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江西省自然科学基金(2010GZY0251)
作品数:
1
被引量:2
H指数:1
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刘轲
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王心悦
朱新华
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2013
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趋化因子受体3 RNA干扰慢病毒载体的构建及对嗜酸粒细胞作用的初步研究
被引量:2
2013年
目的构建趋化因子受体3(chemokine receptor3,CCR3)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,了解其对嗜酸粒细胞的作用。方法针对小鼠CCR3基因序列,设计出RNAi的靶序列,退火形成双链DNA,与经MluI、SacI、EcoRI、HindIll、BamHI和XhoI进行酶切后的pLVX—shRNA2一m载体连接产生短发夹RNA(shoa hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体。应用shRNA慢病毒载体转染293T细胞及嗜酸粒细胞,测定病毒滴度,实时定量聚合酶链反应检测嗜酸粒细胞中CCR3基因mRNA的表达情况。结果成功构建了shRNA—mCCR3慢病毒载体,经测序与设计合成的靶向链完全一致。荧光显微镜下观察293T细胞感染效率大于90%,病毒滴度为4×10。TU/ml;对嗜酸粒细胞CCR3基因沉默效率为86.7%。结论成功构建CCR3基因RNAi慢病毒表达载体,为后续感染嗜酸粒细胞,探索其在变应性鼻炎发生和发展中的作用奠定了基础。
朱新华
廖兵
王心悦
刘轲
刘月辉
关键词:
RNA干扰
受体
CCR3
慢病毒属
嗜酸细胞
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