黑龙江省教育厅科学技术研究项目(12511037)
- 作品数：4 被引量：18H指数：3
- 相关作者：王君伟张文龙徐凝孟祥莉刘晓丹更多>>
- 相关机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省教育厅科学技术研究项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛化脓隐秘杆菌的分离及其主要毒力基因的PCR鉴定被引量：9
- 2013年
- 从2009-2012年多个奶牛场送检的5份以奶牛化脓性炎症为特征的病料中分离出5株细菌,根据其革兰氏染色的形态特征、培养特性、生化特性以及16SrRNA基因序列的BLAST分析,确定分离菌为化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes),并对分离菌的主要毒力因子基因进行了PCR鉴定和动物试验。结果显示,5株分离菌的16SrRNA基因序列与GenBank中收录的11株牛源化脓隐秘杆菌16SrRNA基因序列的同源性为99%以上。HLJ-1005株分离菌基因组中缺失胶原结合蛋白(CbpA)基因,但包含溶血素(PLO)基因、神经氨酸酶H(NanH)基因和神经氨酸酶P(NanP)基因,且HLJ-1005株分离菌的致病力明显弱于其他4株分离菌。证实,化脓隐秘杆菌的致病力与cbpA基因和nanP基因的存在相关。
- 徐凝刘琰张明富张文龙王君伟
- 关键词：化脓隐秘杆菌RRNA基因毒力基因
- A型产气荚膜梭菌小鼠感染模型的建立被引量：3
- 2013年
- 近年来,我国许多牛场暴发产气荚膜梭菌病,同时产气荚膜梭菌病疫苗及其致病机制的研究不断深入。本试验以牛源A型产气荚膜梭菌强毒株C987株为基础,通过灌胃或皮下注射方式接种小鼠,记录其发病和死亡情况,并剖检观察小鼠内脏各器官病变及组织学变化,建立小鼠感染模型。结果表明,灌胃和皮下注射接种方式,A型产气荚膜梭菌对小鼠的半数致死量分别为4.35×109 CFU和8.0×106 CFU。感染小鼠腹部明显膨大,剖检内脏器官均出现明显病变,组织化学染色显示内脏器官大多出现淋巴细胞浸润及不同组织学变化。皮下注射方式在接种细菌数量、试验平行性、小鼠死亡率上均优于灌胃接种方式,因此皮下注射接种方式更适合作为A型产气荚膜梭菌小鼠感染模型的接种途径。本试验为牛A型产气荚膜梭菌疫苗的评价及其致病机制的研究提供了一种合适的动物模型。
- 王璞盛巧玲李鑫孟祥莉张文龙王君伟
- 关键词：A型产气荚膜梭菌小鼠
- 多重PCR方法快速检测3种消化道病原菌被引量：5
- 2013年
- 为建立一种检测和鉴别诊断动物奇异变形杆菌、沙门氏菌和产气荚膜梭菌感染的方法,本研究针对奇异变形杆菌脲酶调节子基因(ureR)、沙门氏菌侵袭蛋白A基因(invA)及产气荚膜梭菌α毒素基因(α-toxin)序列设计引物,建立一种同时检测3种细菌的多重PCR方法,并对扩增体系和条件进行了优化,建立的多重PCR检测方法特异性良好,对3种目的菌最低检出限均在105cfu/mL以上。初步应用该方法检测3种细菌单独人工感染小鼠的病变组织和人工模拟细菌混合感染的临床样品,结果证明该方法可以用于临床样本检测。
- 刘晓丹孟祥莉徐凝张文龙王君伟
- 关键词：奇异变形杆菌沙门氏菌产气荚膜梭菌多重PCR
- 化脓隐秘杆菌溶血素蛋白的原核表达及其溶血活性鉴定被引量：1
- 2013年
- 为研究化脓隐秘杆菌致病机制及其病原学诊断方法,本研究克隆了编码化脓隐秘杆菌溶血素蛋白的plo基因,并构建重组表达质粒pET-plo,转化大肠杆菌Rosetta(D E3)感受态细胞中诱导表达。SDS-PAGE检测结果显示,表达的重组蛋白约为62 ku,western blot分析表明表达的重组蛋白可以与鼠抗化脓隐秘杆菌血清发生反应。采用重组蛋白免疫新西兰白兔制备的多克隆抗体效价达到1∶128 000,western blot和琼脂双扩散试验表明制备的多克隆抗体能够与天然PLO蛋白发生反应。溶血试验表明重组蛋白能够溶解红细胞,制备的多克隆抗体能有效中和重组蛋白的溶血活性。
- 孟祥莉母晓宇刘晓丹徐凝王璞高明春张文龙王君伟
- 关键词：溶血素原核表达多克隆抗体
