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广西黄鸡β-防御素Gal-4基因的克隆和体内诱导表达被引量：4: 2006年; 采用RT-PCR方法从广西黄鸡骨髓中扩增了β-防御素Gal-4基因的cDNA片段。序列分析结果表明,获得的广西黄鸡Gal-4基因大小为321 bp,推导的Gal-4由63个氨基酸组成,其中N端20个氨基酸为信号肽,C端38个氨基酸组成Gal-4的成熟肽。另外,分析了Gal-4基因在正常广西黄鸡(对照组)和H9N2禽流感病毒感染的广西黄鸡(感染组)的肺、肝、腔上囊、十二指肠、肾、气管组织中的表达情况。分析结果表明,在检测的6个组织中,肺、十二指肠、肾组织Gal-4基因的表达在感染组和对照组之间没有明显的差别,而在肝、气管和腔上囊组织中的表达有明显差异,感染组比对照组的Gal-4阳性样品数多。在肝组织中,对照组的30个样品检测到26个阳性样品,而感染组的30个样品全都是阳性；在气管组织中,对照组30个样品检测到19个阳性样品,而感染组的30个样品检测到24个阳性样品；在腔上囊组织中,Gal-4基因的诱导表达情况非常明显,对照组30个样品中仅有9个阳性,而感染组的30个样品中有21个阳性。; 谢青梅陈燕珊马静云陈俊伟毕英佐曹永长

5株传染性支气管炎病毒分离株的鉴定和血清分型被引量：10: 2005年; 从四川、重庆和广东3个不同地区,不同时间发病的肉鸡中分离出5株病毒.通过鸡胚发育试验、NDV干扰试验、动物回归试验和感染后鸡血清中抗体水平变化确定这5株病毒均为传染性支气管炎病毒.血清中和试验表明,这5株病毒血清型与北京分离的A2株一致,而与H52、H120、M41、T和Holte株不同.该研究结果证实了鸡传染性支气管炎病毒类4/91毒株在我国华南和西南地区的流行.; 陈峰吴孔兴张齐冯寿华张秀丽廖秋生曹永长; 关键词：传染性支气管炎病毒血清型

禽类的重要免疫因子——鸡β防御素被引量：10: 2005年; 防御素是一种阳离子抗菌肽,是先天免疫的重要分子。鸡的防御素有13种,全部属于β防御素。该文介绍鸡β防御素的基因结构、蛋白质结构、组织分布、表达调控及其生物学功能。研究结果提示,鸡β防御素是一种重要的免疫因子,具有广谱抗病作用。对鸡β防御素的开发利用将主要集中在两个方面:一是作为家禽抗病力的指标之一,在培育家禽抗病品种(品系)方面起辅助作用;一是作为抗菌肽的开发利用。; 陈燕珊谢青梅覃健萍周庆丰曹永长; 关键词：Β防御素

鸡β-防御素-1基因(Gal-1)在大肠杆菌中的融合表达与纯化被引量：5: 2006年; 内源性抗菌多肽防御素是机体先天性免疫系统的重要组成部分,可帮助机体防御外界病原微生物的入侵。鸡β-防御素-1(G a llinac in-1,G a l-1)对许多致病菌都具有杀菌作用,具有很好的研究开发价值。本研究利用PCR技术从重组质粒pGEM-TE asy-ga l-1中克隆出G a l-1基因成熟肽区,将该基因插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-32a(+)-ga l-1,然后用重组质粒转化大肠杆菌BL-21。挑选阳性克隆菌,用浓度为0.5 mm o l/L的IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE电泳显示在目标位置约25kD处出现了条带并用W erstern B lot进行了鉴定。表明G a l-1基因在大肠杆菌以融合形式得到了表达。经灰度扫描显示重组蛋白表达量占细菌总蛋白的15.54%。用50%N i-NTA纯化树脂进行层析纯化,在洗脱液E中出现单一条带。G a l-1多肽在pET-32a(+)质粒表达体系中成功表达为鸡防御素多肽下一步的研究奠定基础。; 张辉华毕英佐曹永长马静云杜礼琴; 关键词：蛋白纯化

鸡白细胞介素-2基因的克隆与酵母表达质粒的构建被引量：5: 2005年; 从经ConA活化的4周龄岭南黄鸡脾脏淋巴细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT PCR)扩增出鸡白细胞介素 2(IL 2)cDNA片断.PCR产物克隆至pGEM TEasy载体,重组质粒命名为IL 2 T,经菌落PCR与限制酶切鉴定,然后测序,结果表明克隆片断长度为432bp,与预期大小一致,为鸡IL 2基因的编码区全长.将IL 2 T克隆重组质粒进行双酶切(ClaI与XbaI),回收IL 2片断插入同样酶切的毕赤酵母表达质粒pPICZα C,构建重组IL 2 C表达质粒,为鸡IL 2在毕赤酵母中的表达奠定基础.; 张辉华毕英佐曹永长马静云周庆丰; 关键词：IL-2 白细胞介素-2 酵母表达表达质粒酶切菌落PCR

鸡β-防御素-1 cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达被引量：17: 2005年; 从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT-PCR)扩增出鸡β-防御素-1(Gallinacin-1,Gal-1)cDNA,将扩增产物与pGEM-TEasy载体相连,经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为198bp,与报道的Gal-1cDNA编码区碱基序列完全相同。分析核苷酸序列表明Gal-1与火鸡异嗜性白细胞肽-1(Turkeyheterophilpep-tides,THP-1)具有85.4%同源性。氨基酸序列方面Gal-1与THP-1同源性最高,为72.7%。将Gal-1基因成熟肽片段插入到酵母表达载体pPICZ-αC,构建重组表达载体pPICZ-αC-gal-1,电转入表达宿主菌X-33,Zeocin抗性筛选重组菌株。挑取阳性菌株经甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE电泳发现在约4.5ku位置出现预期条带。对其抗菌活性检测发现具有抗大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等细菌的活性。反相高效液相色谱表明阳性菌株表达产物与标准品在层析柱中保留时间一致。; 张辉华毕英佐曹永长马静云; 关键词：克隆毕赤酵母

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广东省科技攻关计划(2004A20106001)