上海市自然科学基金(04BB23)
- 作品数：17 被引量：55H指数：6
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- 相关机构：复旦大学上海医学院上海交通大学医学院附属第三人民医院第二军医大学更多>>
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- 人脑源性神经营养因子基因转染神经干细胞治疗大鼠视神经损伤被引量：13
- 2009年
- 目的探讨转染人脑源性神经营养因子（brain—derived neurotrophic factor，hBDNF）-绿色荧光蛋白（GFP）基因神经干细胞体内移植后在视神经损伤大鼠视网膜内的存活、迁移和分化情况，以及其对视神经损伤后视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs）存活的影响。方法（1）取30只SD大鼠制作右眼视神经部分损伤模型，采用随机数字表法随机均分成两组，分别于玻璃体腔内移植GFP基因转染神经干细胞（GFP—NSCs）、hBDNF和GFP双基因转染神经干细胞（hBDNF—GFP—NSCs）。8周后处死大鼠，取右眼眼球做冰冻切片，然后分别用胸腺细胞表面糖蛋白（Thy1．1）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、β-微管蛋白（β-tubulin）、视紫红质（rhodopsin）抗体进行免疫标记，观察移植细胞的迁移分化情况。（2）取30只SD大鼠制作右眼视神经部分损伤模型，随机均分为三组：损伤组、GFP组、BDNF组。损伤组大鼠玻璃体腔内注射等渗盐水，而GFP组、BDNF组则分别于玻璃体腔内移植GFP—NSCs和hBDNF—GFP—NSCs，每只眼球玻璃体腔内移植5×10^4个细胞。8周后处死大鼠，取右侧眼球视网膜铺片，行Thy1．1免疫荧光染色后，荧光显微镜下观察计数RGCs细胞数量。结果（1）移植后，两组细胞均可在视网膜内存活、迁移，并产生细胞分化，两组细胞均可以分化成胶质细胞、神经元。移植hBDNF—GFP—NSCs组少量细胞分化为节细胞样细胞（Thy1．1^＋），而GFP—NSCs组未发现有分化为Thy1．1阳性细胞。（2）视网膜铺片Thy1．1免疫荧光染色后计数发现，移植hBDNF—GFP—NSCs的视网膜神经节细胞为（1461±154）个／mm^2，明显多于移植GFP—NSCs组（1244±187）个／mm^2（P〈0．05）。结论移植后的hBDNF—GFP—NSCs可以分化为神经元和神经胶质细胞，少数可分化为视网膜神经节样细胞。hBDNF—GFP—NSCs移植可以增加RGCs的存活数�
- 刘勇陈二涛冯东福潘栋超汪洋
- 关键词：干细胞基因转染
- 神经干细胞增殖能力的组织差异性研究被引量：13
- 2006年
- 目的从胚胎大鼠海马和上丘脑区中分离、培养神经干细胞,并进行体外增殖能力的比较。方法采用机械分离,无血清传代培养法从胚鼠海马和上丘脑获得神经干细胞。动态观察细胞生长情况,测定其体外生长曲线。使用免疫荧光法对两种来源的细胞克隆进行鉴定,激光共聚焦显微镜三维形态观察。使用扫描电镜观察神经干细胞克隆球的表面形态特征。将神经干细胞与Brdu共孵育,观察体外增殖情况。结果海马源胚胎神经干细胞的体外生长情况与上丘源干细胞基本相同,但前者的增殖速度相对较慢。两种来源的干细胞克隆球具有相似的超微结构。在相差显微镜和激光共聚焦显微镜下,两种来源的神经干细胞形态相似。与Brdu共孵育后,上丘源神经干细胞的阳性率高于海马源干细胞。从细胞生长曲线上可见两种来源的干细胞呈现了相同的增殖趋势,但生长曲线并不相同。从培养第8d起,上丘源胚胎神经细胞的活细胞记数就高于海马源干细胞。结论使用机械分离、无血清培养的方法可以获得胚胎海马源与上丘源神经干细胞,两者具有相似的形态结构,但上丘来源的神经干细胞增殖速度高于海马来源的神经干细胞。
- 冯东福卢亦成刘勇楼美清汪洋李文生
- 关键词：干细胞细胞培养细胞增殖
- 微血管环境影响中枢神经再生的研究进展
- 2010年
- 神经干细胞（NSCs），特别是成体神经干细胞的发现为哺乳动物中枢神经系统（CNS）的再生修复带来了新的希望。目前研究结果显示NSCs的增殖、迁移、分化过程受到其周围复杂微环境信号的调控，而其中由多种成分组成的微血管环境信号系统发挥了重要作用。在CNS修复过程中，
- 杨西涛冯东福朱志安
- 关键词：环境影响中枢神经再生微血管成体神经干细胞中枢神经系统再生修复
- 干细胞与视网膜损伤修复被引量：2
- 2007年
- 近年来,利用干细胞移植治疗视网膜损伤的研究进展迅速,不断取得令人鼓舞的成果。干细胞的来源多种多样,既有视网膜源性的,如Müller细胞、睫状体细胞等;也有非视网膜来源的,如胚胎干细胞、脑源性干细胞等。本文就近年来在种子细胞来源方面的研究进展作一综述。
- 刘勇冯东福朱志安
- 关键词：干细胞分化转分化视网膜
- 人BDNF和GFP基因共表达慢病毒载体的构建及神经干细胞转染被引量：10
- 2008年
- 目的构建人脑源性神经营养因子（hBDNF）与绿色荧光蛋白（GFP）共表达的慢病毒载体并转染神经干细胞（NSCs）。方法运用基因重组技术，将hBDNF基因连接到带GFP的慢病毒表达载体pWPXL-MOD（pWPXL-GFP-IRES-GFP）中，构建慢病毒载体pWPXL-hBDNF-IRES-GFP，MluⅠ、EcoRⅠ双酶切反应及测序分析加以鉴定。将慢病毒载体主体质粒pWPXL-hBDNF-IRES-GFP、包装质粒HELPER和包膜质粒VSVG共转染293T细胞，包装慢病毒载体并测定滴度。将构建的pWPXL-hBDNF-IRES-GFP感染NSCs，并对感染细胞进行鉴定及分化活性检测。结果构建的慢病毒载体pWPXL-hBDNF-IRES-EGFP经MluⅠ和EcoRⅠ双酶切反应鉴定正确；测序分析证实与Genbank报道的hBDNF基因序列完全一致。三质粒共转染293T细胞后，荧光显微镜下可见大量绿色荧光。包装后慢病毒测定滴度为0．1×10^9～1×10^9 TU／mL。pWPXL-hBDNF-IRES-GFP感染后的NSCs表达绿色荧光，可在体外扩增，NSCs细胞标志物巢蛋白表达阳性；细胞贴壁后可分化为神经元和胶质细胞。结论成功构建hBDNF与GFP基因共表达的慢病毒载体并转染NSCs，转染后细胞仍能保持已知的原有生物学特性及良好的分化活性。
- 刘勇陈二涛冯东福刘天津汪洋潘栋超
- 关键词：转染慢病毒
- 组织-细胞共培养诱导神经干细胞定向分化的研究被引量：8
- 2008年
- 目的探讨大鼠上丘组织-神经干细胞（NSCs）共培养对细胞分化的影响。方法采用元血清选择培养的方法获得上丘源NSCs，单细胞克隆传代培养并进行形态学观察。使用组织-细胞共培养系统将不同年龄大鼠上丘组织与NSCs共培养，观察NSCs分化过程。对分化细胞进行鉴定，并与NSCs的自然分化过程进行比较。结果从胚鼠上丘中获得的细胞呈球形悬浮生长，可形成单细胞克隆，具有多向分化能力，经免疫荧光鉴定证实为NSCs。新生大鼠上丘组织与NSCs共培养可以促进NSCs的分化，并诱导分化出Thy1.1阳性的视网膜神经节细胞，阳性细胞比率为19．97％（273／1094）。而神NSCs的自然分化或与成年大鼠上丘组织共培养后均未发现Thy1.1阳性细胞。结论从胚胎大鼠上丘可以分离培养出NSCs，与新生大鼠的上丘组织共培养可以诱导NSCs分化为视网膜神经节细胞。
- 冯东福卢亦成楼美清刘勇陈二涛汪洋
- 关键词：干细胞视网膜神经节细胞分化
- 慢病毒介导人脑源性神经营养因子与绿色荧光蛋白基因转染神经干细胞的研究被引量：2
- 2008年
- 目前对神经干细胞的研究大多集中在诱导分化与移植领域，使用慢病毒载体，同时进行人脑源性神经营养因子（hBDNF）和绿色荧光蛋白（GFP）基因转染的研究报道尚少。我们构建hBDNF-GFP基因共表达慢病毒载体，包装病毒后转染脑源性NSCs，使之稳定表达具有生物学活性的hBDNF。
- 刘勇陈二涛冯东福汪洋崔大明刘天津
- 关键词：人脑源性神经营养因子绿色荧光蛋白神经干细胞慢病毒介导基因转染HBDNF
- 大鼠视网膜共培养诱导神经干细胞分化为视网膜神经节细胞被引量：1
- 2005年
- 目的:研究新生大鼠视网膜组织与胚胎上丘源神经干细胞共培养对干细胞分化的影响。方法:采用机械分离、无血清培养基选择培养的方法从孕14d的胚鼠上丘中获取神经干细胞并传代培养。使用组织细胞共培养系统将出生4d的乳鼠视网膜组织与上丘源神经干细胞共培养,观察干细胞分化过程,对分化细胞进行鉴定,并与干细胞的自然分化过程进行比较。结果:从胚鼠上丘中获得的细胞在无血清培养条件下聚集呈球形悬浮生长,可以持续传代培养,具有多向分化能力,经免疫荧光鉴定证实为神经干细胞。新生大鼠视网膜组织与胚胎上丘源神经干细胞共培养促进干细胞的分化,并诱导分化出Thy1.1阳性细胞。结论:从胚胎大鼠上丘可以分离培养神经干细胞,与新生鼠视网膜组织共培养可以诱导上丘源神经干细胞分化出视网膜神经节细胞。
- 冯东福卢亦成楼美清汪洋李文生
- 关键词：神经干细胞细胞分化视网膜神经节细胞视网膜
- 神经干细胞定向迁移机制研究新进展被引量：3
- 2008年
- 二十世纪九十年代初期，研究者从成年哺乳动物脑组织内分离出能够不断分裂增殖，具有多分化潜能的细胞群落，提出了神经干细胞（neural stem cells，NSCs）的概念。近年来的研究发现，在哺乳动物胚胎发育过程或病理情况下NSCs存在有序的定向迁移过程。NSCs的定向迁移不仅对机体发育具有至关重要的作用，对于中枢神经系统损伤的修复也具有重大意义。在迁移过程中NSCs是如何循着一定的路线，确定路标，顺利到达目的地一直是人们感兴趣的问题。本文就近年来在NSCs定向迁移机制研究中取得的一些进展做一综述。
- 陈二涛刘勇冯东福汪洋李文生
- 关键词：神经干细胞细胞迁移
- 绿色荧光蛋白转基因胚胎大鼠神经干细胞生物学特性研究被引量：6
- 2008年
- 目的:体外分离、培养、鉴定绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因胚胎大鼠神经干细胞,研究其体外活性与生物学性状,为在体分化示踪研究奠定基础。方法:采用机械分离,无血清传代培养法从GFP胚胎大鼠海马获得神经干细胞,免疫荧光和免疫细胞化学法染色进行体外神经干细胞性质和分化活性鉴定,并利用流式细胞计数法行纯度检测。结果:成功从GFP胎鼠海马获得神经干细胞,体外生长情况与活性良好,能分化成神经元和胶质细胞;体外连续传代3次后绝大部分细胞Nestin表达阳性,且分化后细胞的GFP表达不受影响。结论:GFP胚胎大鼠来源神经干细胞具有普通胎鼠神经干细胞相同的自我更新和多向分化潜能,且能稳定表达GFP,因此它可以成为示踪神经干细胞研究的有效工具细胞。
- 刘勇冯东福陈二涛汪洋
- 关键词：胚胎神经干细胞生物学特性
