国家自然科学基金(30270538)
- 作品数：6 被引量：44H指数：4
- 相关作者：姜勇刘靖华钟田雨唐靖刘亚伟更多>>
- 相关机构：南方医科大学中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 髓样分化蛋白-2在识别和转导内毒素信号中的作用被引量：7
- 2007年
- 脂多糖(LPS)通过TLR4介导细胞炎症反应.研究表明,髓样分化蛋白-2(MD-2)通过与TLR4形成复合物参与LPS诱导的细胞信号过程.TLR4/MD-2复合物中的MD-2结合LPS后,引起TLR4低聚化,进而激发下游信号.MD-2合成后,大部分在内质网/高尔基体和TLR4结合,然后以TLR4/MD-2复合物的形式在细胞表面表达.这既能调节TLR4的胞内分布,又能辅助TLR4识别LPS.还有一部分MD-2释放到血浆中,形成可溶性的MD-2(sMD-2).sMD-2在CD14参与下,能结合血浆中的LPS,形成LPS-sMD-2复合物从而辅助只表达TLR4而不表达MD-2的细胞识别LPS,但过度表达的sMD-2又能抑制LPS信号.MD-2在TLR4介导的内毒素识别和信号转导过程中发挥了重要的调控作用.
- 钟田雨刘靖华姜勇
- 关键词：信号转导
- 人Toll样受体4胞浆内段融合蛋白表达载体的构建与表达被引量：3
- 2003年
- 目的 :构建人 Toll样受体 4胞浆内段 ( h TL R4C) His融合蛋白表达载体并在原核表达与纯化 ,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增 h TL R4基因编码区的胞浆内段 ,并将其重组于 p ET Dsb A2 .0载体中。重组质粒经酶切、序列鉴定分析后 ,转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3)。结果 :用异丙基β D硫代半乳糖 ( IPTG)诱导产生 h TL R4胞浆内段的 His Dsb A融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 42 kd的融合蛋白。结论 :本研究成功地构建了 h TL R4胞浆内段融合蛋白表达载体并获得高效表达 ,为进一步研究提供了重要的实验材料。
- 刘靖华孙学刚李志杰秦清和龚小卫邓鹏刘亚伟王静珍赵克森姜勇
- 关键词：TOLL样受体融合蛋白蛋白表达
- 利用荧光共振能量转移技术研究活细胞TLR4与MD-2作用结构域被引量：6
- 2009年
- 脂多糖(LPS)的识别和信号转导是宿主发生防御反应的关键,Toll样受体4(TLR4)与髓样分化蛋白-2(MD-2)形成复合物在LPS的识别及其信号转导中发挥了重要作用.研究TLR4与MD-2结合的功能结构域,对于深入了解LPS信号转导机制及其内毒素休克的防治具有重要意义.运用基于强度的三通道荧光共振能量转移技术(FRET)及基因突变和转染技术,研究了活细胞TLR4与MD-2作用的结构域.结果表明:N端Glu24～Met41缺失使TLR4与MD-2结合能力明显下降;LPS刺激后TLR4聚合迅速增加,而缺失Glu24～Met41的TLR4不能聚合.上述结果提示,TLR4的Glu24～Met41不仅是结合MD-2的区域,并且还参与了LPS刺激后TLR4的聚合作用.
- 钟田雨唐靖陈登宇刘亚伟王蔚刘靖华姜勇
- 关键词：MD-2信号转导
- 用FRET技术研究TLR4和MD-2的相互作用被引量：9
- 2006年
- 目的利用荧光共振能量转移(FRET)技术在活体细胞研究人Toll样受体(TLR)4与髓样细胞分化蛋白2(MD-2)的相互作用。方法用PCR方法扩增TLR4编码序列和MD-2编码序列(不包括信号肽序列)并分别亚克隆入带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白和增强型黄色荧光蛋白表达载体(pECFP-C1-SP,pEYFP-C1-SP)中,重组质粒经酶切、序列鉴定分析后分别或共同转染HEK293细胞,用荧光显微镜观察荧光蛋白表达和分布情况,并用常规的方法和受体光漂白的方法对共表达青色荧光蛋白(CFP)-TLR4和黄色荧光蛋白(YFP)-MD-2的细胞进行FRET分析。结果重组质粒在HEK293细胞中得到表达,仅转染pECFP/TLR4或pEYFP/MD-2的细胞可见青色或黄色荧光主要分布在胞质内,以核周较多;而共转染pECFP/TLR4和pEYFP/MD-2的细胞可同时检测到青色和黄色荧光,主要分布在细胞膜,同时胞质也有少量表达。无论是用常规的方法还是受体光漂白的方法,对共表达CFP-TLR4和YFP-MD-2的细胞进行FRET分析结果表明有FRET现象的发生,提示TLR4和MD-2有相互作用并形成复合物。结论本研究为TLR4和MD-2在活体细胞中的相互作用提供了直接的证据。
- 刘亚伟刘靖华唐靖赵清李建军赵明哲李志杰王国军钟田雨邓鹏姜勇
- 关键词：TOLL样受体4荧光共振能量转移
- 人FAT10蛋白过表达诱导饥饿状态下HEK 293细胞发生凋亡被引量：1
- 2007年
- 目的:采用flag标记的人FAT10蛋白研究人FAT10蛋白对HEK293细胞的影响。方法:将FAT10基因片段克隆到载体pcDNA3-flag上,对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,用脂质体转染HEK293细胞,用Western blotting方法检测外源性FAT10正常培养状态和饥饿状态下的HEK293细胞中的表达情况;并用XTT法和DNA ladder法观察正常培养和饥饿状态下HEK293细胞的凋亡情况。结果:重组质粒在HEK293细胞中高效表达,但在正常培养状态下和饥饿状态下表达情况不同。饥饿状态下,过表达FAT10的HEK293细胞存活率显著低于对照细胞,并且出现DNA ladder现象。结论:成功构建了带Flag标签的FAT10真核表达质粒,可在HEK293细胞中高效表达;FAT10过表达促进饥饿状态的HEK293细胞发生凋亡。
- 刘亚伟刘靖华谢汝佳李志杰王国军黄劭唐靖赵明哲孙学刚邓鹏姜勇
- 关键词：HEK293细胞细胞凋亡
- Toll样受体的发现及其研究进展被引量：22
- 2003年
- 李志杰刘靖华姜勇
- 关键词：TOLL样受体内毒素信号转导
