国家自然科学基金(40746030)
- 作品数：14 被引量：102H指数：7
- 相关作者：王淑军吕明生房耀维李华钟刘姝更多>>
- 相关机构：淮海工学院江南大学南京农业大学更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程环境科学与工程化学工程更多>>
- 超嗜热古菌Thermococcus sp．HJ21产高温α-葡萄糖苷酶条件和酶学性质初步研究被引量：6
- 2008年
- 对1株分离自深海热液口的超嗜热古菌(Thermococcus sp.HJ21)菌株进行了产α-葡萄糖苷酶条件的优化和酶学性质的初步研究。结果表明,该菌株发酵时间为6h时,较适合产胞内α-葡萄糖苷酶,发酵时间为21 h时较适合产胞外α-葡萄糖苷酶。其最适产酶温度为85℃,pH为6.5,NaCl浓度为2.5%。可溶性淀粉、酵母粉和蛋白胨促进产酶。该酶的最适作用温度为100℃,90℃半衰期(t_(1/2))为2h。最适酶作用pH值为7.0,在pH值5.0～8.0酶活力相对稳定。金属离子Cu^(2+)、Al^(3+)、Ni^(2+)对该酶有较明显抑制作用,Hg^(2+)几乎完全抑制该酶的活性,而EDTA、Fe^(3+)和K^+对该酶有激活作用。
- 杨磊吕明生王淑军房耀维刘姝李华钟
- 关键词：超嗜热古菌THERMOCOCCUSΑ-葡萄糖苷酶酶学性质
- 交替假单胞菌LP621菌株产右旋糖苷酶的培养条件优化被引量：7
- 2010年
- 从江苏连云港海域分离和筛选到1株产右旋糖苷酶的海洋细菌交替假单胞菌Pseudoalteromonas tetraodonis LP621,通过单因素试验和正交试验对该菌株产右旋糖苷酶培养条件进行优化。单因素试验结果表明,最佳培养时间为24 h,最适产酶温度为25℃;产酶pH范围为5.0~11.0,最适产酶pH为6.0;产酶NaCl浓度范围为1%~10%,NaCl浓度为4%时产酶较高;装液量在25%。麦芽糖、胰蛋白胨和酵母膏促进产酶。利用响应面方法对LP621产右旋糖苷酶的发酵条件进行优化。选择培养基pH、时间、麦芽糖浓度和装液量4因素进行优化,结果为pH 7.07,发酵时间21.94 h,麦芽糖浓度0.42%,装液量为21.88%,酶活为270.1U/mL。
- 吕明生王淑军房耀维焦豫良刘姝张露吴彬彬
- 连云港近岸海域沉积物中重金属垂直分布特征研究被引量：13
- 2008年
- 采集连云港近岸海域4个沉积物柱状样,并分层测定了Cu,Pb,As,Hg,Cd等重金属的含量,同时结合人类活动与重金属含量变化进行相关性分析。研究表明,各柱状样中主要污染物为Cu,重金属污染排序为Cu,As,Cd,Hg,Pb;根据210Pb测年资料,柱状样中重金属含量受陆源排污和海岸工程建设干扰显著,临洪河、碱厂排污和西大堤工程对沉积物中重金属含量的变化影响较大。
- 贺心然陈斌林殷伟庆姚远
- 关键词：沉积物重金属
- 热球菌HJ21高温α-淀粉酶基因克隆、表达及性质研究被引量：3
- 2011年
- 通过简并引物扩增热球菌(Thermococcus siculi)HJ21高温α-淀粉酶保守区域之间的序列,再利用Site-finding技术获得两端未知序列。构建了在N端添加了His6标签的表达载体pEt-28a-His6-THJA后转化E.coli,在IPTG诱导下表达。进一步纯化后SDS-PAGE电泳检测达到电泳纯,重组酶分子量为50 KDa。重组酶最适作用温度和pH值分别为90℃,pH5.0。重组酶在pH为5.5时最稳定;K+,Sr2+,Mg2+,Na+对α-淀粉酶活力的促进作用不显著,Cu2+,Pb2+,Hg2+,Zn2+,N-溴代丁酰亚胺和三氯乙酸对该酶有显著抑制作用。
- 王淑军吕明生秦松陆兆新房耀维邓祥元林谦刘红飞
- 关键词：基因克隆酶学性质
- 海洋细菌Pseudoalteromonas sp．G23产低温淀粉酶发酵条件的研究被引量：13
- 2008年
- 从江苏连云港海域筛选和分离到1株产低温淀粉酶的海洋细菌Pseudoalteromonas sp.G23,对该菌株进行了产α-淀粉酶发酵条件研究,结果表明,该菌株发酵16h后到达产酶高峰,最适产酶温度为15℃,最适产酶pH值为8.5,装液量为20%。可溶性淀粉、酵母膏和蛋白胨促进产酶。利用响应面方法对菌株Pseudoalteromonas sp.G23产α-淀粉酶的发酵条件进行了优化,结果表明,可溶性淀粉浓度为1.16%、蛋白胨浓度为2.11%,发酵温度12.38℃,酶活为41.4U/mL,较优化前提高了7倍。
- 王淑军刘红飞李华钟房耀维吕明生刘姝
- 关键词：海洋细菌PSEUDOALTEROMONAS低温淀粉酶发酵优化
- GH57家族高温淀粉普鲁兰酶的结构与功能分析被引量：8
- 2011年
- 淀粉普鲁兰酶(E.C.3.2.1.1/41)同时具有淀粉酶(E.C.3.2.1.1)和普鲁兰酶(E.C.3.2.1.41)的功能,属于糖苷水解酶GH13和GH57家族。由于淀粉普鲁兰酶可以同时水解α-1,4和α-1,6糖苷键,在淀粉糖化工业中具有降低生产成本、提高生产效率和提高糖化率的作用。其中高温淀粉普鲁兰酶由于能够在淀粉工业液化条件下同时催化淀粉的液化和糖化反应,因此在淀粉糖化工业中更具有应用价值。另外,淀粉普鲁兰酶的双功能催化机制对酶学研究中也具有重要价值。该文就近年高温淀粉普鲁兰酶的结构及功能研究最新成果做以总结分析。
- 焦豫良王淑军吕明生
- 关键词：糖苷水解酶
- 一株深海热液口超嗜热古菌的分类鉴定及高温酶活性研究被引量：10
- 2009年
- 对一株分离自深海热液口古菌HJ21进行了分类鉴定及高温酶活性的研究。该菌株是极端嗜热的厌氧球菌，直径为1．0～1．2μm。菌株最适生长温度88℃；菌株生长pH为5．0—9．0，最适pH为6．5～7．0；菌株生长NaCI质量浓度为10～50g·L^-1，最适为20g·L^-1。根据其形态特征、生理生化特性以及16S rRNA基因序列分析结果，确定HJ21菌株为热球菌属（Thermococcus）。该菌株能产生高热稳定的高温α-淀粉酶、普鲁兰酶、α-葡萄糖苷酶和蛋白酶，这些酶的最适作用温度分别为95、95、100和100℃，α-淀粉酶、普鲁兰酶和α-葡萄糖苷酶在90℃的半衰期分别为5、5和2h；蛋白酶在100℃保温2．5h后仍具有84％的酶活性。
- 王淑军陆兆新吕明生刘红飞徐金利杨磊
- 关键词：超嗜热古菌RRNAΑ-淀粉酶普鲁兰酶Α-葡萄糖苷酶
- 深海高温淀粉普鲁兰酶异源表达及酶活分析
- 2011年
- 深海热液口厌氧古菌Thermococcus siculi HJ21中的高温淀粉普鲁兰酶进行分子进化树系分析,并在大肠杆菌中通过pMal-c2x载体表达并纯化其N端催化结构域。通过融合表达,在N端催化结构域的N端融合有麦芽糖结合蛋白MalE。对该融合蛋白的α-淀粉酶和普鲁兰酶活性进行了实验分析。融合蛋白的两种酶活的最适温度均为100℃,淀粉酶和普鲁兰酶活性的最适pH值分别为5和6,比活力分别为6.5和11.5 U/mg。结果表明,高温淀粉普鲁兰酶的α-淀粉酶活性相对较弱,其C端578个氨基酸构成的区域非两种酶活性所必需的结构。本研究中获得的高温淀粉普鲁兰酶融合蛋白在工业酶法制糖中可以进一步和高温α-淀粉酶配合使用。
- 焦豫良王淑军吕明生房耀维刘姝
- 关键词：异源表达酶活分析
- 深海古菌Thermococcus siculi HJ21高温普鲁兰酶基因的克隆及表达被引量：4
- 2010年
- 根据NCBI上公布的普鲁兰酶基因的保守序列设计简并引物,以Thermococcus siculi HJ21基因组DNA为模板进行PCR,得到T.siculi HJ21普鲁兰酶的基因,测序后通过Blast(NCBI)数据库比对和分析表明扩增基因有一个4056bp、编码1351个氨基酸的开放阅读框,为一新的普鲁兰酶基因。将该基因插入表达载体pET28a,并转化Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导,测定普鲁兰酶比活力。重组转化子的细胞破碎液有高温普鲁兰酶活性,SDS-PAGE电泳结果显示出分子质量约为150kD的特异性条带。
- 王淑军吕明生李华钟徐金利焦豫良房耀维刘姝
- 关键词：THERMOCOCCUS普鲁兰酶基因PCR
- 嗜热古菌Thermococcus sp.HJ21产高温普鲁兰酶条件和酶学性质被引量：13
- 2009年
- 对一株分离自热液口的超嗜热古菌（Thermococcussp．HJ21）菌株产普鲁兰酶的条件及酶学性质进行了研究。结果发现：该菌株在18h产酶量达到最高。在发酵温度为88℃、培养基初始pH6．5，以及NaCl质量浓度为2．5g／dL时，产酶较高。麦芽糖、酵母粉和蛋白胨有利于普鲁兰酶的产生。该酶的最适作用温度为95℃，在80～100℃之间仍可保持较高的酶活性；该酶具有较好的热稳定性，100℃保温2h，仍有50％以上的残余酶活。该酶的最适作用pH为6．0，并且在PH5．0～7．0之间可以保持较高酶活性；在pH5．0～7．0之间较稳定，在pH6．5时稳定性最好。Ca2＋和Na＋对普鲁兰酶具有较强的激活作用，而Al3＋、Ni2＋、Hg2＋、Cu2＋等则强烈抑制酶的活性。
- 徐金利吕明生王淑军李华钟孙玉英房耀维
- 关键词：普鲁兰酶酶学性质
