具有极强的抗原吞噬能力;未成熟DC经LPS刺激培养后可转变为成熟DC,细胞表型为CD11chigh、MHCⅡhigh、CD86high,可显著刺激同种异体混合淋巴细胞增殖。结论体外诱导培养可获得小鼠骨髓来源的未成熟和成熟DC。
- 吴超石云王晓勤邹全明
- 关键词：树突细胞粒细胞巨噬细胞集落刺激因子细胞培养
- 幽门螺杆菌尿素酶表位疫苗的构建、表达及鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)表位串联体(Uepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合蛋白表位疫苗,并对其生物学及免疫学特性进行鉴定。方法设计引物,采用PCR法分别扩增UreB表位多肽编码基因Uepi和LTB编码基因,重叠延伸PCR法将两段基因拼接,T-A克隆后,构建融合基因表达质粒pET-22b(+)-Uepi-LTB,经酶切鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行鉴定。结果PCR扩增出206bp和336bp的目的片段,重叠延伸PCR扩增出524bp的融合目的基因片段。原核表达质粒pET-22b(+)-Uepi-LTB经酶切及测序鉴定,与设计序列一致。重组工程菌pET-22b(+)-Uepi-LTB/BL21经IPTG诱导,目的蛋白表达率约25%,SDS-PAGE分析相对分子质量约20000,目的蛋白以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度达96%,Westernblot鉴定该融合蛋白与兔抗LTB多抗血清可发生特异性结合。结论HpUreB表位串联体与LTB融合蛋白的表位疫苗经基因克隆,可获得高效表达,并显示出较好的免疫活性,为新一代Hp疫苗的研制奠定基础。
- 周维英吴超石云邹全明
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位表位疫苗
