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国家自然科学基金(31110103904)

作品数:6 被引量:89H指数:4
相关作者:张博黄鹏沈延朱作言刘新星更多>>
相关机构:北京大学美国加州大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金全球变化研究国家重大科学研究计划国家重点基础研究发展计划更多>>
相关领域:生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 6篇期刊文章
  • 1篇会议论文

领域

  • 5篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 4篇斑马
  • 4篇斑马鱼
  • 3篇TALEN
  • 2篇转录
  • 2篇转录激活
  • 2篇转录激活因子
  • 2篇效应物
  • 2篇基因打靶
  • 2篇核酸酶
  • 2篇打靶
  • 1篇大众化
  • 1篇点突变
  • 1篇定点突变
  • 1篇心脏
  • 1篇心脏损伤
  • 1篇手术
  • 1篇手术方法
  • 1篇手术切除
  • 1篇体外
  • 1篇体外授精

机构

  • 6篇北京大学
  • 1篇美国加州大学

作者

  • 6篇张博
  • 2篇张雨田
  • 2篇朱作言
  • 2篇林硕
  • 2篇沈延
  • 2篇肖安
  • 2篇刘新星
  • 2篇黄鹏
  • 1篇王展翔
  • 1篇杨红波
  • 1篇刘达
  • 1篇李文渊
  • 1篇梁巍
  • 1篇郑乃中
  • 1篇王唯晔

传媒

  • 5篇遗传
  • 1篇Journa...
  • 1篇中国遗传学会...

年份

  • 1篇2014
  • 4篇2013
  • 2篇2012
6 条 记 录,以下是 1-7
排序方式:
大众化的基因组定点修饰技术--从TALEN到CRISPR/Cas系统
近年来,以锌指核酸酶(ZFN)和TALEN为代表的人工构建的序列特异性核酸内切酶为基因组定点修饰技术带来了革命性的飞跃,使原来只能在小鼠、果蝇等极少数物种中实现的基因打靶迅速扩展到多种实验材料.本实验室在斑马鱼中建立了一...
刘达王展翔肖安张雨田李文渊祖尧姚少华林硕张博
关键词:斑马鱼基因打靶
Efficient Gene Targeting in Zebrafish Mediated by a Zebrafish-Codon-Optimized Cas9 and Evaluation of Off-Targeting Effect被引量:18
2014年
Targeted genome modifications with the Cas9/gRNA system derived from the clustered regularly interspaced short palin- dromic repeat/CRISPR-associated (CRISPR/Cas) system have been successfully used in cultured human cells as well as in most model organisms, including zebrafish (Danio rerio), mouse, and fruit fly (Chang et al., 2013; Cong et al., 2013; Gratz et al., 2013; Hwang et al., 2013; Jao et al., 2013; Shen et al., 2013; Wei et al., 2013). Its application in zebrafish is particu- larly attractive due to the ease of handling this organism and the simple application of this method by direct injection of Cas9/ gRNA. However, the information about its specificity in this organism is very limited and needs further evaluation. In addition, it is conceivable that a Cas9 mRNA optimized for zebrafish codon preference could enhance its activity.
Da LiuZhanxiang WangAn XiaoYutian ZhangWenyuan LiYao ZuShaohua YaoShuo LinBo Zhang
应用双荧光报告系统检测斑马鱼microRNA的动态表达被引量:2
2012年
microRNA(miRNA)是一类细胞内源表达的小分子非编码RNA,主要通过降解靶基因的mRNA或者抑制靶基因的翻译,在动植物的发育以及其他重要的生理过程中起调控作用。miRNA的功能跟它的表达位置与时间密切相关,但是目前尚缺乏一个能够在活体与个体水平稳定、持续地实时观察miRNA动态表达的方法。文章以斑马鱼为模式,建立了一个双荧光报告系统(我们称之为miRNA Tracer),用于在斑马鱼整体胚胎中追踪特定miRNA的表达谱及动态变化过程。该系统以Tol2转座子为基础,采用来自斑马鱼hsp70基因的热激启动子分别驱动eGFP和mRFP1荧光报告基因,同时在其中一个报告基因的3′-UTR区连接待测miRNA的互补序列,构成Tracer质粒。该互补序列与斑马鱼胚胎中相应的内源miRNA结合后能够使对应报告基因的荧光信号强度减弱,通过比较两个报告基因在表达谱上的差异辨别miRNA的表达区域,检测斑马鱼胚胎中miRNA起作用的位置和时间。文章选择在肌肉系统特异表达的miR-206以及在神经系统特异表达的miR-219,分别在显微注射瞬时表达和转基因稳定整合等两个层次上验证了上述Tracer系统。结果表明,所用的方法能够如实地在单细胞水平和整体水平检测到目标miRNA的时空表达动态变化。miRNA Tracer系统为在斑马鱼发育过程中对miRNA进行活体、实时的时空定位提供了一个独特而有效的方法,也为对miRNA进行功能与作用机制等更深入的研究奠定了基础。
杨红波梁巍刘新星朱作言林硕张博
关键词:斑马鱼MIRNA
斑马鱼精子冻存与复苏实验方法与流程被引量:6
2012年
斑马鱼是研究胚胎发育及其遗传机制的重要模式脊椎动物。目前人们已经积累了大量的突变体和转基因鱼系,如何安全、妥善地长期保存这些品系是每一个研究斑马鱼的实验室都会面临的问题。精子冻存与复苏技术是目前最为简单有效的一种长期保存斑马鱼遗传品系的方法。应用这一技术不仅可以节省大量的鱼房空间与人力、物力,使鱼系的使用与保存更加灵活和持久,更重要的是能够防止珍贵鱼系的意外丢失,为鱼系保种提供额外的保障。这类方法一般是通过体外挤出精子或研磨精巢获取新鲜的精子,用适量的冻存液混匀后,分装保存在液氮罐中。需要时可以随时通过体外授精的方法使精子复苏。经过30年的发展,随着冷冻保护剂的不断改良和冻存与复苏条件的不断优化,斑马鱼精子冻存与复苏技术已逐渐成熟。文章简单回顾了斑马鱼精子冻存与复苏技术的历史与发展,并重点介绍本实验室自2005年以来常规使用的斑马鱼精子冻存与复苏的方法及具体流程。
郑乃中张博
关键词:斑马鱼体外授精
类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)介导的基因组定点修饰技术被引量:53
2013年
人工构建的序列特异性核酸内切酶能够识别并切割特定的DNA靶序列,造成双链断裂,从而引起基因组结构的定点改变。人工核酸内切酶技术使得研究人员有可能对任意物种的基因组进行定点修饰,开启了反向遗传学研究的新天地。类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)自2010年底开始成功应用于基因打靶,很快成为一种比锌指核酸酶(Zinc-finger nuclease,ZFN)更容易设计、特异性更高和毒性更低的人工核酸内切酶。文章综述了TALEN技术的研究进展及应用前景,重点介绍TALEN的结构、作用机制与构建方法和利用TALEN进行基因组定点修饰的策略,以及目前利用这一技术已成功实现突变的物种及内源基因,特别是在斑马鱼中的应用,为开展这一领域的研究工作提供参考。
沈延肖安黄鹏王唯晔朱作言张博
构建斑马鱼心脏损伤-再生模型的手术方法被引量:1
2013年
斑马鱼心脏再生是近年来心血管再生医学研究的新热点之一,也是以斑马鱼为模式进行脊椎动物遗传发育研究的一个新的重要方向。通过了解斑马鱼成体心脏再生的过程和研究其分子和细胞机制有可能为诱导哺乳动物成体心脏再生、治疗心肌梗塞等人类心脏疾病提供理论依据。文章主要介绍通过简单的手术切除成体斑马鱼约20%心室造成成体心脏损伤、诱导心脏再生的操作方法与经验。其基本流程主要包括麻醉成鱼、在体视镜下用尖镊撕开斑马鱼心脏腹面的皮肤和心包膜以暴露心脏、用剪刀切除心尖区域的部分心室。这种方法的手术成功率可达90%以上,操作简便且重复性好,是目前研究斑马鱼成体心脏损伤-再生的最常用的方法。
刘新星张雨田张博
关键词:斑马鱼心脏手术切除
TALEN构建与斑马鱼基因组定点突变的实验方法与流程被引量:22
2013年
类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)是最近发展起来的一类新型的人工核酸内切酶,它由特异性的TALE DNA结合结构域和非特异性的FokⅠ核酸内切酶切割结构域组成。TALEN能够根据用户需要切割特定的核苷酸靶序列,造成DNA双链断裂,从而诱导该靶序列产生indel突变,目前已成功地应用于多个物种或体外培养细胞的基因组定点突变。文章介绍TALEN靶点的选择与确认,采用"单元组装法"构建人工TALEN的原理与步骤,以及通过显微注射TALEN mRNA诱导并筛选斑马鱼突变体的实验流程与经验。这些方法理论上也适用于对其他物种进行基因打靶。
沈延黄鹏张博
关键词:基因打靶
共1页<1>
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