国家自然科学基金(30200137)
- 作品数：32 被引量：126H指数：7
- 相关作者：窦忠英华进联杨学义史明艳徐小明更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学洛阳师范学院中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划教育部科学技术研究重大项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 人类胚胎生殖细胞体外分化为心肌细胞的研究被引量：7
- 2006年
- 胚胎生殖（EG）细胞是来源于胚胎原始生殖细胞（PGCs）的多潜能干细胞。采用无饲养层细胞、无细胞因子等的基础培养液（DMEM＋20％NBS＋0．1mM 2Me）培养EG细胞，部分在基础培养液添加10μmol／LRA＋0．75％DMSO或10μmol／L 5-氮胞苷（5-AZA）诱导人类EG细胞向心肌细胞分化，以检测其是否具有向心肌细胞自发分化的能力。9例（8．49％，9／106）胎儿EG细胞在体外分化得到20个节律性心脏跳动样细胞团，其搏动节律为20～120次／min，体外维持节律性搏动最短2d，最长至15d，呈PAS，Myoglobin，α-actin阳性；对K^＋、Ca^＋、肾上腺素等具有与在体心脏相似的反应性；透射电镜观察具有心肌细胞样结构。添加DMSO和RA或5-AZA诱导未得到跳动样心肌细胞，但可提高心肌α-actin免疫组织化学染色阳性率；表明人类胚胎生殖细胞具有向心肌细胞分化的潜能。
- 华进联徐小明窦忠英
- 关键词：原始生殖细胞胚胎生殖细胞心肌细胞
- 组织块法分离山羊表皮干细胞研究
- 2010年
- 采用组织块法从山羊耳部皮肤基底层分离表皮干细胞,并通过形态学观察、免疫组化染色以及克隆形成率等方法检测山羊表皮干细胞在DMEM/F12和F12两种不同培养体系中的体外生长特性。结果表明,DMEM/F12是一种适合表皮干细胞体外增殖培养的培养基,在此培养体系中细胞可传代至11代。
- 史明艳徐照学杨学义窦忠英
- 关键词：组织块山羊表皮干细胞克隆形成率
- 不同化学激活剂对小鼠卵母细胞的激活效果被引量：6
- 2006年
- 为探讨不同激活剂的卵母细胞孤雌激活效果及激活胚体外发育情况,用乙醇、CaA23187、SrCl2、6-DMAP及CB分别对小鼠卵母细胞进行了激活处理.结果显示,70 mL/L乙醇刺激小鼠卵母细胞时,以激活5～7 min的激活效果及孤雌胚发育较好,桑囊胚发育率可达29.11%;用SrCl2激活小鼠卵母细胞时,6～10 mmol/L为最佳处理浓度,3～6 h为最佳激活时间,桑囊胚发育率可达16.67%;以70 mL/L乙醇激活5 min,再用2 mmol/L 6-DMAP＋5 μg/mL CB激活3 h效果最佳,桑囊胚发育率高达35.77%.研究证实,小鼠卵母细胞经乙醇、6-DMAP和CB等复合激活后能较好地发育.
- 何志全窦忠英
- 关键词：小鼠卵母细胞孤雌生殖
- 猪卵母细胞体外成熟及电激活后发育能力的研究被引量：7
- 2006年
- 探讨了不同的成熟培养液及外源激素对猪卵母细胞体外成熟培养及电激活后孤雌胚胎发育能力的影响．结果表明:(1)改良M199(mM199)组猪卵母细胞成熟率显著高于M199组,且这两组又较NCSU-23组能极显著提高卵母细胞的成熟率．(2)孕马血清(PMSG)+人绒毛膜促性腺激素(hCG)+促卵泡素(FSH)组卵母细胞成熟率略高于FSH+促黄体素(LH)组,两者卵母细胞成熟率极显著高于尿促性腺激素(hMG)组．(3)含胎牛血清(FBS),猪卵泡液(PFF),表皮生长因子 (EGF)的培养液较对照组在卵母细胞成熟率上无显著差异,但均能显著提高电激活后的卵裂率．添加EGF组桑囊率明显高于不添加组．但分别添加FBS和PFF组较对照组在桑囊率上均无显著差异．(4)卵丘细胞扩散与卵母细胞第一极体排出之间无直接相关性,但扩散程度好能提高电激活后的卵裂率．
- 徐小明杨春荣胡军和窦忠英
- 关键词：卵母细胞体外成熟电激活
- 胚胎干细胞生物学特性被引量：2
- 2004年
- 来源于早期胚胎或原始生殖细胞的胚胎干细胞 (ES细胞 )可在体外抑制分化培养条件下无限扩增 ,并保持未分化状态和多能性。ES细胞研究是国际生物科学的热点课题之一。多年来 ,众多学者对ES细胞形态结构、核型、分化潜能、碱性磷酸酶、胚胎阶段特异性细胞表面抗原的表达以及一些分子标记等生物学特性作了大量研究报道 。
- 杨玉艾华进联马勇江窦忠英
- 关键词：胚胎干细胞生物学分子机制ES细胞
- 山羊毛囊干细胞的分离及体外培养被引量：3
- 2009年
- 试验采用2．4U／mL Dispase酶消化和机械切割法分离毛囊隆突部，经胰酶（0．5mg／mL胰酶＋0．2mg／mL EDTA）消化从山羊耳部皮肤分离得到的毛囊干细胞，然后进行形态学观察、细胞生长曲线测定、克隆形成率及免疫组化染色检测，并对毛囊干细胞的基础培养基进行了筛选。结果表明：DMEM／F12是一种适合毛囊干细胞体外增殖培养的培养基；在以DMEM／F12为基础培养液的培养体系中细胞可传代至19代。
- 史明艳刘霞杨学义窦忠英
- 关键词：毛囊干细胞克隆形成率体外培养
- 表皮干细胞的分离、纯化培养及鉴定初报被引量：7
- 2005年
- 采用酶消化法和组织块法对小鼠、奶山羊、奶牛和家猪的表皮干细胞进行了分离、培养。结果表明:酶消化法适于小鼠表皮干细胞的分离,所获得的小鼠表皮干细胞在维持了两代之后自发分化为神经样细胞;奶山羊和奶牛不论用酶消化法还是组织块法都可以获得大量活力相对较好、表皮干细胞特性维持较久的细胞,奶山羊表皮细胞采用型胶原分选,用有血清培养液培养,经免疫细胞化学鉴定为表皮干细胞,可持续传至少9代,随着代数增高,细胞活力减弱。
- 韩雅婷杨学义徐小明史明艳窦忠英
- 关键词：表皮干细胞
- 人类胚胎干细胞研究述评被引量：2
- 2007年
- 对人类胚胎干细胞(hESCs)的来源、培养方法、建系条件、生物学特性和鉴定方法、遗传操作及其需解决的问题进行了讨论。提出目前研究的重点在于揭示维持ES细胞多能性和自我更新的机理,进一步优化人类和其他哺乳动物类ES细胞的分离、培养、建系方法,探讨其定向分化机理,建立胚胎干细胞(ESCs)和胚胎生殖细胞(EGCs)的大规模快速扩增技术;完善hESCs向重要功能细胞(生殖细胞)分化的体系;单细胞比对分析ESCs、畸胎瘤细胞(ECSs)、EGCs、类胚体(EBs)、各级生殖细胞和成体细胞的基因及蛋白表达图谱,以探求生殖细胞、成体细胞、ESCs、ECSs、EGCs的本质区别,积极开展将ES细胞用于治疗人类疾病模型的研究。
- 华进联杨炜峰窦忠英
- 关键词：胚胎干细胞分化
- 组织块法分离山羊皮肤干细胞研究
- 2006年
- 采用组织块法从表皮和真皮中分离山羊皮肤干细胞,通过形态学观察、免疫组化染色以及克隆形成率等方法检测两种来源的皮肤干细胞体外生长特性。结果表明,从表皮和真皮中均能分离得到皮肤干细胞;表皮来源的皮肤干细胞体外可传11代,真皮来源的皮肤干细胞体外可传17代;表皮来源的皮肤干细胞第1代K 19和in tegrin-β1阳性细胞率及克隆形成率分别为(34.0±1.62)%,(37.5±2.12)%,(19.4±1.77)%,而真皮来源的皮肤干细胞分别为(29.2±3.12)%,(33.0±1.12)%,(16.6±2.60)%;表皮来源的皮肤干细胞第3代K 19和in te-grin-β1阳性细胞率及克隆形成率分别为(46.4±1.82)%,(55.3±1.98)%,(25.3±1.08)%,真皮来源的皮肤干细胞分别为(53.7±1.17)%,(63.0±1.12)%,(30.9±2.16)%;随着传代次数增加,真皮来源的干细胞的体外活力以及免疫组化染色阳性率、克隆形成率均极显著高于表皮来源的皮肤干细胞(P<0.01)。
- 史明艳杨学义赵清梅韩雅婷窦忠英
- 关键词：组织块山羊皮肤干细胞真皮克隆形成率
- 尿嘧啶、三价因子和ATP对牛卵母细胞体外成熟的影响被引量：10
- 2006年
- 研究了尿嘧啶、三价因子和三磷酸腺苷二钠盐（ATP）对牛卵母细胞体外成熟及后期发育的影响。结果表明，培养液中添加尿嘧啶和三价因子能够促进颗粒细胞的增殖，提高牛卵母细胞的成熟率、卵裂率及8～16细胞率；ATP对牛卵母细胞成熟率影响不大，但能提高孤雌激活胚胎发育能力。
- 王洪锋王晓磊于海生雷安民贾文文黄伟伟窦忠英
- 关键词：牛卵母细胞线粒体尿嘧啶ATP
