宁波市农业科技攻关项目(2011C10003)
- 作品数：2 被引量：26H指数：2
- 相关作者：章红兵王鑫炎吴瑗范红结张涵淞更多>>
- 相关机构：金华职业技术学院上虞市畜牧兽医技术推广中心南京农业大学更多>>
- 发文基金：宁波市农业科技攻关项目浙江省公益性技术应用研究计划项目浙江省重大科技专项基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中非结构蛋白Nsp2表达分析被引量：4
- 2013年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2对病毒复制和致病具有重要作用,本研究旨在分析Nsp2在Marc-145细胞内的分布与表达。构建nsp2含PL2区域基因片段的原核表达载体,重组蛋白纯化后作为免疫抗原,制备Nsp2特异性单克隆抗体。将携带nsp2基因的真核表达载体转染至Marc-145及HEK293细胞,或将PRRSV感染Marc-145细胞后不同时间点收集细胞样品。免疫荧光观察Nsp2在转染细胞中的亚细胞定位,免疫印迹分析Nsp2在真核细胞中的表达。筛选获得了1株稳定分泌特异性抗Nsp2的单克隆杂交瘤细胞株,能用于免疫荧光和印迹分析。重组真核表达质粒转染Marc-145与HEK293细胞后,Nsp2主要定位于细胞质中,免疫印迹检测到约为120与50ku的蛋白条带。PRRSV感染Marc-145细胞4h即可检测到Nsp2的表达,主要定位于细胞核周围,随着感染时间延长Nsp2分布范围逐渐扩大至整个细胞质。病毒感染8h,可检测到120ku左右的Nsp2蛋白条带,感染后12h可检测到70和50ku左右的Nsp2蛋白,且蛋白表达量随感染时间延长显著增多。PRRSV感染细胞中Nsp2的表达与剪切分析,为深入研究该蛋白在病毒复制和致病中的功能奠定了基础。
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- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
