国家教育部博士点基金(20040487067)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 肌球蛋白ⅡB对人脐静脉血管内皮细胞中肿瘤坏死因子受体1转位影响的观察
- 2008年
- 目的:观察非肌肉肌球蛋白重链ⅡB(nonmuscle myosin heavy chainⅡB,NMHC-ⅡB)对人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中肿瘤坏死因子受体1(TNF receptor 1,TN-FR1)转位的影响。方法:将成功构建的重组pEGFP-N1/TNFR1载体通过阳离子脂质体Lipofectin介导的方法转染入HUVECs,筛选获得稳定克隆株。设计并合成NMHC-ⅡB的小分子干扰RNA(small interference RNA,si RNA),用脂质体LipofectamineTM2000转染进入该稳定克隆株,差速离心加蔗糖密度梯度离心收获细胞质膜,Western印迹法观察TNFα诱导前和诱导后细胞质膜上TNFR1蛋白含量的变化。结果:与空白对照组比较,转染NMHC-ⅡB si RNA组进入HUVECs,可以明显抑制细胞内NMHC-ⅡB mRNA的表达[(0.670 4±0.024 2)∶(0.454 0±0.041 1),P<0.01],也可以明显减少TNFα诱导前[(0.430 6±0.028 9)∶(0.324 8±0.016 7),P<0.01]和诱导后[(0.660 9±0.026 5)∶(0.492 2±0.021 7),P<0.01]细胞质膜TNFR 1的含量。在转染NMHC-ⅡB si RNA的细胞,TNFα的诱导仍然可以提高细胞质膜TNFR 1的含量,诱导前、后比较[(0.324 8±0.016 7)∶(0.492 2±0.021 7),P<0.01]。结论:NMHC-ⅡB可能在TNFR1从反式高尔基体到细胞质膜的转位或运输中起正向作用,但是可能并不是惟一的或决定性的因素。
- 叶顺传曾秋棠吴辉文吕云波
- 关键词：肿瘤坏死因子受体1小分子干扰RNA人脐静脉血管内皮细胞转位
- 重组载体pEGFP-N1/TNFR1在人脐静脉血管内皮细胞中的表达
- 2009年
- 目的:构建肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1/TNFR1,并在人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)中表达。方法:分离并培养HUVECs,将已成功构建的融合表达载体pEGFP-N1/TNFR1,通过阳离子脂质体Lipofectin介导的方法转染到HUVECs中,RT-PCR检测TNFR1mRNA的表达,Western blotting检测融合蛋白的瞬时表达,同时在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察。结果:成功分离HUVECs,重组pEGFP-N1/TNFR1融合表达载体转染HUVECs后,在细胞中检测到TNFR1基因片段,Western blotting可以检测到TNFR1在HUVECs表达,用荧光显微镜观察到转染细胞中有绿色荧光蛋白表达。结论:重组pEGFP-N1/TNFR1融合表达载体在HUVECs中获得了表达,融合蛋白具有TNFR1和绿色荧光蛋白(GFP)的双重活性,为进一步研究TNFR1转位的调控因素打下基础。
- 叶顺传曾秋棠吴辉文吕云波
- 关键词：肿瘤坏死因子绿色荧光蛋白脐静脉血管内皮细胞
