国家重点基础研究发展计划(2011CB964703)
- 作品数：7 被引量：23H指数：3
- 相关作者：罗卓荆杨柳刘建魏铂沅韩跃虎更多>>
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- 血清中骨质疏松相关蛋白分子标志物的筛选研究被引量：4
- 2016年
- 目的通过蛋白芯片筛选血清中反映早期绝经后骨质疏松症发生、发展的标志性分子。方法 3月龄雌性SD大鼠20只,随机分为卵巢切除(ovariectomized,OVX)组和假手术(sham operation,Sham)组,每组10只,分别进行卵巢去势手术和假手术处理。术后2、4、6、8周对两组大鼠进行活体显微CT扫描,测量股骨远端骨密度及相关松质骨形态计量学动态参数;同时经内眦静脉取血,利用蛋白芯片检测血清中不同蛋白因子的含量。结果显微CT检测结果显示OVX组大鼠骨密度(BMD)、相对骨体积(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数目(Tb.N)从第4周开始下降,骨小梁分离度(Tb.Sp)开始上升,Sham组未见明显变化;到第8周各指标在OVX组与Sham组之间差异有统计学意义(P<0.05)。蛋白芯片检测结果显示OVX组中干扰素-γ(IFN-γ)、β神经生长因子(b-NGF)分别从术后4周和6周后开始升高,同Sham组比较均至第8周具有明显差异(P<0.05)。结论 IFN-γ和b-NGF水平在绝经后骨质疏松早期开始增高,可考虑作为诊断早期绝经后骨质疏松症发生的新型蛋白分子。
- 赵卓杰胡雅茜杨柳罗卓荆
- 关键词：骨质疏松干扰素Γ神经生长因子类
- 检测破骨细胞内活性氧水平方法的实验探究与应用
- 2015年
- 目的探究可以有效、准确且直观地检测破骨细胞内活性氧(ROS)的方法,并应用其对破骨细胞分化过程中活性氧的变化进行检测。方法培养RAW264.7细胞系作为破骨前体细胞。控制细胞密度铺板后装载检测活性氧的2,7-双乙酸二氯荧光素(DCFH-DA)荧光探针,分别检测阴性对照组(只加α-MEM培养基)、阳性对照组(ROSup)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)组(100ng/mlRANKL)和N-乙酰左旋半胱氨酸(NAC)组(100ng/mlRANKL+1m MNAC)破骨细胞的活性氧水平。检测方法包括使用荧光显微镜观察不同组的荧光强度并对阳性细胞计数统计和使用流式细胞仪检测不同组的荧光强度并对Mean FL1-A定量分析。结果阴性对照组与阳性对照组比较,定性的荧光照片和阳性细胞计数统计,与定量的流式细胞术统计图和Mean FL1-A统计分析,都显示阳性对照组的细胞内活性氧水平远高于阴性对照组(P<0.001和P<0.001)。同时,RANKL组的活性氧水平高于阴性对照组(P<0.05和P<0.01),而NAC组的水平较RANKL组为低(P<0.001和P<0.001)。结论定性观察方法与定量检测方法结果均有效并且高度一致。两种方法的综合使用可以直观准确地检测破骨细胞内的活性氧。使用该方法可验证破骨细胞分化过程中活性氧的增加,并且NAC可抑制此变化。
- 史俊杨柳黄强刘建罗卓荆
- 关键词：骨质疏松破骨细胞活性氧
- 绝经后骨质疏松小鼠中Hedgehog信号对破骨细胞的作用被引量：2
- 2015年
- 目的探讨绝经后骨质疏松破骨细胞中Hedgehog信号的活性及其对破骨细胞的作用,了解雌激素与Hedgehog信号的关系。方法利用绝经后骨质疏松模型(OVX,Ovariotomized)小鼠3只与假手术组小鼠3只来源的破骨细胞进行培养,对比两组细胞Hedgehog信号的活性。将RAW264.7细胞用无酚红培养基进行破骨诱导培养,并随机分为6组:雌激素组,给予雌二醇以10-8 M浓度干预;雌激素+激动剂组,给予10-8 M浓度雌二醇和1μm浓度的Hedgehog信号激动剂Purmorphamine进行干预;雌激素+拮抗剂组,给予10-8 M浓度雌二醇和1μm浓度的Hedgehog信号拮抗剂Vismdegib进行干预;对照组,不给予任何干预;激动剂组,给予1μm浓度的Purmorphamine进行干预;拮抗剂组,给予1μm浓度的Vismdegib进行干预,定量PCR检测各组Hedgehog信号水平Gli1和Ptch1的表达。对雌激素组、拮抗剂组和对照组分别进行TRAP染色和F-actin染色,以检测破骨细胞数量。结果 (1)与正常小鼠来源的破骨细胞相比,OVX小鼠来源的破骨细胞中Ptch1 Gli1和Ptch1 Gli1表达量0.72400±0.04272、0.66794±0.07331水平更高于正常小鼠来源的量0.44196±0.06822、0.45229±0.05750,差异有统计学意义(P<0.05);(2)Gli1 Ptch1表达量0.4131±0.02511、0.54165±0.03931较对照组1.00000±0.11771、0.74160±0.07632低,差异有统计学意义(P<0.05);雌激素+激动剂组中Ptch1和Gli1表达水平0.38557±0.06785、1.00000±0.03138较激动剂组0.86403±0.05886、1.45856±0.05911低,差异有统计学意义(P<0.01);(3)与对照组相比,拮抗剂组与雌激素组破骨细胞数量均较低(P<0.05)。结论 (1)绝经后骨质疏松破骨细胞中Hedgehog信号活性提高;(2)破骨细胞中雌激素对Hedgehog信号有抑制作用;(3)体外培养时,抑制Hedgehog信号能降低破骨细胞的数量,改善雌激素缺乏时破骨细胞过多的情况。
- 厉晓杰杨柳刘建罗卓荆
- 关键词：骨质疏松绝经后雌激素类破骨细胞
- 分别构建膜内成骨和软骨内成骨骨修复模型的研究被引量：2
- 2014年
- [目的]分别构建膜内成骨骨修复模型和软骨内成骨骨修复模型。[方法]取BALB/c小鼠64只,随机分为骨皮质钻孔模型组和骨膜划痕模型组。骨皮质钻孔模型组在小鼠右侧胫骨前内侧实施单纯性骨皮质钻孔损伤用于构建膜内成骨模型;骨膜划痕模型组在小鼠右侧胫骨前内侧实施骨膜划痕损伤用于构建软骨内成骨模型。术后第7、10、14和21 d,每组每个时间点处死8只小鼠,观察损伤部位的组织修复。[结果]骨皮质钻孔模型组小鼠损伤后第7 d在损伤部位出现新生小梁骨构成的骨痂组织。损伤后第10 d新生小梁骨充满损伤骨皮质及骨髓腔。损伤后第14 d新生骨痂组织进入改建过程,至第21 d,多数骨痂组织基本改建完成。在修复过程中无软骨细胞出现。骨膜划痕模型组小鼠损伤后第7 d在损伤部位出现新生软骨组织构成的软骨痂,并有部分软骨细胞已分化为成熟软骨细胞。损伤后第10 d软骨痂中心区域软骨基质溶解,第14 d后新生小梁骨出现,逐渐替代软骨组织。损伤后第21 d,软骨痂已基本被骨小梁替代。在修复过程中,首先出现软骨基质形成的骨痂组织,随后骨化中心形成,骨性骨痂组织逐渐替代软骨,完成骨修复。[结论]成功构建了以膜内成骨方式愈合的骨修复模型和以软骨内成骨方式愈合的骨修复模型,为今后深入研究骨愈合机制提供了基础。
- 张洪洋杨柳韩跃虎刘建罗卓荆
- 关键词：膜内成骨软骨内成骨骨折愈合
- 人骨髓间充质干细胞中Notch信号上调对破骨细胞增殖的调控被引量：5
- 2014年
- 目的通过研究Notch信号上调的人骨髓间充质干细胞(human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,hBMSCs)对破骨细胞增殖调控的机制,探讨Notch信号在成骨-破骨偶联中的作用。方法用装载Notch信号胞内域NICD1的慢病毒载体(Lentivirus,Lv)转染hBMSCs,收集其分泌的条件培养液(Conditioned Medium,CM)。培养前破骨细胞系RAW264.7,模拟共培养环境。定量RT-PCR和ELISA测定转染前后hBMSCs表达和分泌的M-CSF的情况。cck-8和单板克隆试验测定RAW264.7的增殖情况。结果转染慢病毒后,hBMSCs表达和分泌的M-CSF均有所上调(分别为P<0.01和P<0.05);CCK-8和单板克隆试验的结果显示hBMSCs分泌的CM使RAW264.7的细胞数量增加(均为P<0.01)。结论 Notch信号上调的hBMSCs可以通过影响M-CSF的表达和分泌,作用于破骨前体细胞,促进其增殖。
- 魏铂沅杨柳高博史淇月黄强韩跃虎罗卓荆刘建
- 关键词：NOTCH信号人骨髓间充质干细胞破骨细胞
- 糖皮质激素与卵巢摘除后对大鼠骨量及骨代谢影响的对比研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨不同剂量糖皮质激素(GC)对大鼠骨量及骨代谢的影响,以及比较GC诱导骨质疏松模型(GICP模型)与卵巢摘除骨质疏松模型(0VX模型)对大鼠骨量及骨代谢影响的区别。方法 75只4个月龄雌性SD大鼠。随机分成五组,A组为正常对照组(Sham组,生理盐水灌胃);B组为低剂量GC组(泼尼松龙每天2.5 mg/kg)灌胃;C组为中剂量GC组(泼尼松龙每天5 mg/kg灌胃);D组为高剂量GC组(泼尼松龙每天10 mg/kg灌胃);E组为卵巢切除组(OVX组)。每天1次,GC组连续灌胃12周。分别于灌胃/去势后第4、8、12周从每组中各随机抽出5只SD大鼠,处死。取股骨干骺端进行不脱钙骨制片;利用显微CT扫描大鼠腰1段;利用酶联免疫吸附测定法(Elisa)检测静脉血中TRACP、G-ALP、BGP及尿液中DPD。结果 (1)各实验组4周后骨小梁排列渐稀疏,数目开始减少,小梁明显变细,间距加宽。随着给药时间的延长,改变更加明显;(2)骨密度检测:与对照组相比,GC低剂量组骨流失从给药后第8周开始明显(P<0.05),而GC中剂量和高剂量组骨流失从给药后4周就开始显现(P<0.05)。中剂量组与高剂量组各时间段差异均无统计学意义(P>0.05);与中等剂量和高等剂量相比,去势组第4周骨量流失差异有统计学意义(P<0.05),第8、12周差异无统计学意义(P>0.05)。(3)骨代谢生化指标的测定结果 :灌胃及摘除卵巢4周后,C组、D组、E组骨形成标记物(G-ALP、BGP)、骨吸收标记物(TRACP、DPD)与正常对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 (1)大鼠骨量的流失可随着糖皮质激素剂量的增加而增加(呈浓度依赖性)。(2)在OVX模型中,骨重建能力上升,而在GIOP模型中,骨重建能力下降。
- 宋佳峻罗卓荆刘建杨柳
- 关键词：糖皮质激素雌激素
- 雌激素通过调节EphB4/EphrinB2信号参与破骨细胞分化被引量：8
- 2014年
- 目的研究雌激素通过调节EphB4/EphrinB2信号通路对破骨细胞分化的影响。方法 (1)采用RANKL诱导法培养卵巢摘除骨质疏松模型(OVX)组和假手术(Sham)组小鼠的破骨细胞,于第10天提取两组细胞的RNA和蛋白质样品,通过RT-PCR和Western blot检测细胞EphrinB2表达的变化;(2)采用雌激素及雌激素拮抗剂分别诱导培养RAW264.7破骨细胞,培养第8天提取RNA和蛋白质样品,利用RT-PCR和Western blot检测细胞EphrinB2表达的变化;(3)在OVX模型组小鼠的破骨细胞培养中添加EphrinB2配体EphB4-Fc片段,通过RT-PCR检测破骨细胞标志物的表达和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并计数,观察破骨细胞分化能力的变化。结果卵巢摘除骨质疏松模型组小鼠EphrinB2的表达量低于假手术组(P<0.01);雌激素拮抗剂组EphrinB2的表达量低于对照组(P<0.01),而雌激素组EphrinB2的表达量高于对照组(P<0.05);给予EphrinB2的配体EphB4-Fc片段后,OVX组小鼠的破骨细胞标志物表达量降低(P<0.01,P<0.001),TRAP染色阳性细胞数减少。结论雌激素可以通过调节破骨细胞EphrinB2的表达影响破骨细胞分化,采用EphB4-Fc片段处理后,OVX组小鼠增强的破骨细胞分化受到抑制。
- 史淇月杨柳魏铂沅范金柱王龙颉强刘建罗卓荆
- 关键词：雌激素破骨细胞EPHB4EPHRINB2
