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国家自然科学基金(30130190)

作品数:10 被引量:33H指数:4
相关作者:寿成超张艳丽张建芝孟麟李吉友更多>>
相关机构:北京肿瘤医院宁夏医学院北京大学临床肿瘤学院更多>>
发文基金:国家自然科学基金北京市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 10篇中文期刊文章

领域

  • 8篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 6篇支原体
  • 4篇原体
  • 2篇单克隆
  • 2篇单克隆抗体
  • 2篇蛋白
  • 2篇支原体感染
  • 2篇支原体属
  • 2篇体感
  • 2篇肿瘤
  • 2篇细胞
  • 2篇酶联
  • 2篇酶联免疫
  • 2篇酶联免疫吸附
  • 2篇免疫
  • 2篇免疫吸附
  • 2篇抗体
  • 2篇克隆
  • 1篇单核
  • 1篇单核细胞
  • 1篇信号肽

机构

  • 6篇北京肿瘤医院
  • 2篇宁夏医学院
  • 2篇宁夏医科大学
  • 2篇北京大学临床...
  • 1篇教育部
  • 1篇北京大学肿瘤...
  • 1篇北京市肿瘤防...

作者

  • 9篇寿成超
  • 3篇孟麟
  • 3篇张建芝
  • 3篇张艳丽
  • 2篇王怡
  • 2篇马泓
  • 2篇刘文斌
  • 2篇徐光炜
  • 2篇季加孚
  • 2篇马华崇
  • 2篇李吉友
  • 2篇李燕
  • 1篇吴健
  • 1篇姜北海
  • 1篇孙玉宁
  • 1篇龚曼曼
  • 1篇张霁
  • 1篇靳更林
  • 1篇杨华
  • 1篇黄甦

传媒

  • 1篇北京大学学报...
  • 1篇中华检验医学...
  • 1篇中国肿瘤
  • 1篇生物化学与生...
  • 1篇中国人兽共患...
  • 1篇癌症
  • 1篇生物医学工程...
  • 1篇中国生物化学...
  • 1篇宁夏医学院学...
  • 1篇Scienc...

年份

  • 1篇2011
  • 2篇2006
  • 1篇2005
  • 2篇2004
  • 3篇2003
  • 1篇2002
10 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
六种支原体单克隆抗体的制备与鉴定
2006年
目的制备针对临床常见的六种支原体的特异性单克隆抗体,为临床支原体感染检测提供工具。方法用灭活的支原体颗粒免疫BALB/C小鼠,通过传统杂交瘤技术制备抗支原体单克隆抗体,采用6种支原体蛋白以酶联免疫吸附试验(ELISA)进行交叉筛选,并用免疫印记法(WB)对其特异性进行鉴定。结果获得针对生殖支原体、梨形支原体、猪鼻支原体、发酵支原体、肺炎支原体、穿透支原体的特异性单克隆抗体各1株,经ELISA检测证实具有较好的反应特异性,其中,单抗MG6H1、MPRI ZW1和MPE6G4在WB中也同时分别与生殖支原体、梨形支原体和穿透支原体呈特异反应。结论获得针对6种人体常见感染支原体的不同单克隆抗体,它们在ELISA检测中具较好的反应特异性,有望应用于支原体感染检测。
杨文君张建芝李燕张艳丽寿成超
关键词:支原体属酶联免疫吸附测定
抗猪鼻支原体单克隆抗体的制备与鉴定被引量:2
2003年
目的 :制备抗猪鼻支原体 (M .hyorhinis,M .hy)的单抗隆抗体 (monoclonalantibody ,McAb) ,为相关研究提供工具。方法 :用灭活的猪鼻支原体免疫BALB/c小鼠 ,运用传统的细胞融合技术制备抗猪鼻支原体单克隆抗体。单抗鉴定采用酶联免疫吸附实验 (ELISA)和免疫组织化学 (immunohistochemistry ,IHC)方法。结果 :经ELISA筛选获得了一株抗猪鼻支原体的单克隆抗体 ,该抗体亚类为IgG2b。ELISA结果表明该单抗仅与猪鼻支原体反应而与肺炎支原体和发酵支原体不反应。用经PCR检测支原体阳性的胃癌切片做免疫组化 ,结果显示 ,该抗体能与PCR阳性的胃癌组织切片产生特异性反应。结论 :获得一株抗猪鼻支原体特异性单克隆抗体 ,可为相关研究提供工具。
张艳丽孟麟李燕寿成超
关键词:单克隆抗体酶联免疫吸附实验免疫组织化学
支原体感染与肿瘤的发生被引量:9
2002年
一直被视为抗肿瘤单抗的PD4在对其抗原进行纯化、测序后被证实为抗猪鼻支原体抗体。用单抗PD4通过免疫组化检测发现 ,胃癌、大肠癌有较高的支原体感染率。细胞学实验表明 ,猪鼻支原体可提高胃癌细胞MGC803在软琼脂上克隆形成能力 ,单抗PD4则能够抑制这种作用。作者在回顾相关文献的基础上结合自己实验室的上述工作得出结论:支原体感染和肿瘤发生可能存在被人们忽视的某种相关性 。
马华崇马泓黄甦张霁季加孚李吉友王怡徐光炜寿成超
关键词:肿瘤胃肿瘤病因学支原体感染
Protein P37 of mycoplasma hyorhinis induces secretion of TNF-αfrom human peripheral blood mononuclear cells被引量:3
2003年
High mycoplasmal infection ratio in gastric cancer tissues suggests a possible association between my-coplasma infection and tumorigenesis. Because TNF-a plays an important role in carcinogenesis caused by microbes in-fection and P37 is a major immunogen of mycoplasma hy-orhinis (M. hyor.), investigating whether P37 could induceexpression and secretion of TNF-a will be very significant to elucidate the possible molecular mechanism of gastric car-cinogenesis involved with M. hyor. At the present study, we cloned full gene of p37 by PCR and mutated the 7 codes of TGA into TGG firstly, then expressed the P37 protein suc-cessfully with pGEX-4T-1 vector in E. coli, which was veri-fied with Western blot. By RT-PCR and sensitive L929 cell toxic assay, we found that P37 protein could induce expres-sion and secretion of TNF-a from human peripheral bloodmononuclear cells, and the inducing activity of P37 could be dramatically blocked by McAb PD4. These results suggestthat the induction of TNF-a secretion by P37 probably plays an important role in diseases caused by M. hyor. infectionand needs to be further investigated.
NING Jinying, HUANG Su, WU Jian, MENG Lin & SHOU Chengchao Department of Biochemistry and Molecular Biochemistry, School ofOncology, Peking University and Beijing Institute for Cancer Research, Beijing 100034, China
关键词:人外周血单核细胞支原体TNF-Α
四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37表达细胞系的建立被引量:2
2005年
目的建立四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37的表达细胞系,为研究p37对细胞表型的影响及相关机制奠定基础。方法构建pcDNA5/FRT/TO-p37重组质粒,酶切鉴定后用脂质体方法将质粒与重组酶表达载体pOG44共转染Flp-In-T-REx-293细胞,用Hygromycin和Blasticidin双药筛选出阳性克隆,分别提取细胞总RNA和总蛋白,应用反转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western印迹对其表达进行鉴定,并确定四环素诱导的最适时间和浓度。通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测P37对细胞增殖的影响。结果转染pcDNA5/FRT/TO-p37的Flp-In-T-REx-293细胞克隆能成功表达P37蛋白(相对分子质量为43.5×103),且能将该蛋白分泌至胞外。四环素对其表达显示出明显的调控作用,不加四环素的细胞不表达P37蛋白。四环素质量浓度在2mg/L并作用60h其表达水平即可达到最高峰。P37的表达对细胞增殖具有一定的促进作用。结论已建立受四环素调控的P37高效表达细胞系,为进一步研究p37的功能和作用机制提供了实验细胞模型。
龚曼曼孟麟刘文斌张建芝寿成超
关键词:四环素支原体属细胞系
胃癌组织中猪鼻支原体的分离培养与鉴定被引量:15
2003年
目的 获得胃癌组织中存在猪鼻支原体感染的直接证据。方法 收集新鲜的胃癌手术标本 2 0例 ,利用PPLO培养基从胃癌组织中分离培养猪鼻支原体 ,并用聚合酶链反应 (PCR)检测阳性培养产物中猪鼻支原体的特异性基因序列片段。结果 除 1例标本细菌污染外 ,1 9例胃癌组织中有 4例获得阳性培养产物 ,阳性率为 2 1 1 % ;该 4例阳性培养物中均扩增出猪鼻支原体的特异性序列片段。结论 胃癌组织中存在猪鼻支原体感染 ,说明猪鼻支原体对人亦具感染性。
马华崇马泓张艳丽季加孚王怡李吉友徐光炜寿成超
关键词:胃癌癌组织
支原体感染与肿瘤被引量:8
2004年
支原体是广泛存在于自然界的条件致病微生物,可能是唯一可以与真核生物共生,并可与哺乳动物细胞长期相互作用的原核生物。多种不同的肿瘤组织中可检测到支原体的存在,某些支原体的持续感染可导致哺乳动物细胞的转化、上调癌基因的表达并引起肿瘤细胞生物学行为的改变,提示支原体感染与肿瘤的发生有潜在的相关性。
宁金鹰寿成超
关键词:支原体感染肿瘤原核生物癌基因基因表达
猪鼻支原体P37蛋白相互作用蛋白的筛选与鉴定被引量:4
2004年
既往工作表明 ,胃癌组织中有较高的猪鼻支原体感染率 ,猪鼻支原体的主要膜蛋白P37能够诱导外周血单核细胞释放肿瘤坏死因子 (TNF) .为了深入研究P37的作用机制 ,利用酵母双杂交系统筛选与P37蛋白相互作用的蛋白质分子 .首先 ,将编码P37全长的cDNA克隆到 pGBKT7载体中 ,构建“诱饵”表达载体 pGBKT7 p37,以此筛选人胎盘组织cDNA表达文库 .在 2 6× 10 6个克隆中 ,筛选到一株能与P37相互作用的阳性克隆 ,序列测定表明 ,该阳性克隆编码人视网膜色素上皮细胞蛋白 (Norpeg蛋白 ) .在此基础上经GST PullDown实验 ,进一步证实Norpeg蛋白确能与P37相互作用 ,为进一步研究P37对细胞的作用机制奠定了基础 .
孙玉宁靳更林张建芝吴健寿成超
关键词:酵母双杂交
应用噬菌体肽库技术获得与猪鼻支原体蛋白P37结合的多肽序列
2011年
本研究以猪鼻支原体P37蛋白作为筛选分子,对噬菌体展示随机肽库进行亲和淘选。利用ELISA法鉴定亲和力高的阳性噬菌体克隆,对其进行DNA测序和分析,据此推导随机多肽的氨基酸序列,然后构建、表达GST-多肽重组蛋白,经GST-pull down进一步鉴定该多肽与P37的结合力。经过4轮筛选和单克隆检测,获得18个有较强特异反应的阳性克隆,18个克隆包括了5种不同的小肽序列,它们分别为ACAPKPPWLC(12/18)、RPLSIDP-WSPHL(3/18)、RPLSNDPWSPHL(1/18)、QNMMSPIEGVRI(1/18)和WAPEKDYMQLMK(1/18)。用ACAPK-PPWLC、RPLSIDPWSPHL与GST重组的融合蛋白进行GST-pull down实验表明,RPLSIDPWSPHL多肽能与P37相互作用。本研究为进一步筛选与P37相互作用的蛋白提供了实验依据和结构基础。
杨华冯勤徐慧玉寿成超
关键词:噬菌体随机肽库
猪鼻支原体膜蛋白p37酶切修饰的质谱分析被引量:1
2006年
p37是猪鼻支原体的膜脂蛋白,有潜在的致癌活性.在对真核表达的p37蛋白分析时发现,p37表现为不同大小的分子片段,提示其存在蛋白质修饰.为了对p37的确切修饰进行分析,进而为其功能研究奠定基础,在构建不同融合蛋白表达质粒并证明其存在修饰蛋白的基础上,通过飞行质谱及N端氨基酸序列测定,分析了p37蛋白的精确分子量和酶切修饰的大致部位,发现3种形式的p37蛋白的精确分子量分别为47 644、46 105和43 984.p37蛋白在其N端被信号肽酶切去1个21肽,在其C端被蛋白酶切去1个18~26小肽后,成为分子量为43 984的成熟p37蛋白.对p37不同酶切修饰片段的分析将有助于对p37蛋白生物学功能及意义的研究.
刘文斌孟麟姜北海寿成超
关键词:信号肽质谱
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