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整合素介导的细胞信号转导研究进展被引量：7: 2005年; 整合素是细胞表面重要的受体,介导细胞-细胞和细胞-细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的粘附。整合素通过与ECM配体结合可活化特定的信号转导途径,引起细胞发生反应,包括形态改变、伸展、迁移、增殖、分化、存活等,从而决定了与细胞粘附相关的多种生物学功能。因此,对整合素介导的信号转导过程的认识将有助于人们对细胞粘附机制和功能的理解。; 刘瑜姜勇; 关键词：整合素信号转导

人IP10启动子红色荧光蛋白报告基因载体的构建及在细胞中的表达: 2007年; 目的:构建IP10启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,为研究细胞内IP10的基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具。方法:采用基因重组技术构建含IP10启动子区的红色荧光蛋白报告基因载体pD sRed1-1-IP10;用脂质体瞬时转染HEK293细胞,观察IP10启动子对脂多糖(LPS)刺激的反应。结果:酶切和DNA测序证明所构建的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的;该表达载体在HEK293细胞静息状态下表达水平很低,经LPS刺激后,在荧光显微镜下可看到高亮度的红色荧光。结论:所构建的IP10启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的,对生理相关刺激有很好的反应,可有效地用于IP10基因表达信号调控机制的研究。; 杨莉徐佳刘志锋黄劭王娟邓鹏姜勇; 关键词：转录启动子红色荧光蛋白基因基因

应激相关的热休克信号转导通路的研究进展被引量：1: 2005年; LI Yu-sheng, JIANG Yong (Department of Pathophysiology and Key Laboratory of Functional Proteomics of Guangdong Province, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China) abtract:A lot of diseases (e.g., acute infarction and infections) and the diversity of harmful environmental changes, including elevating temperature, heavy metals and oxidants damage many kinds of proteins in organism. The denatured proteins usually evoke endogenous adaptive cellular mechanisms called heat shock response. After the activation, heat shock factors (HSFs) bind with heat shock element (HSE). This progress induces heat shock protein (HSP) expression, then facilitates repair of misfolded proteins, and finally inhibits the cell death (both necrosis and apoptosis) pathways. This review will introduce the structures and functions of HSF, HSP and HSE and details on the signaling process of HSP regulation by HSF.; 李煜生姜勇; 关键词：热休克因子热休克蛋白质类信号转导

信号肽-FRET荧光蛋白载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达被引量：1: 2003年; 目的构建带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白(pECFP-C1-SP)和增强型黄色荧光蛋白(pEYFP-C1-SP)的质粒载体,为使用荧光共振能量转移(FRET)技术研究LPS在细胞膜上的受体识别机制提供依据。方法采用点突变技术构建了带TLR4信号肽的载体,用脂质体瞬时转染NIH3T3细胞,观察带信号肽载体和融合蛋白载体在细胞内的表达。结果DNA测序证明所构建的带TLR4信号肽的载体正确;酶切和DNA测序表明融合蛋白载体的构建正确,TLR4信号肽可以使蛋白主要表达在膜上。结论所构建的带信号肽的荧光蛋白载体是正确的,pECFP-C1-SP和pEYFP-C1-SP能够表达在细胞膜上,可有效地应用于膜蛋白相互作用的研究。; 孙学刚宋革刘靖华安海燕李红乐邢飞跃张丽华姜勇; 关键词：荧光共振能量转移信号肽细胞膜

蛋白磷酸酶对丝裂原激活的蛋白激酶信号通路的调节: 2005年; 丝裂原活化蛋白激酶是非常重要的生长信号调节蛋白,是细胞内一类丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶。蛋白磷酸酶通过底物的特异性分为酪氨酸特异性磷酸酶、丝氨酸 /苏氨酸特异性磷酸酶、双位点特异性 (苏氨酸 /酪氨酸 )磷酸酶。其中酪氨酸特异性磷酸酶和双位点特异性磷酸酶的非催化性氨基末端介导的特异性蛋白蛋白相互作用在底物特异性中起关键作用,它们通过与不同底物形成复合物而使蛋白激酶去磷酸化失活,从而对各种蛋白激酶活性进行调节。; 杨丽萍姜勇; 关键词：丝裂原活化蛋白激酶蛋白磷酸酶底物特异性

人His-AWP1融合蛋白表达载体的构建及其在原核生物的表达被引量：7: 2003年; 目的获取人His-AWP1融合蛋白,为下阶段深入研究AWP1的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础方法应用逆转录聚合酶链反府(RT-PCR)法从人ECV304内皮细胞系中克隆AWP1 cDNA,并将其重组于能表达6个组氨酸残基的原核表达质粒DET-14b中。经酶节、序列鉴定,选择正确重组克隆,将其质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用Ni2+-NTA His柱纯化和SDS-PAGE分离蛋门。结果克隆到一个627 bp的AWP1 cDNA片段.重组质粒目的DNA测序正确.纯化出了一个分子量约为38 kD的融合蛋白。结论用基因工程方法在原核细胞表达并成功纯化出His-AWP融合蛋白。; 莫永炎曹永宽刘亚伟龚小卫姜勇; 关键词：ECV304细胞

带Tat标记质粒载体的构建及其转导融合蛋白进入细胞的研究被引量：10: 2003年; 采用点突变技术构建了带 6×His、Tat和Flag多个标记的pET HTF的质粒载体 ,利用基因重组技术构建pET HTF EGFP融合蛋白载体 .酶切和DNA测序证明 ,所构建的pET HTF和pET HTF EGFP载体正确 .BL2 1(DE3)表达融合蛋白 ,用Ni2 + 分离柱纯化His Tat Flag EGFP蛋白 ,并加入培养的NIH3T3细胞 .荧光显微镜观察显示 ,His Tat Flag EGFP融合蛋白进入细胞 .带His、Tat和Flag标记的质粒载体pET 14b HTF表达的融合蛋白能够进入细胞。; 孙学刚宋革刘靖华李红乐邢飞跃张丽华秦清和姜勇; 关键词：质粒载体融合蛋白细胞增强型绿色荧光蛋白蛋白转导

蛋白激酶C对脂多糖诱导的诱导型一氧化氮合酶基因表达的调控作用被引量：8: 2002年; 目的　探讨脂多糖 (LPS)诱导单核巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)基因表达的分子机制。方法　用LPS刺激诱导RAW2 64 .7细胞 ,观察其对蛋白激酶C(PKC)的激活 ,用Griess还原法测定PKC抑制剂对LPS诱导的一氧化氮 (NO)生成作用 ,并用逆转录PCR(RT PCR)研究其对iNOS基因表达的影响 ;构建iNOS荧光素酶报告基因载体 ,用基因转染及报告基因检测等方法研究LPS刺激RAW2 64 .7细胞对iNOS启动子活性的诱导作用及PKC对其影响。结果　LPS刺激RAW2 64 .7细胞引起PKC磷酸化激活和膜移位 (P <0 .0 1 ) ;LPS刺激RAW2 64 .7细胞 1 2h后即可明显诱导NO生成 (30 .1μmol L± 5 .4μmol L ,P <0 .0 1 )和iNOS基因表达 ;PKC抑制剂H 7可抑制NO的生成 (P <0 .0 1 )和iNOS基因表达 ;LPS刺激诱导iNOS启动子的转录活性 [(2 5 .3± 4 .6)相对荧光素酶活性单位 ,P <0 0 1 ] ,用H 7和钙离子通道阻滞剂异搏定均可抑制其转录活性 (P <0 .0 1 )。结论　LPS刺激RAW2 64 .7细胞 ,通过引起细胞内钙增加和PKC激活诱导iNOS基因表达 ,使NO生成增加。; 杜少辉魏志军张悦黄洁刘新陈伟明刘志锋秦清和姜勇; 关键词：脂多糖一氧化氮合酶基因表达

小鼠肝脏磷酸化蛋白质组的二维液相色谱分离被引量：4: 2005年; 目的利用二维液相色谱法分离小鼠肝脏磷酸化蛋白质组。方法取正常小鼠肝脏,裂解肝脏后利用金属磷酸盐亲和层析树脂提取磷酸化蛋白。将磷酸化蛋白用初始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,再将一维收集的pH值在8.5至4.0之间的组分分别进行二维无孔硅胶反相高效液相色谱分离。最后利用ProteoVue软件将二维UV图转换成胶图进行分析。结果成功提取了小鼠肝脏磷酸化蛋白,并在浓缩除盐后通过二维液相色谱分离成功建立小鼠肝脏磷酸化蛋白质组pI/UV图谱。其中,一维色谱聚焦分离pH值在8.5至4.0之间共收集16个组分,每个组分的二维UV图转换成pI/UV胶图。结论磷酸化蛋白纯化技术与二维液相色谱技术的结合是研究磷酸化蛋白质组的有效方法,为下一步鉴定和研究磷酸化蛋白的功能打下坚实的基础。; 黎永明陈腾祥杨丽萍刘亚伟姜勇; 关键词：磷酸化蛋白质组反相高效液相色谱

MAPK的细胞内定位与激活后移位机制被引量：22: 2003年; 信号蛋白的亚细胞定位和激活后移位已成为细胞信号转导研究中的重要内容 .MAPK信号通路是真核细胞中的重要信号转导系统 .MAPK在细胞中有着相对固定的定位 ,在适宜的刺激作用下会移位入核并产生相应的生理效应 .目前认为 ,MAPK的磷酸化状态及与其他蛋白质 ,如上游激酶、磷酸酶和下游底物之间的相互作用 ,可能在其特异性定位与激活后移位中起作用 .MAPK的定位与移位机制的阐明。; 龚小卫姜勇; 关键词：MAPK 细胞丝裂原活化蛋白激酶磷酸化信号转导

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国家自然科学基金(30030060)

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