博士科研启动基金(BSJJ201206)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：张道伟张正玲曾燕玲骆颖钱正敏更多>>
- 相关机构：遵义师范学院广东省农业科学院遵义医学院更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 二斑叶螨几丁质酶基因的克隆及特性分析被引量：2
- 2015年
- 几丁质酶广泛存在于自然界的许多物种,并参与几丁质降解、蜕皮、免疫和致病性等诸多功能。采用同源克隆结合RACE-PCR的方法,首次从螨类中克隆到二斑叶螨几丁质酶基因(Tu Chi)的c DNA全长序列(Gen Bank登录号:JQ041366)。Tu Chi全长1 822 bp,包含3'非翻译区(UTR)为150 bp和5’UTR为52 bp,开放阅读框(ORF)为1 620 bp,编码539个氨基酸。预测的相对分子量为60.7 ku,理论等电点为5.99。二斑叶螨几丁质酶具有几丁质酶典型的结构域,包括1个N-端信号肽序列、1个几丁质催化区域、1个几丁质结合域,以及连接催化区和结合域之间的连接区域。与其他物种几丁质酶进化树比较分析表明,Tu Chi与昆虫几丁质酶家族Group 1具有较高的同源性,推测其与二斑叶螨的蜕皮密切相关。
- 张道伟钱正敏张正玲骆颖
- 关键词：二斑叶螨几丁质酶基因基因克隆结构域
- 二斑叶螨cDNA文库的构建及鉴定被引量：1
- 2013年
- 为研究二斑叶螨发育相关基因的功能，利用TRIzol试剂提取二斑叶螨总RNA，通过SMART技术构建cDNA文库。利用SMARTIVTMOligonucleotide和CDSⅢ／3’PCRPrimer为引物，在反转录酶作用下，合成cDNA第1链，利用LD—PCR方法合成cDNA第2链。合成的双链cDNA经酶切回收后，再连接pDNR—LIB载体，转化大肠杆菌感受态细胞Trans5α，检验库容量和重组效率，并采用PCR方法检测插入cDNA片段的大小。结果表明，构建的二斑叶螨cDNA文库的库容量为3．54×10^6CFU／mL，重组效率达95．8％，插入片段长度在0．3-2．0kb之间。构建的二斑叶螨cDNA文库质量良好，能够为进一步研究二斑叶螨基因的功能奠定基础。
- 张道伟曾燕玲魏福伦周德贵
- 关键词：二斑叶螨CDNA文库滴度
- 二斑叶螨几丁质酶基因的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2015年
- 以制备的二斑叶螨c DNA为模板,克隆二斑叶螨几丁质酶Se Chi基因功能结构域催化区片段,大小为786 bp。将该序列片段克隆到表达载体p ET-32a(+)中,获得多克隆原核表达载体p ET-32a-Tu Chi。重组质粒经酶切测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),经0.6 mmol·L-1IPTG诱导4 h后高效表达约45 ku可溶性重组蛋白;经His亲和层析洗脱和浓缩获得高纯度的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备Tu Chi多克隆抗体。制备的多克隆抗体经Western Blot证实能特异性地识别几丁质酶而不与非特异性蛋白结合。ELISA分析表明制备的抗体效价达1??80 000,效价较高,为进一步研究二斑叶螨几丁质酶相关功能奠定基础。
- 张道伟陈静张正玲曾燕玲郭玉双
- 关键词：二斑叶螨几丁质酶原核表达多克隆抗体
