国家自然科学基金(30970653)
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 相关作者：路静李剑利施前更多>>
- 相关机构：复旦大学陕西省医疗器械质量监督检验院西北大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育发展基金会“曙光计划”项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- C/EBPα和C/EBPβ抑制PHLPP的表达影响细胞增殖被引量：2
- 2018年
- 目的分析影响抑癌基因磷酸酶PHLPP表达的因素,进一步研究肿瘤发生、发展的机制。方法分析比对多种种属的PHLPP基因序列,根据其启动子中均有碱性亮氨酸拉链(basic leucine zipper,bZIP)转录因子C/EBPα、C/EBPβ的结合位点,也有SP1的结合位点这一特点,通过双荧光素酶报告法和染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP),过表达或抑制C/EBPα、C/EBPβ的表达,再通过PCR、RT-PCR、Western blot、细胞生长实验和肿瘤组织切片免疫组化进行分析。结果 C/EBPα和C/EBPβ与PHLPP的启动子相结合并抑制其表达,与PHLPP的表达呈负相关,SP1不影响PHLPP的表达。结论 C/EBPα和C/EBPβ通过作用于PHLPP影响细胞增殖。
- 王亚棋黎隽刘立科刘东鸣韩溟李剑利
- 关键词：细胞增殖
- 生物素标记法分析MCF-10A细胞质膜蛋白质被引量：2
- 2010年
- 目的优化细胞膜蛋白分离纯化技术,以期实现快速、高效分析细胞膜蛋白质。方法本文以乳腺细胞系MCF-10A为模型,用sulfo-NHS-LC-biotin标记完整的活细胞,使细胞表面蛋白生物素化,细胞裂解后利用链亲和素对膜蛋白进行分离富集,再洗脱膜蛋白,达到分离纯化的目的。利用液相层析偶合串联质谱技术(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)鉴定提取得到MCF-10A膜蛋白。结果 sulfo-NHS-LC-biotin浓度为0.2 mg/mL时得到的标记纯化膜蛋白最多,可作为标记最适浓度。利用这种方法鉴定出256个蛋白质,生物信息学分析表明其中膜蛋白占63%,比传统膜蛋白分离纯化方法得到的结果好。结论这种方法省去常规分离膜蛋白时所需的超速离心,具有操作简单、可行性高、平行性高的特点,有望用于规模化肿瘤膜蛋白的差异比较,为肿瘤早期诊断及治疗提供新的靶标。
- 路静施前
- 关键词：蛋白质组生物素化
