国家自然科学基金(31070929)
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 相关作者：李辉龚燕华樊嵘刘媛孙奕更多>>
- 相关机构：武警后勤学院中国医学科学院北京协和医学院武警交通指挥部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金博士科研启动基金天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肌细胞增强因子2c启动子的克隆与活性鉴定
- 2015年
- 【目的】克隆小鼠肌细胞增强因子2c(Myocyte enhancer factor 2c,Mef2c)的近端启动子,并检测启动子的活性。【方法】提取小鼠畸胎瘤P19细胞基因组DNA,用RT-PCR方法扩增Mef2c近端启动子片段(-1 130/+200),分别构建3个长度不同的Mef2c荧光素酶报告基因载体(约1.3 kb/0.8 kb/0.4 kb),双酶切鉴定所扩增的DNA序列,阳性质粒转染P19细胞,运用DualLuciferase®Reporter Assay System来检测启动子的活性,初步比较分析启动子片段间的活性差异。【结果】小鼠肌细胞增强因子Mef2c近端的启动子克隆成功,并构建了3段不同长度的启动子荧光素酶报告基因载体,双荧光素酶报告基因实验提示Mef2c近端启动子中的3段不同长度的启动子活性不一致。【结论】成功克隆肌细胞增强因子Mef2c的近端启动子并鉴定了相关活性,为进一步研究各种反式因子对Mef2c近端启动子的转录活性调节奠定了基础。
- 正午李辉梁之孔王玉梁龚燕华孙奕
- 关键词：荧光素酶报告基因基因转录活性
- 神经系统多梳蛋白1在神经系统来源细胞中的表达及促增殖作用被引量：1
- 2012年
- 目的检测神经系统多梳蛋白1(NSPc1)基因在神经系统来源的细胞中亚细胞定位及表达水平,探索NSPc1基因表达水平与神经系统来源的细胞增殖能力的关系。方法使用细胞免疫荧光与激光共聚焦技术检测人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系中内源性的NSPc1蛋白及外源过表达的绿色荧光蛋白-NSPc1融合蛋白的亚细胞定位情况。使用流式细胞术检测NSPc1基因过表达对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系细胞周期的影响。使用实时荧光定量聚合酶链式反应方法检测正常人脑组织与16例不同世界卫生组织分级的人胶质瘤样品中NSPc1基因的mRNA表达水平差异。结果 NSPc1蛋白主要定位于SH-SY5Y细胞的细胞核。过表达NSPc1显著增加SH-SY5Y细胞处于S期的细胞比例,而减少G2期的比例。人胶质瘤样品中NSPc1基因的mRNA平均表达水平高于正常人脑组织。结论NSPc1基因的高表达能促进神经系统来源的细胞增殖,NSPc1高表达可能与胶质瘤恶性度相关。
- 李辉樊嵘龚燕华
- 关键词：神经胶质瘤
- 干细胞调控因子神经系统多梳蛋白1的全基因组范围结合靶点分析
- 2012年
- 背景:在胚胎发育早期神经系统高表达的多梳蛋白家族成员神经系统多梳蛋白1具有明确转录抑制作用。最近研究表明,神经系统多梳蛋白1可能是一个有别于同源基因Bmi1的新的神经干细胞调控因子。目的:检测体外神经细胞分化模型小鼠畸胎瘤P19细胞中神经发育相关表观遗传调控因子神经系统多梳蛋白1在基因组上的结合靶点。方法:扩增未分化状态的小鼠畸胎瘤P19细胞系(内源性高表达神经系统多梳蛋白1基因),使用兔源抗神经系统多梳蛋白1多克隆抗体进行P19细胞的染色质免疫沉淀实验,并结合采用高通量芯片检测技术(ChIP-on-chip)检测捕获靶基因序列,最后利用生物信息学在线软件分析神经系统多梳蛋白1结合靶点临近基因功能的分类特点。结果与结论:筛选出约1280个神经系统多梳蛋白1结合靶点,靶点临近或所在基因的功能主要与分化、发育、转录及其调节、神经发生等密切相关。提示全基因组结合靶点分析可有效揭示神经系统多梳蛋白1基因在体外神经干细胞分化模型P19细胞中结合并可能参与调控的靶基因谱的分布特点,有利于下一步深入开展干细胞调控相关因子神经系统多梳蛋白1的下游信号通路研究。
- 李辉刘媛龚燕华
- 关键词：染色质免疫沉淀全基因组
- 神经干细胞增殖与分化过程中Bmi1与NSPc1的作用
- 2012年
- 多梳蛋白(PcG)家族是非常保守的表观遗传调节因子。近年来对其成员的功能研究发现,PcG家族对干细胞的自我更新及增殖与分化都有很重要的作用。哺乳动物PRC1成员Bmi1和NSPc1在神经系统发育早期高表达。最近的研究提示它们不仅在细胞增殖分化相关基因转录调控中发挥重要作用,而且在神经干细胞自我更新及分化过程中同样有重要作用。
- 李辉胡光宇龚燕华
- 关键词：增殖分化BMI1NSPC1
